人胎盘抗衰老活性蛋白及其分离方法和应用技术

本发明专利技术公开了人胎盘抗衰老活性蛋白及其分离方法和应用，其氨基酸序列为ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。其分离或克隆方法包括：（１）克隆人靶标基因或靶标基因结构域；（２）在细菌、酵母或真核细胞中，建立高通量筛选平台；（３）建立人胎盘ｃＤＮＡ文库；（４）将所建立的人胎盘ｃＤＮＡ文库导入步骤（２）所构建的高通量筛选平台，采用蛋白折叠和相互作用的可视化方法，筛选引起靶标基因或靶标基因结构域的蛋白质折叠变化的人胎盘蛋白，即得。本发明专利技术人胎盘活性蛋白具有体外扩增骨髓造血干／祖细胞细胞具有有效而价廉的特点。本发明专利技术人胎盘活性蛋白能使小鼠的寿命增加大约１５％，可用于制备抗衰老或抗氧化药物或保健品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗衰老活性蛋白，尤其涉及一种从人胎盘中所分离、克隆的具有 调控细胞自我更新功能的活性蛋白，本专利技术还涉及该活性蛋白的分离、克隆方法，本专利技术进 一步涉及该活性蛋白在抗衰老中的应用，属于抗衰老活性蛋白领域。
技术介绍
人胎盘含有多种原始生命活性物质和营养成分，更重要的是它含有人体干细 胞-人体起源细胞发生和发展所需的全部活性物质和全部营养成分。干细胞具有自我复制 和多分化潜能的能力，能形成人体各种组织器官的细胞，能定向恢复人体受损、衰老、退化 和病变的细胞、器官和组织。干细胞有望解决人类面临的许多医学难题，具有不可估量的医 学价值，成为本世纪最重要的生物治疗手段。美国《时代》杂志在2007年评出了当年十大科学发现，其中的发现之一就是两本 权威期刊《Cell》及《Science》在2007年11月20日同时刊出来自美国及日本两个研究团 队的一项报告，证实皮肤细胞经过“基因直接重组后可以转化成为具有胚胎干细胞特性的 细胞。这项发现一方面解决了利用胚胎进行干细胞研究的道德争议，另一方面也使得干细 胞研究的来源更不受限。这两个研究团对分属于日本京都大学及美国威斯康辛大学麦迪逊 分校的两个团队虽然独立研究，但使用的方法几乎完全相同，更巧合的是竟然同时分别被 两本期刊审核通过，证明基因直接重组技术的确有效。他们所使用的方式都是利用病毒将 四个基因送入皮肤细胞，促使普通的皮肤细胞产生变化，最后成为带有胚胎干细胞性质的 细胞，称为诱导式多能性干细胞。在这两个研究团队中，日本京都大学山中伸弥发现只需要将四个基因0ct3/4， Sox2, c-Myc, Klf4送入已分化完全的小鼠纤维母细胞，即可以把纤维母细胞重新设定变 回具分会全能性的类胚胎干细胞“诱导式多能性干细胞”。而美国威斯康辛大学的汤姆森 (JamesThomson)研究团队则利用了 0CT4，S0X2，NANOG，and LIN28四个核心基因，同样也可 以将人类体细胞重新设定变回干细胞。既然生命体最初是从一个干细胞发育而成，干细胞的万能分化和再生特又使干细 胞具有特殊的重要意义，那么干细胞基因家族可是说是生物机体里最重要的基因家族了， 因为干细胞具有再生和惊人的分化能力，是很多组织，器官和细胞的根源和起始。根据山 中伸弥教授和汤姆森教授团队的研究最初需要四个诱导式多能性干细胞核心基因0ct3/4， Sox2, c-Myc，Klf4或者0CT4，S0X2，NANOG，LIN28。但是最近德国马普研究所舒乐教授(Hans R. Sch51er)团队发表在《Cell》上的文章把这项工作推向了更进一步，他们只用了一个基 因0CT-4就成功的在体细胞中诱导出了多能性干细胞iPS ！值得指出的是舒乐教授是在神 经细胞中只用一个0CT4基因就诱导出了多能性干细胞，而神经细胞的分化和发育是所有 组织细胞中很难的一类，这也从另一个方面说明了 0CT4基因的重要性！ 0CT4是参与调控 胚胎干细胞自我更新和维持其全能性的最为重要的转录因子之一，同时也是体外建立诱导 多功能干细胞(iPS)的关键基因。0CT4基因在干细胞的增殖、分化、应激反应、凋亡过程等多个生物学过程中发挥着重要作用。0CT4基因含有一种叫POU的功能区域，POU的意思是 (Pit 0ctUnc),P0U编码的POU蛋白DNA结合蛋白，对维持细胞多能性有重要作用。相信对 与0CT4的研究将会讯速展开，因为0CT4不只是一个干细胞的全能控制基因，也可以说是生 命机体里最重要的一个基因。在动物细胞内和在其正常的生理状况下，大量存在着一些处于无功能状态的、非 结构性的、或仅具有部分结构的蛋白，但这恰恰是它们的一般正常存在状态。一旦他们与其 目标蛋白(偶联蛋白)相接触，这些无序蛋白质立即转变为结构型蛋白。这一过程经常涉 及到细胞功能调节。蛋白-蛋白相互作用中，普遍存在偶联蛋白的折叠和结合；偶联蛋白的 折叠和结合为多细胞生物体提供了重要的有益作用。蛋白质0ct4、Sox2、Klf4、NANOG, c_Myc、LIN28、TOR 在体内的折叠并不是一个独 立的过程，而是与其它众多的蛋白质的相互作用有关；比如分子伴侣，能在细胞内帮助新生 肽链的折叠，而不参予新生肽的最终结构。在试管里对于蛋白质折叠的研究的结果，未必能 够真实地反映蛋白质在体内的折叠过程，例如线粒体内蛋白质的浓度非常高，在试管内是 难以达到如此高的蛋白质浓度的。在高蛋白质浓度下，蛋白质与蛋白质相互作用更易于发 生，酶反应动力学就不适合用米氏方程式来表达，而且平时被忽略的水浓度也会影响酶促 反应；此外细胞不是均勻的容器，细胞内有膜结构与微管系统将它分成许多功能小区。因 此，由某些研究证明有相互作用结构基础的蛋白质，并不能表明这二个蛋白质在细胞内是 否会相遇、或者这种相互作用在细胞内是否确实发生。因此，在整体细胞内进行0ct4、Sox2、 Klf4、NANOG、c-Myc、LIN28、TOR蛋白质与蛋白质相互作用的研究，具有非常重要的意义；在 整体细胞内获得的蛋白质与蛋白质间相互作用的结果，可能更能反映体内这些作用在真实 情况。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种从人胎盘中所分离、克隆出的抗衰老活性蛋白；本专利技术目的之二是提供一种从人胎盘中分离、克隆出上述抗衰老活性蛋白的方 法；本专利技术目的之三是将述抗衰老活性蛋白制备成抗衰老、抗氧化的药物。本专利技术上述是通过以下技术方案来实现的一种从人胎盘中所分离、克隆出的抗衰老活性蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO 1 所示；编码SEQ ID NO :1所示氨基酸的核苷酸序列也当然属于本专利技术的保护之列，此外， 含有该核苷酸序列的表达载体以及含有该表达载体的宿主细胞也属于本专利技术要保护的范本专利技术还提供了一种从人胎盘中分离、克隆出的抗衰老活性蛋白(SEQ ID NO 1) 的方法，该方法包括以下步骤(1)克隆人0ct4、Sox2、Klf4、NAN0G、c-Myc、LIN 、T0R基因，得到靶标基因；或者 克隆人TOR结构域基因，得到靶标基因结构域；(2)在细菌、酵母或真核细胞中，建立高通量筛选平台，用于筛选能在体内与上述 靶标基因或靶标基因结构域相互作用的蛋白；(3)建立人胎盘cDNA文库；(4)将所建立的人胎盘cDNA文库导入步骤(2)所构建的高通量筛选平台，采用蛋 白折叠和相互作用的可视化方法(PNAS. Vol. 100, No. 2，p478_483)，筛选引起靶标基因或靶 标基因结构域的蛋白质折叠变化的人胎盘蛋白，得到人胎盘康衰老活性蛋白。本专利技术将从人胎盘中所分离、克隆到的人胎盘康衰老活性蛋白分别构建其高效表 达的基因工程大肠杆菌、真菌或动物细胞，可实现蛋白的大规模生产和纯化的工艺流程。0CT4, S0X2, c_Myc，Klf4, NANOG, and LIN28可以将人类体细胞重新设定变回干细 胞。本专利技术从人的胎盘组织中，筛选出能与性的0ct3/4，Sox2, c-Myc, Klf4，0CT4, NANOG, LIN28作用的活性蛋白，这些活性蛋白因此具有调控细胞自我更新的功能。本专利技术再从其 中，筛选出那些具有抗衰老作用的活性蛋白，由此开发出应用与延缓衰老和延长生命，与整 个人胎盘生物制剂作用近似本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从人胎盘中所分离、克隆出的抗衰老活性蛋白，其氨基酸序列为ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示。

【技术特征摘要】
1.一种从人胎盘中所分离、克隆出的抗衰老活性蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO 1 所示。2.编码权利要求1所述抗衰老活性蛋白的核苷酸序列。3.含有权利要求2所述核苷酸序列的表达载体。4.含有权利要求3所述表达载体的宿主细胞。5.一种分离、克隆权利要求1所述抗衰老活性蛋白的方法，包括以下步骤(1)克隆人0(^4、5( 2、1(1料、離而6、(；-]\^(；丄1拟8、11( 基因，得到靶标基因；或者克隆 人TOR结构域基因，得到靶标基因结构域...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛龙海，
申请(专利权)人：葛龙海，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]