提供抗Ｋ６３连接的多聚遍在蛋白单克隆抗体，及使用该抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗多聚遍在蛋白(polyubiquitin)抗体领域，更具体的说就是不特异 性结合单遍在蛋白(monoubiquitin)的及能区分具有不同异肽键(isop印tide linkage) 的多聚遍在蛋白的抗多聚遍在蛋白抗体。
技术介绍
遍在蛋白(ubiquitin)是一种在诸多细胞途径中具有重要调节作用的小蛋白质。 这些作用中最为人所共知的是遍在蛋白在蛋白降解中的作用，在此遍在蛋白与靶蛋白共价 连接，使得靶蛋白为26S蛋白酶体识别并受之破坏(参见Wilkinson，Semin. Cell Devel. Biol. 11(3) 141-148 (2000))。不同信号传导途径的蛋白激酶调节也与遍在蛋白化作用 有关(参见 Sun 和 Chen, Curr. Opin. CellBiol. 16 119-126 (2004))。例如，经 I κ B 激酶 的I κ B磷酸化作用使I κ B的遍在蛋白化作用得以可能，并随后通过26S蛋白酶体而降 解；由于IkB是NFkB的抑制剂，因此I κ B的降解激活了 NF κ B (Ghosh和Karin，Cell 109(Suppl.) :S81-S96(2002) ；Palombella 等，Cell 78 :773_785 (1994))。遍在蛋白化作用 还介导 DNA 修复(参见 Sun 和 Chen，Curr. Opin. Cell Biol. 16 119-126 (2004))。在 DNA 损伤后，增殖细胞核抗原的(PCNA)单遍在蛋白化作用激活了不论任何DNA损伤都能合成 DNA的耐损伤聚合酶(Stelter和Ulrich，Nature 425:188-191(2003)。其它其中已知涉 及遍在蛋白化作用的生理过程包括细胞分裂、细胞生长、细胞运动和细胞凋亡/细胞死亡 (Johnson, Nat. Cell Biol. 4 :E295_E298 (2002) ；Pickart, Mol. Cell. 8 :499_504 (2001))。遍在蛋白(一种76个氨基酸的蛋白)与靶蛋白的共价连接是一种三步酶促过程 (Pickart, Annu. Rev. Biochem. 70 :503_533 (2001))。首先，在 ATP-依赖性反应中遍在蛋白 激活酶El形成遍在蛋白-El硫酯。在第二步中，遍在蛋白由遍在蛋白-El硫酯转移至遍 在蛋白蛋白偶联酶(E2)家族的的成员。在第三步中，在遍在蛋白蛋白连接酶(E3)的帮助 下，在遍在蛋白羧基末端和靶蛋白上赖氨酸残基的ε_氨基之间形成异肽键。称为去遍在 蛋白酶的酶类从靶蛋白上将遍在蛋白部分除去(Guterman和Glickman，Curr. Prot. P印. Sci. 5 =201-210(2004)) 0遍在蛋白的突出作用在于作为重要的调节分子，人基因组含有许 多涉及遍在蛋白化作用或去遍在蛋白化作用的不同蛋白迄今为止已鉴定了至少40种不 同的E2、500种不同的E3和80种不同的去遍在蛋白酶(Wong等，Drug. Discov. Today 8 746-754(2003))。遍在蛋白含有7 个赖氨酸残基(Lys6、Lysl 1、Lys27、Lys33、Lys29、Lys48 和Lys63)，因此遍在蛋白自身可作为靶蛋白用于遍在蛋白化作用(Peng等，Nat. Biotechnol.21 921-926 (2003) ；Pickart 禾口 Fushman， Curr.Opin.Chem. Biol. 8 610-616(2004))。遍在蛋白蛋白的遍在蛋白化作用后所产生的分子称为多聚遍在蛋白分 子，并可包含两个或更多个遍在蛋白部分。理论上，遍在蛋白的遍在蛋白化作用可在7个赖 氨酸残基中任何一个上发生(Peng等，Nat. Biotechnol. 21 :921_926 (2003))，以致存在具 有异肽键合至遍在蛋白内不同赖氨酸残基的不同种类的多聚遍在蛋白。有可能具有多于 两个遍在蛋白部分的单个多聚遍在蛋白分子可具有多于一种的赖氨酸键。已有研究表明E2酶影响一个遍在蛋白分子与另一个遍在蛋白分子之间所形成的赖氨酸键的类型(Termo 等，Genes to Cells 9:865-875(2004) ；Deng 等(2000) ；Hofmann 和 Pickart (2001))。多 聚遍在蛋白和遍在蛋白都能作为游离分子以及与靶蛋白共价连接的形式存在。像遍在蛋白一样，已在许多细胞过程中发现涉及多聚遍在蛋白，这些过程包括 细胞内运输、细胞内吞作用、基因表达/沉默、蛋白水解、激酶激活作用、翻译和DNA修复 (Hoege 等，Nature 419 135-141 (2002) ；Spence 等，Mol. Cell. Biol. 15 :1265_1273 (1995)； Hofmann和Pickart，Cell 96:645-653(1999)。然而，在相同途径中与单遍在蛋白和单 遍在蛋白化作用相比，多聚遍在蛋白和多聚遍在蛋白化作用可具有显著不同的生理学作 用。例如，当在DNA损伤后PCNA的单遍在蛋白化作用导致易错DNA聚合酶激活时，在 与单遍在蛋白化作用相同残基处的PCNA的多聚遍在蛋白化作用则被观察到能导致易 错 DNA 修复的激活(Stelter 和 Ulrich，Nature 425 188-191 (2003) ；Hoege 等，Nature 419:135-141(2002) ；Spence 等，Mol. Cell. Biol. 15 :1265_1273 (1995)；以及 Hofmann 和 Pickart, Cell 96 :645_653(1999))。甚至连具有不同赖氨酸键的多聚遍在蛋白都显示具有不同的生理学作用。得 到最多研究的两种多聚遍在蛋白是Lys48连接的和Lys63连接的多聚遍在蛋白，对这两 种多聚遍在蛋白的结构研究提出不同赖氨酸连接的多聚遍在蛋白可采用明显不同的构 象，由此容许与所选择的结合伴侣具有不同的相互作用(Termo等，Genes to Cells 9 865-875 (2004))。虽然通过Lys48连接的多聚遍在蛋白的共价修饰通常标志着靶蛋白能 蛋白水解降解，但是存在着一些证据证明Lys48连接的多聚遍在蛋白还可通过非蛋白水 解方式调节某些蛋白(Chau 等，Science 243 1576-1583 (1989) ；Finley 等，Mol. Cell. Biol. 14 5501-5509(1994) ；Flick 等，Nat. Cell. Biol. 6 :634_641 (2004))。与此相反， Lys63连接的多聚遍在蛋白已与多种非蛋白水解的细胞内途径相关，包括DNA修复(表 达K63R-遍在蛋白的酵母细胞是DNA修复缺陷型的)、激酶激活作用、细胞内运输和翻 译(Pickart 禾口 Fushman，Curr.Opin. Chem. Biol. 8 610-616(2004) ；Hicke 禾口 Dunn，Annu Rev. Cell Dev. Biol. 19 141-172 (2003) ；Spece 等，Mo本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特F凯莉，玛丽萨L玛特苏莫托，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US
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