抗赘生物的可可提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开并要求保护的是例如多酚或原花青素多酚的可可提取物，制备该提取物的方法，及其应用，特别是作为抗赘生物药剂和抗氧化剂的应用。公开并要求保护的是含可可多酚或原花青素多酚的组合物，用该组合物治疗病人的方法。同时公开并要求保护的是一种用于治疗病人的试剂盒，它带有包含可可多酚或原花青素多酚的抗赘生物药剂，以及包含可可多酚或原花青素多酚的冰冻干燥的抗赘生物组合物。此外，公开并要求保护的是本发明专利技术在抗氧化剂、防腐剂和拓扑异构酶抑制组合物上的应用及方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
抗赘生物的可可提取物及其制备方法和应用专利
本专利技术涉及这样一些可可提取物，它们是例如多酚，优选的是富含原花青素(procyanidin)的多酚。本专利技术也涉及这些提取物的制备方法及应用；它们被作为例如抗赘生物(antineoplastic)药剂和抗氧化剂。本专利技术公开中所引用文献的全部出处列在说明书末尾，权利要求之前的“参考文献”部分。这些文献属于本专利
并在此引入作为参考。专利技术背景多酚是一类种类多得惊人的化合物(Ferreira等，1992)，广泛存在于不同的植物中，其中一些进入食物链。在某些情况下，它们代表人类饮食中重要的一类化合物。尽管人们认为某些多酚是没有营养的，但是由于它们可能对健康带来益处，人们对这些化合物还是产生了兴趣。例如，在实验动物研究中，槲皮苷(黄酮类化合物)显示出抗致癌作用(Deshner等，1991和Kato等，1983)。(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素(3-黄烷醇类化合物)显示出抑制白血病病毒逆转录酶的活性(Chu等，1992)。Nobotanin(一种寡聚可水解单宁)也具有抗肿瘤的活性(Okuda等，1992)。统计资料表明，日本产茶区的胃癌死亡率明显较低。据报导，表棓儿茶素棓酸盐是绿茶中抑制小鼠皮肤瘤的药物活性成分(Okuda等，1992)。鞣花酸对不同动物肿瘤模型也具有抗致癌活性(Bukharta等，1992)。最后，原花色青素(proanthocyanidin)寡聚物由Kikkoman公司为我们申请了专利，用作抗诱变剂。其实，最近在第202届美国化学学会国家会议上已提出了食物中的酚类化合物的范围和它们对实验动物模型中肿瘤发育的调节作用(Ho等，1992；Huang等，1992)。但是，这些报道没有讲述或建议可可提取物、任何一种制备该提取物的方法或可可提取物的任何一种作为抗赘生物药剂的应用。由于未发酵的可可豆含有丰富的多酚，所以本专利技术人考虑到通过从可可中提取化合物并筛选提取物的活性，可以找到可可提取物(例如可可中的化合物)的相似的活性和应用。国家癌症研究所从各种可可和Herrania中筛选抗癌活性物质，作为他们的庞大的天然产品筛选计划的一部分。据报导，可可组织的一些提取物活性低，于是工作没有深入进行。因此，在-->抗赘生物或抗癌领域，可可和它的提取物并不被认为是有用的；也就是说，抗赘生物或抗癌领域的经验使得该领域的技术人员没有把可可和它的提取物用于癌症治疗。由于发展了一些用于研究可可多酚在味道形成中的作用的分析方法(Clapperton等，1992)，本专利技术人决定用相似的方法来制备用于抗癌筛选的样品，而与抗赘生物或抗癌领域的知识不同。另人惊讶的是，与本领域的知识(例如国家癌症研究所的筛选方法)不同，本专利技术人发现含有原花青素的可可多酚提取物明显地具有抗癌或抗赘生物药剂的作用。此外，本专利技术人证明含有原花青素的可可提取物可用作抗氧化剂。专利技术目的和专利技术概述本专利技术的一个目的是为制备可可提取物提供一种方法。本专利技术的另一目的是提供一种可可提取物。本专利技术的另一目的是提供一种抗氧化剂组合物。本专利技术的另一目的是表明DNA拓扑异构酶II的酶活性的抑制。本专利技术的另一目的是为肿瘤或癌症治疗提供一种方法。本专利技术的另一目的是提供抗癌、抗肿瘤或抗赘生物的组合物。本专利技术的另一目的是提供制备抗癌、抗肿瘤或抗赘生物的组合物的方法。本专利技术的另一目的是提供用于肿瘤或癌症治疗的试剂盒。人们惊讶地发现可可提取物具有抗癌、抗肿瘤或抗赘生物活性；或者，它是一种抗氧化剂组合物，或它能抑制DNA拓扑异构酶II的酶活性。因此本专利技术提供一种基本上纯的可可提取物。该提取物优选地含有多酚，例如富含可可原花青素的多酚，例如至少一种原花青素的多酚，其中原花青素选自：(-)表儿茶素、原花青素B-2、原花青素寡聚物2-12优选2-5或4-12、原花青素B-5、原花青素A-2和原花青素C-1。本专利技术也提供一种抗肿瘤、抗癌或抗赘生物组合物，或抗氧化剂或DNA拓扑异构酶II抑制剂组合物，该组合物包含基本上纯的可可提取物或合成的可可多酚(例如富含原花青素的多酚)和合适的载体。该提取物优选地含有可可原花青素。优选地通过如下方法得到可可提取物：将可可豆变成粉末，将粉末脱脂，从粉末中提取活性化合物。本专利技术还涉及一种用于治疗需要用抗癌、抗肿瘤或抗赘生物药剂或抗氧化剂或DNA拓扑异构酶II抑制剂治疗的病人的方法，该方法包括给病-->人施用一种组合物，这种组合物包含有效量的基本上纯的可可提取物或合成的可可多酚或原花青素和载体。可可提取物可以是可可原花青素；优选地通过将可可豆变成粉末，将粉末脱脂和从粉末中提取活性化合物而获得。此外，本专利技术为需要用抗癌、抗肿瘤或抗赘生物药剂或抗氧化剂或DNA拓扑异构酶II抑制剂治疗的病人提供了一种试剂盒，该试剂盒包含基本上纯的可可提取物或合成的可可多酚或原花青素，以及用于与提取物或合成的多酚或原花青素混合的合适载体。这些目的以及其它目的及实施方案将在下面的专利技术详述中公开或是显而易见的。附图简述参照附图可更好地理解下面的专利技术详述：图1给出了可可原花青素粗提物体的典型凝胶渗透色谱；图2A给出了显示从未发酵可可中提取的可可原花青素的分离(洗脱曲线)的典型反相HPLC色谱；图2B给出了显示从未发酵可可中提取的可可原花青素的分离的典型正相HPLC色谱；图3给出了几个典型的原花青素的结构；图4A-4B给出了五个用于筛选抗癌或抗赘生物活性级分的典型HPLC色谱；图5和6A-6D给出了可可提取物和癌细胞ACHN(图5)以及PC-3(图6A-6D)(存活率对剂量，μg/ml)；M&M2 F4/92，M&MA+E U12P1，M&MB+E Y192P1，M&MC+E U12P2，M&MD+E U12P2的剂量-反应关系；图7A-7H给出了可可原花青素级分A、B、C、D、E、A+B、A+E、A+D和PC-3细胞系(存活率对剂量，μg/ml)；MM-1A 0212P3、MM-1B 0162P1、MM-1C 0122P3、MM-1D 0122P3、MM-1E 0292P8，MM-1 A/B 0292P6，MM-1 A/E 0292P6，MM-1 A/D 0292P6的典型剂量-反应关系；图8A-8H给出了可可原花青素级分A、B、C、D、E、A+B、A+E、D+E和KB鼻咽/宫颈癌(Nasopharyngeal/HeLa)细胞系(存活率对剂量，μg/ml)；MM-1A092K3，MM-1B 0212K5，MM-1C 0162K3，MM-1-->D 0212K5，MM-1 E 0292K5，MM-1 A/B 0292K3，MM-1 B/E 0292K4，MM-1 D/E 0292K5的典型剂量-反应关系；图9A-9H给出了可可原花青素级分A、B、C、D、E、B+D、A+E、D+E和HCT-116细胞系(存活率对剂量，μg/ml)；MM-1C 0192H5，D 0192H5，E 0192H5，MM-1 B&D 0262H2，A/E 0262H3，MM-1 D&E0262H1的典型剂量-反应关系；图10A-10H给出了可可原花青素级分A、B、C、D、E、B+D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基本上纯的可可提取物，其包含可可多酚。

【技术特征摘要】
US 1994-10-3 08/317,2261.一种基本上纯的可可提取物，其包含可可多酚。2.权利要求1的提取物，其制备过程包括：把可可豆粉碎成粉末，对粉末进行脱脂和从粉末中提取并纯化可可多酚。3.权利要求2的提取物：其中把可可豆粉末的过程包括:将豆和果肉冻干，从冻干的团块中去除果肉，去除冻干的可可豆的壳：研磨去壳的豆。4.权利要求2或3中任一权项的提取物，其中的过程还包括用凝胶渗透色谱和/或用制备型高效液相色谱(HPLC)纯化提取物5.权利要求4的提取物，其含有至少一种可可原花青素多酚，所述可可原花青素选自：(-)-表儿茶素，原花青素B-2，原花青素寡聚物4到12，原花青素B-5，原花青素A-2和原花青素C-1。6.一种抗赘生物组合物，其包含基本上纯的可可提取物或合成的可可多酚，和合适的载体。7.权利要求6中的抗赘生物组合物，其包含含有可可原花青素的基本上纯的可可提取物。8.权利要求7的抗赘生物组合物，其中可可原花青素的制备过程包括：把可可豆粉碎成粉末，对粉末进行脱脂和从粉末中提取可可原花青素。9.权利要求8的抗赘生物组合物，其中把可可豆粉碎成粉末的过程包括：将豆和果肉冻干，从冻干的团块中去除果肉，去除冻干的可可豆的壳，研磨去壳的豆。10.权利要求8或9中任一权项的抗赘生物组合物，其中的过程还包括用凝胶渗透色谱和/或用制备型高效液相色谱(HPLC)纯化提取物11.权利要求10的抗赘生物组合物，其含有至少一种可可原花青素多酚，所述可可原花青素选自：(-)-表儿茶素，原花青素B-2，原花青素寡聚物4到12，原花青素B-5，原花青素A-2和原花青素C-1。12.一种用于治疗需要用抗赘生物药剂治疗的病人的方法，其包括给病人施用一种抗赘生物组合物，这种组合物包含有效量的基本...

【专利技术属性】
技术研发人员：小LJ罗曼兹耶克，小JF汉默斯通，MM布克，
申请(专利权)人：火星有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]