本发明专利技术公开了一种制备抗番鸭细小病毒血清的方法，包括以下步骤：番鸭细小病毒的制备，一免番鸭细小病毒抗原的制备，二免番鸭细小病毒抗原的制备，用二免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗，用一免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗，然后用制备得到的抗原与疫苗免疫番鸭，得到抗番鸭细小病毒的血清，采用本发明专利技术方法制备得到的血清的效价高，对预防和治疗番鸭细小病毒具有显著的疗效，预防率为９６．６％，治愈率７０％左右。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及，属生物
技术介绍
番鸭细小病毒病是侵害雏番鸭的一种急性或亚急性传染病，它具有高度传染性， 发病率和死亡率都很高，常造成严重的经济损失，主要发生于1-3周龄的雏番鸭，故称“三 周病”。临床上以气喘、腹泻、生长迟缓、运动失调和出现神经症状为特征。我国早在1987 年，在福建饲养番鸭的部分地区就发现本病，它具有流行性，以后广东和浙江相继有发病流 行的报道。近几年来，江苏、安徽等地也时有发生。世界上其他国家也有发病流行的报道， 1989年秋，在法国西部集约化养鸭地区饲养的番鸭群也曾暴发本病，死亡率高达80%。对死亡的番鸭如果处理不当，往往造成病毒的蔓延，产生更大的危害，目前社会上 本病尚无特殊的抗病毒药物来防治番鸭细小病毒病。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供。为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案在于采用一种制备抗番鸭细小病毒血清 的方法，包括以下步骤1)从病变的番鸭中获得番鸭细小病毒；2)制备一免番鸭细小病毒抗原；3)制备二免番鸭细小病毒抗原；4)用二免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗； 5)用一免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗； 6)用制备得到的抗原与疫苗免疫番鸭，得到抗番鸭细小病毒的血清。步骤1)所述的番鸭细小病毒的制备方法包括以下步骤A、在无菌的条件下取有典型病变的病鸭的心脏、肝脏、胆囊、肾、脾、胰腺、肠道、十二指 肠、直肠，放入组织机捣碎；B、取粉碎的组织，加入75%生理盐水混勻得到组织悬液，其中粉碎的组织占组织悬液 总重的10% 20%，生理盐水占组织悬液总重的80 90% ；C、取组织悬液放入-20°C -40°C冰箱中使组织液完全冻结为止，然后迅速放入 370C -40°C水浴锅中融化，反复冻融3 5次；D、将反复冻融后的混悬液离心；E、取离心后的上清液用孔径为0.22 um的滤菌膜过滤；F、取除菌后的滤液，分别按每毫升滤液中加入2000单位-2500单位青霉素和2000单 位-2500单位链霉素，然后放入0 4°C冰箱中备用。步骤2)所述的一免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤A、用浓度为0. 75%的生理盐水中稀释步骤1)制备得到番鸭细小病毒，稀释100倍，得到稀释液，B、用0.lml-0. 2ml的剂量接种12 14日龄的鹅胚的绒毛尿囊腔中；C、接种后选取在48 120h之间具有胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒 毛尿膜有轻度水肿的鹅胚，取其尿囊液；D、在每毫升尿囊液中加入2000单位-2500单位的青霉素和2000单位-2500单位链霉 素，即 形成为一免番鸭细小病毒抗原，并将放入冰箱中在0 4°C条件下储藏备用。步骤3)所述的二免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤A、取一免番鸭细小病毒抗原制备中经接种番鸭种毒后死亡的鹅胚体放入组织捣碎 机中粉碎，取粉碎后的组织加入生理盐水混合，其中粉碎的组织占组织悬液总重的10% 20%，生理盐水占组织悬液总重的80 90% ；B、将混合组织悬液进行离心；C、取离心后的上清液，在上清液中按每毫升分别加入2000单位-2500单位的链霉素和 2000单位-2500单位)青霉素，D、再加入总重的0.35%-0. 4%的甲醛，制成灭活疫苗，即为二免番鸭细小病毒抗原，放 入0 4°C冰箱备用。步骤4)所述的番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗的制备方法包括以下步骤按 照佛氏不完全佐剂二免番鸭细小病毒抗原=1:1的比例进行充分混合，即得到番鸭细小病 毒佛氏不完全佐剂疫苗。步骤5)所述的番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗的制备方法包括以下步骤按照 佛氏完全佐剂二免番鸭细小病毒抗原=1:1的比例进行充分混合，即得到番鸭细小病毒佛 氏完全佐剂疫苗。步骤6)所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法包括以下步骤A、选择健康无病的20日龄的番鸭，用一免佛氏完全佐剂疫苗在其颈部、腿部皮下进行 多点注射，注射量均为lml-2ml ；B、7天后用二免佛氏不完全佐剂疫苗进行皮下、腿部多点注射，注射量均为lml-2ml；C、再经7天后用不加佐剂的二免抗原进行皮下、腿部三免，注射量均为lml-2ml；D、三免注射后每隔5天采血一次，并进行抗体效价的检测，30天后当抗体效价在1 64 1 :128范围时，在无菌条件下采集番鸭血；E、将采集的血放入无菌容器中进行自然分离，吸取血清；F、在得到的血清中加入1000单位-2000单位的青霉素和1000单位-2000单位链霉素， 同时加入血清总重量1/10000的柳硫汞，即得到抗番鸭细小病毒的血清；G、将得到的抗番鸭细小病毒的血清分装，经无菌检验、安全检验、效力检验和抗体效价 检测后，冷冻保存。本专利技术有益效果采用本专利技术方法制备得到的血清的效价高，1 64以上，对 预防和治疗番鸭细小病毒具有显著的疗效，预防率为96. 6%，治愈率70%。具体实施例方式实施例1从病变的番鸭中获得番鸭细小病毒 番鸭细小病毒的制备方法包括以下步骤Α、在无菌的条件下取有典型病变的病鸭的心脏、肝脏、胆囊、肾、脾、胰腺、肠道、十二指 肠、直肠，放入组织机粉碎；B、取占组织悬液总量20%的粉碎组织与占组织悬液总量80%的浓度为0.75%的生理盐 水，混勻，得到组织悬液；C、取组织悬液放入-20°C冰箱中冷冻，然后迅速放入37°C水浴锅中融化，反复冻融3次； D、将反复冻融后的混悬液在5000r/min条件下离心20min；E、取离心后的上清液用孔径为0.22 um的滤菌膜过滤；F、取除菌后的滤液，分别按每毫升滤液中加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉 素，得到番鸭细小病毒，然后放入4°C冰箱中备用。实施例2 —免番鸭细小病毒抗原的制备 一免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤A、用浓度为75%的生理盐水中制备得到番鸭细小病毒，稀释100倍，得到稀释液；B、用0.Iml的剂量接种12日龄的鹅胚的绒毛尿囊腔中；C、接种后选取在96h具有胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒毛尿膜有轻 度水肿的鹅胚，取其尿囊液；D、在每毫升尿囊液中加入2000单位青霉素和2000单位链霉素，即形成为一免番鸭细 小病毒抗原，并将放入冰箱中在4°C条件下储藏备用。实施例3 二免番鸭细小病毒抗原的制备 二免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤A、取一免番鸭细小病毒抗原制备中经接种番鸭种毒后死亡的鹅胚体放入组织捣碎机 中粉碎，取粉碎后的组织加入生理盐水混合，其中粉碎的组织占组织悬液总重的10%，生理 盐水占组织悬液总重的90% ；B、将混合组织悬液进行离心，离心条件5000r/min离心20min；C、取离心后的上清液，在上清液中按每毫升分别加入2000单位的链霉素和2000单位 的青霉素，D、再加入总重0.4%的甲醛，制成灭活疫苗，即为二免番鸭细小病毒抗原，放入4°C冰箱 备用。实施例4番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗的制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗的制备方法为取Iml的佛氏不完全佐剂，加入Iml 二免番鸭细小病毒抗原，充分混合，即可。实施例5番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗的制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗的制备方法为取Iml的佛氏完全佐剂，加入Iml—免 番鸭细小病毒抗原，充分混合，即可。实施例6抗番鸭细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备抗番鸭细小病毒血清的方法，所述的制备方法包括以下步骤：１）从病变的番鸭中获得番鸭细小病毒；２）制备一免番鸭细小病毒抗原；３）制备二免番鸭细小病毒抗原；４）用二免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗；５）用一免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗； ６）用制备得到的抗原与疫苗免疫番鸭，得到抗番鸭细小病毒的血清。
【技术特征摘要】
一种制备抗番鸭细小病毒血清的方法，所述的制备方法包括以下步骤1)从病变的番鸭中获得番鸭细小病毒；2)制备一免番鸭细小病毒抗原；3)制备二免番鸭细小病毒抗原；4)用二免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏不完全佐剂疫苗；5)用一免番鸭细小病毒抗原制备番鸭细小病毒佛氏完全佐剂疫苗； 6)用制备得到的抗原与疫苗免疫番鸭，得到抗番鸭细小病毒的血清。2.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于步骤1)所述 的番鸭细小病毒的制备方法包括以下步骤A、在无菌的条件下取有典型病变的病鸭的心脏、肝脏、胆囊、肾、脾、胰腺、肠道、十二指 肠、直肠，放入组织机捣碎；B、取粉碎的组织，加入75%生理盐水混勻得到组织悬液，其中粉碎的组织占组织悬液 总重的10% 20%，生理盐水占组织悬液总重的80 90% ；C、取组织悬液放入-20°C _40°C冰箱中冷冻，使组织液完全冻结为止，然后迅速放入 370C -40°C水浴锅中融化，反复冻融3 5次；D、将反复冻融后的混悬液离心；E、取离心后的上清液用孔径为0.22 um的滤菌膜过滤；F、取除菌后的滤液，分别按每毫升滤液中加入2000单位-2500单位(青霉素和2000单 位-2500单位链霉素，然后放入0 4°C冰箱中备用。3.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于步骤2)所述 的一免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下步骤A、用浓度为0.75%的生理盐水中稀释步骤1)制备得到番鸭细小病毒，稀释100倍，得 到稀释液，B、用0.lml-0. 2ml的剂量接种12 14日龄的鹅胚的绒毛尿囊腔中；C、接种后选取在48 120h之间具有胚体有广泛出血，毛囊出血，肝脏变性和坏死，绒 毛尿膜有轻度水肿的鹅胚，取其尿囊液；D、在每毫升尿囊液中加入2000单位-2500单位的青霉素和2000单位-2500单位链霉 素，即形成为一免番鸭细小病毒抗原，并将放入冰箱中在0 4°C条件下储藏备用。4.根据权利要求1所述的制备抗番鸭细小病毒血清的方法，其特征在于步骤3)所述 的二免番鸭细小病毒抗原的制备方法包括以下...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴红云，韩改会，李建正，
申请(专利权)人：郑州后羿制药有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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