包含非荷电性亲水性嵌段以及侧链的一部分引入了疏水性基团的阳离子性聚氨基酸嵌段的共聚物、及其使用制造技术

本发明专利技术公开了嵌段共聚物，其是含有非荷电性亲水性聚合物链嵌段以及阳离子性聚氨基酸链嵌段的嵌段共聚物。该嵌段共聚物中，亲水性聚合物链嵌段通过共价键而结合在该聚氨基酸链嵌段的主链的任意一方的末端，并且，疏水性基团通过共价键而结合在该聚氨基酸链嵌段中的氨基酸单元的１０％以上、７０％以下的侧链上。本发明专利技术提供该共聚物与作为小分子核酸的ｓｉＲＮＡ形成的在生理条件下稳定的聚集体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术 涉及嵌段共聚物，以及由该共聚物和核酸分子形成的复合体，尤其涉及胶 束型粒子，所述嵌段共聚物包含亲水性聚合物链嵌段以及侧链的一部分引入了疏水性基团 的阳离子性聚氨基酸链嵌段。
技术介绍
以小干扰RNA(SiRNA)、反义寡聚核苷酸为代表的具有生理活性的核酸医药品，被 期待用作针对癌症、病毒性疾病等的新一代治疗药。但是，这些核酸本质上在生物体内不稳 定，并且生物利用率低，因此目前其应用受到限制。为了将核酸医药品应用于更广泛疾病的 治疗，需要能够全身给药的有效且安全的核酸传递系统(参照下述非专利文献1和2)。已 知病毒载体可高效地将核酸传递至靶部位，但因免疫原性、致癌性等而使其临床应用受到 限制(参照下述非专利文献3和4)。因此，由阳离子性聚合物、阳离子性脂质构成的非病毒 载体逐渐受到关注(参照下述非专利文献5和6)。阳离子性聚合物通过静电相互作用与核酸形成复合体，但正因此而在能够有效传 递至靶的粒径的控制和在血液中的稳定性方面存在问题，因此提出了在阳离子性聚合物上 结合聚乙二醇(PEG)等生物体亲和性高的水溶性高分子的方法(参照下述专利文献1、专利 文献2、专利文献3、非专利文献7及8)。这些复合体形成具有含PEG的亲水性壳体与结合 有核酸的芯体的芯-壳型粒子，因而能够控制粒径，但有报告说这种复合体在用于静脉给 药时，会迅速从血液中消除(参照下述非专利文献9和10)，因而期待更加稳定的复合体。概括来说，专利文献1记载了例如将包含亲水性片段和荷电性片段的嵌段共聚物 作为荷电分子即DNA的靶传递用载体，但由该共聚物所形成的核酸复合体有时存在如上所 述的血液中的稳定性问题。专利文献2为了改善上述问题，具体而言，为了使水性溶剂中的 由该嵌段共聚物的多个分子所形成的高分子胶束稳定等，而在该嵌段共聚物的荷电片段中 引入巯基，以使该聚合物分子间形成二硫键。并且，专利文献3中提供了例如通过聚-L-赖 氨酸的侧链的ε-氨基，而引入作为亲水基的PEG链与作为疏水性基团的棕榈酰基而得的 接枝聚合物。另一方面，提出了将作为侧链的疏水性基团即胆固醇，接枝在一端引入了 PEG链 的阳离子性聚合物(例如，PEG化的聚(N-甲基二乙烷胺癸二酸酯、N-methyl diethanamine sebacate))上，以使聚合物胶束稳定的方法(参照下述非专利文献11)。该文献中虽未报 道对血中滞留性的评价，但认为粒子会因疏水性基团的引入而受到一定程度的稳定。但是， 配制该聚合物需要采用非常严格的条件(120°C、24小时)，并且发生聚合物的分解，因此认 为难以稳定控制聚合物的分子量、以及PEG和胆固醇的引入率。此外，该方法中，必须在pH 值为4. 6的酸性条件下配制与核酸的复合体，而DNA在这样的酸性条件下不稳定(参照下 述非专利文献12)。从这些方面出发，在使用该聚合物时可能会产生制剂方面的问题。此 夕卜，该文献所使用的PEG的分子量最大为2000，并且聚合物中的PEG含量为1. 8 8. 2%。认为在该条件下，亲水性壳体的形成不充分，与DNA的复合体的粒径为200nm以上，较大，并 且粒子的ζ电位(zeta potential)反映了芯体的性质，显示为负值或者正值。该性质成 为实现高血中滞留性的障碍(参照下述非专利文献6以及13 17，其也包含与该
相关的其它信息)。专利文献1 日本特开平8-188541号公报专利文献2 日本特开2001-146556号公报专利文献3 :W0 99/61512 非专利文献1 :C. D. Novina, et al.，Nature, 2004，430，161-164.非专利文献 2 Pun, et al. , Journal of Cellular Biochemistry, 2006,98, 14-35.非专利文献3 :R. G. Crystal，et al.，Science，1995，270，404-410.非专利文献4 :S. K. Tripathy，et al. , Nature Medicine，19962，545-550.非专利文献 5:A.de Fougerolles, et al. , Nature Review Drug Discovery, 2007，6，443-453.:S. Akhtar, et al. , Journal of Clinical Investigation, 2007, 117,3623-3632.非专利文献 7 :R.M· Schiffelers，et al.，Nucleic Acids Research, 2004, 32, el49.非专利文献 8 :S. Hu-Lieskovan, et al.，Cancel Research, 2005，65，8984-8992.非专利文献9 :H. K. de Wolf, et al. , International Journal of Pharmaceutics, 2007,331,167-175.:J. D. Heidel,et al. ,proceedings of the National Academy of Sciences,2007，104，5715-5721.非专利文献11 Y. Wang，et al. , Biomaterials, 2007, 28, 5358-5368.非专利文献 12 :Ε· Walter，et al. , Journal of Controlled Release, 1999,61, 361-374.非专利文献 13 :C. Nicolazzi，et al. , Journal of Controlled Release, 2003， 88,429-443.# 专禾I」JC ^ 14 :B. Thompson, et al. , Bioconjugate Chemistry, 2005,16, 608-614.非专利文献 15 :D. Oupicky, et al.，Gene Therapy, 2001,8, 713-724.非 专利 文献 16 :Y. Takakura, et al.，International Journal of Pharmaceutics,1994，105，19-29.非专禾丨J文献 17 :Y. Yamasaki, et al.，Journal of Pharmacology andExperimental Therapeutics，2002，301，467—477.
技术实现思路
如上所述，至今仍在对病毒载体以外的核酸的载体进行各种各样的研究开发或 努力。但是，仍然存在对能够有效用作医疗用材料并且能够将核酸有效传递至目标的载体(vectors或carriers)的需要。例如，非专利文献11中所记载的PEG化的聚(N-甲基 二乙烷胺癸二酸酯)-共聚-((胆固醇基氧代羰基酰胺乙基)甲基双(亚乙基)溴化铵癸 二 酸酉旨((cholesteryloxocarbonylamidoethyl)methylbis (ethylene) ammonium bromide sebacate))所形成的胶束型粒子具有一定的稳定性，但是，从本文档来自技高网...

【技术保护点】
嵌段共聚物，其是含有非荷电性亲水性聚合物链嵌段以及阳离子性聚氨基酸链嵌段的嵌段共聚物，其中，亲水性聚合物链嵌段通过共价键而结合在该聚氨基酸链嵌段的主链的任意一方的末端，并且，疏水性基团通过共价键而结合在该聚氨基酸链嵌段中的氨基酸单元的１０％以上、７０％以下的侧链上。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：片冈一则，西山伸宏，石井笃史，加藤泰己，宫田完二郎，H金，武元宏泰，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]