梯度洗脱多柱分离方法技术

本发明专利技术涉及一种用于将待分离的混合物的级分分离的方法，所述方法包括以下步骤：提供包含至少两个串联连接的色谱柱的装置；在所述装置的单个点处间歇地注射待分离的混合物；在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级分；将洗脱剂注入每根柱中并置换洗脱剂注射点，所述洗脱剂具有不同的洗脱强度。本发明专利技术方法可实现有效的、易于实施的分离。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种通过色谱法用于混合物级分的。技术背景色谱法是一种基于混合物的诸化合物在流动相和固定相(也称为吸附相)之间的 分布差异的分离方法。通过过滤充满吸附相的装置(柱)中的液体、气体或超临界溶剂 分离该化合物。这种方法作为分析技术广泛应用，其目的是对混合物的诸化合物进行定 性和定量。这种方法还可应用。根据需要使用不同的色谱方法，从而达到分子的纯化。可以按照以下几种标准 将这些方法分类方法可以是连续或间歇地；系统可以包含一根或多根柱；洗脱剂的组 成可以是等度的或者可以形成梯度。广泛使用的是洗脱色谱法和分批色谱法。这种方法基于待纯化的混合物在充满 适合的固定相的柱中的间歇注射，所述混合物用洗脱剂过滤，以确保产物在该柱中的迁 移和分离。在柱的出口处抽出分离出的产物。可以在一段周期时间内周期性地重复上述 注射，以在连续的注射的间隔期间保持分离。所谓的分批色谱法是一种广泛使用的方法，尤其是以小规模和中等规模的分批 色谱法。这是一种使用简便(单根柱)的方法且证实通常是有效的，但在产率方面表现 并不是很好。后者通常较低并且提纯出的产物通常被高度稀释在洗脱溶剂中。为了形成移动床(TraeMovingBed)的概念，研发出在洗脱相和吸附相之间形成 逆流的构思。在1961年，出现了一种“模拟移动床” 6MB)的方法，采用这种方法， 可以通过柱之间的精巧的连接(devercoraiection)来模拟固体的运动。这种方法的特征在 于用于引入原料和洗脱剂的点沿主流体的流动方向是周期性递进的，而用于抽出残余物 和提取物的点是按照相同的增量同时递进的。文献EP-A-1716900描述了将驱动力梯度方法合并于SMB方法中。该文献描述 了一种用于含有多种化合物的混合物的连续或准连续纯化的方法。在SMB中采用了多 个区。通过至少两个、优选三个独立的色谱柱并向其中用溶剂引入混合物来完成纯化。 含有多种化合物的混合物至少包括轻质的杂质、待纯化的中间产物和重质的杂质。按照 分批模式中的至少一个步骤或至少一个位置使用柱。在这种模式下，柱的出口用于抽出 中间产物。柱也用在连续或准连续模式的至少一个步骤或至少一个位置中。在这种模式 下，至少一根柱的出口与至少另一根柱的入口流体连通。可以同步或依次地执行分批模 式和连续或准连续模式。在转换之后或在转换的过程中，向与溶剂流动的大致方向相反 的方向移动柱。这种方法的缺点在于需要用于实施该方法的复杂的设备以及用于理解该方法的 模拟工具。本专利技术的目的是为了获得一种性能好同时使用简单的方法。为了达到上述目的，本专利技术提出了一种用于将待分离的混合物的级分分离的方 法，所述方法包括以下步骤-提供包含至少两个串联安装的色谱柱的装置，-在所述装置的单个点处间歇地注射待分离的混合物，-在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级分，-将洗脱剂注入每根柱中并置换用于注射洗脱剂的点，所述洗脱剂具有不同的洗 脱强度。根据一个替换的实施方式，所述用于将待分离的混合物的级分分离的方法包括 以下步骤-提供包含三个串联安装的色谱柱的装置，-在所述装置的单个点处间歇地注射待分离的混合物，-在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级分，-将洗脱剂注入每根柱中并置换用于注射洗脱剂的点，所述洗脱剂具有不同的洗 脱强度。根据一个替换的实施方式，所述待分离的混合物的注射是循环的。根据一个替换的实施方式，所述富集的级分的抽出是循环的。根据一个替换的实施方式，所述用于注射洗脱剂的点的置换是周期性的。根据一个替换的实施方式，连续或间歇地注射所述洗脱剂。根据一个替换的实施方式，间歇地注射至少一种洗脱剂。根据一个替换的实施方式，每种洗脱剂的组成是恒定的。根据一个替换的实施方式，至少一种洗脱剂的组成是互相独立地可变的。根据一个替换的实施方式，异步地置换至少一种洗脱剂。根据一个替换的实施方式，按照流动相的流动方向，至少两根柱将用于注射待 处理的原料的点与用于抽出目标产物的点分开。根据一个替换的实施方式，按照流动相的流动方向，系统的所有柱将用于注射 待处理的原料的点与用于抽出目标产物的点分开。根据一个替换的实施方式，采用选自包括注射环路、注射泵和加压容器的组中 的元件注射待分离的混合物。根据一个替换的实施方式，在被注入所述装置前，所述待分离的混合物在附加 的色谱柱中流通(circulate)。根据一个替换的实施方式，将所述附加的色谱柱插在所述混合物的注射元件和 所述用于将混合物注入装置的单个点之间或位于所述装置的两根柱之间。根据一个替换的实施方式，目标产物中富集的级分的抽出体积是可变的。根据一个替换的实施方式，采用选自包括注射环、注射泵的组中的元件注射待 分离的混合物。根据一个替换的实施方式，在被注入所述装置前，所述待分离的混合物在附加 的色谱柱中流通。4根据一个替换的实施方式，将所述附加的色谱柱插在所述混合物的注射元件和 所述用于将混合物注射入装置的单个点之间或位于所述装置的两根柱之间。根据一个替换的实施方式，每种洗脱剂的组成是互相独立地固定的或可变的。根据一个替换的实施方式，连续或间歇地注射洗脱剂。根据一个替换的实施方式，互相独立地置换洗脱剂。根据一个替换的实施方式，所述方法是循环的。根据一个替换的实施方式，所述装置通常具有至少一个入口和至少一个出口。根据一个替换的实施方式，在位于引入原料的口前面的柱的出口处抽出目标产物。根据一个替换的实施方式，将目标产物中排空的级分重新注入所述装置中。本专利技术还提出了前述的方法用于分离合成分子、天然提取物、通过发酵获得的 蛋白质、通过合成或半合成获得的蛋白质、免疫球蛋白、单克隆抗体、通过发酵获得的 肽、通过合成或半合成获得的肽的用途。附图说明通过阅读本专利技术如下的仅作为例子给出的具体实施方式的详细描述并结合如下 的附图，本专利技术其他的特征和优点将是显而易见的。图1和图2是所述分离方法的操作图3和图4示出了混合物注射装置；图5至图11是化合物的示例性洗脱曲线图12至图15是所述方法的示例性操作图。具体实施方式本专利技术提供了一种用于从待分离的混合物中分离出级分的方法。在包含至少两 个串联安装的色谱柱的装置上实施所述方法。所述方法包括在所述装置的单个点处间歇 地注射待分离的混合物的步骤；在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级 分的步骤；将洗脱剂注入每根柱中的步骤和置换洗脱剂注射点的步骤。这些洗脱剂具有 不同的洗脱强度。所述方法操作简单，可以实现有效分离。所述方法是一种带梯度的多柱分离方法。所述方法是一种非分批的方法。特别 地，所述方法适用于含有至少两种化合物的混合物的分离。所述方法提供的分离利用了 在色谱法的过程中应用的洗脱强度梯度。可以由此纯化的分子的例子为合成分子、天然提取物、通过发酵获得的蛋白 质、通过合成或半合成获得的蛋白质、免疫球蛋白、单克隆抗体、通过发酵获得的肽、 通过合成或半合成获得的肽。可以使用的固定相的例子为多孔固体载体(例如二氧化硅，也称为正相)、接 枝的多孔固体载体(例如所谓的反相)、离子交换树脂、接枝树脂(例如带有蛋白质)。 在更为常见的方式中，所有适于应用流动相的组成梯度的固定相，例如在结合使用表面 活性剂梯度的尺寸排阻色谱法中。流动相的组成梯度可以通过以下各种方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于将待分离的混合物的级分分离的方法，所述方法包括以下步骤：　　－提供包含至少两个串联安装的色谱柱的装置，　　－在所述装置的单个点处间歇地注射待分离的混合物，　　－在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级分，　　－将洗脱剂注入每根柱中并置换用于注射洗脱剂的点，所述洗脱剂具有不同的洗脱强度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 2008-4-3 08018441.一种用于将待分离的混合物的级分分离的方法，所述方法包括以下步骤 -提供包含至少两个串联安装的色谱柱的装置，-在所述装置的单个点处间歇地注射待分离的混合物，-在所述装置的单个点处间歇地抽出目标产物中富集的级分，-将洗脱剂注入每根柱中并置换用于注射洗脱剂的点，所述洗脱剂具有不同的洗脱强度。2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述待分离的混合物的注射是循环的。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述富集的级分的抽出是循环的。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述洗脱剂的注射点的置换是周期性的。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，连续或间歇地注射所述洗脱剂。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，间歇地注射至少一种洗脱剂。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，每种洗脱剂的组成是恒定的。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，至少一种洗脱剂的组成是相 互独立地可变的。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾瑞克瓦雷瑞，埃克托尔奥苏纳桑切斯，米歇尔巴伊，
申请(专利权)人：诺华赛公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]