一种功能食品免疫牛奶制造技术

本发明专利技术公开了一种免疫牛奶，该牛奶是以甲肝、乙肝抗原和幽门螺旋杆菌抗原制备的复合疫苗免疫奶牛而生产的免疫牛奶，具有抗甲肝病毒、乙肝病毒和幽门螺旋杆菌的作用，其免疫活性效价高，特异性强。无任何毒副作用。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种功能食品免疫牛奶，本专利技术还涉及一种制备免疫牛奶的方法，具体涉及以免疫方法生产具有抗病毒和抗幽门螺旋杆菌免疫能力的功能性食品免疫牛奶的方法，属于食品领域。牛奶的营养价值与健身美容价值自古以来一直为人类所重视。在现代生活中，为了提高牛奶的饮用价值与营养价值，特别是因中小学生与老年人的需要，更注重了提高保健价值的研究，在口味、品种与方法上精益求精。以生物科技研制的免疫牛奶，成为当今食品科技的基本方向，是世纪交替时代的最新科技成果。对于免疫牛奶的研究，经历了多年的探索与实践过程。Sharpe-SJ等人以一种多价疫苗为抗原，反复免疫奶牛制成了一种可以降低血浆胆固醇及血压的脱脂免疫奶粉；Ishda-A等人以各种人类肠道杆菌，包括E.Coli,S.typhimurium,S.dysenteriae等26种细菌，为抗原，免疫奶牛，用所得的免疫牛奶让AKR/J小鼠口服，结果表明这种免疫牛奶可以减少细菌从肠道侵袭到其他器官中的数目，加强同肠道相关的淋巴组织对抗肠道细菌侵袭的能力。EP0143345公开了一种超免疫牛奶，可用于治疗心血管疾病和肺部疾病。EP0330521公开了一种抗高血压的免疫牛奶，该文献是利用常规的生物化学方法从牛奶中分离抗高血压因子的方法。尽管以往对免疫牛奶进行了多方面的研究，但是，对免疫牛奶的研究多数只停留在单疫苗免疫或“双抗法”免疫的方法上，实践证明，单个疫苗免疫后效果不佳，产生的抗体主要集中在血液中，乳液中抗体含量不高，所制备的免疫牛奶不能达到实用商业价值。而且，到目前为止，尚未见有关使用采自人体的甲肝、乙肝病毒和幽门螺旋杆菌作为复合抗原来制备免疫牛奶的文献报道。特别是，幽门螺旋杆菌的发现，对治疗该细菌相关性疾病，如胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌等，产生了重大的技术性突破，然而，由于幽门螺旋杆菌的特殊生长环境，到目前为止，也没有找到一种能够对幽门螺旋杆菌具有特异性的抗菌素，来有效的杀死该细菌，给该细菌相关性疾病的治疗带来了许多困难。寻求一种对幽门螺旋杆菌有免疫特异性的活性物质是一种较好的治疗途径。幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,HP)是一种螺旋型的革兰氏阴性微需氧菌，存在于人类的胃部。这种细菌经口侵入人体后存在于胃粘膜上皮表面的粘液层中，能直接穿透这层粘液层粘附于下面的上皮细胞，存活多年甚至使宿主终生携带，在我国感染率达70％以上。在临床及流行病学上具有重要意义。在HP中，有一种大分子蛋白位于其表面，即表面暴露蛋白，也就是幽门螺旋杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),OMP除起到结构作用外，还决定着细菌的活性性质，例如，担负着决定什么物质可以进入细菌，什么物质可以分泌出细胞，以及细菌同它所在环境的相互作用等方面的重要作用，而且，OMP具有较强的免疫原性。尤其是HP外膜蛋白具有抑制人类白细胞趋化的作用，从而干扰机体的免疫功能，这是HP的真正致病机理。HP是通过一种粘附素紧紧地粘附于人胃上皮细胞表面，尤其特异性地粘附于含有甘油脂的受体表面，无粘附素的HP菌株则不象有粘附素的那样粘附紧密，而这粘附素就是OMP成分之一。因此，具有HP特异性抗原的制备非常重要，不仅在HP感染的特异性血清学诊断上有巨大价值，而且在研究HP致病机理，以致于HP免疫制剂的制备也具有重大意义。但是，在HP菌株表面抗原中存在着与空肠弯曲菌的交叉抗原，在组织学检菌和细菌培养的正确性，特别是在HP免疫制剂的制备应用上，受到很大影响。研究表明，第一代全菌抗原和第二代超声粉碎抗原均易与空肠弯曲菌等成分发生交叉反应，因此，目前在提取HP种特异性纯化抗原方面存在一定的难度，限制了幽门螺旋杆菌疫苗的制备，也给具有抗HP活性的免疫牛奶的制备带来了困难。到目前为止，还没有一种能够有效的抗HP免疫制剂，也没有一种抗HP的免疫牛奶问世。本专利技术目的是克服现有技术的缺陷，提供一种能够有效地抵抗甲型肝炎病毒和乙型肝炎病毒以及幽门螺旋杆菌的免疫牛奶；本专利技术的另一个目的是提供一种制备所述抵抗甲型肝炎病毒和乙型肝炎病毒以及幽门螺旋杆菌的免疫牛奶的方法；本专利技术的另一个目的是提供一种制备幽门螺旋杆菌纯化抗原的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种制备免疫牛奶所用的复合疫苗的制备方法。本专利技术免疫牛奶的制备技术方案包括如下步骤一、奶牛质量的挑选选择一至二胎，产后一至二个月的健康并强壮的奶牛，须有防疫证明。特别注意间隔开每头牛的平均干奶期。一般要求奶牛的牛奶日产量不小于15-25KG。二、饲养场的要求符合卫生防疫的要求；饲料充足，新鲜；水质、空气、饲料无污染；有足够的阳光与空地；牛舍卫生，水源充足，排泄冲洗系统良好；通风、冬天保暖；有实验室。三、复合疫苗的制备(一)、乙肝抗原的制备因为乙肝病毒(BHV)目前还不能进行细胞培养，我们的乙肝疫苗制备采用常规方法。由人类无症状HBsAg携带者血浆提取HBsAg，菌种的筛选与纯化非常重要，完全排除外来的和潜在的病毒及各种微生物，经纯化、提炼、层析，除去人血浆蛋白质，纯化出HBsAg，再进行灭活，最后加佐剂吸附后制成，浓度为10-30微克/ML。其基本工艺流程如下人类无症状HBsAg携带者血浆----除纤维蛋白----硫酸铵沉淀----等密度区带离心----速率区带离心----胃蛋白酶消化----灭活----吸附----防腐----疫苗。(二)、甲肝抗原的制备(1)、于甲肝爆发点筛取甲肝患者，筛取甲肝IgM检测阳性者，于急性黄胆出现前，取其粪便。(2)、以PBS洗涤液制成悬液，以PBG沉淀，以差速离心进行抽提，再以超高速离心沉淀，以50倍浓缩于PBS中。(3)、以上初步纯化的提取物直接在分离培养基上划线接种。于牛心、牛脑浸出液琼脂培养，在37℃微需氧条件(75％N2,15％O2,10％CO2)饱和湿度下吸附培养2小时，然后用2％小牛血清及1％乳清蛋白维持。置36℃培养箱中培养。(4)、连续培养5周，每周换维持液一次，最后去维持液，用胰蛋白-EDTA液消化。细胞被离心收集后，以超声破壳处理，抽提HAV。(5)、以上方法连续传15代。每代以直接免疫荧光监视HAV病毒的增值。(6)、以后用32℃继续连续再培养5代。(7)、将上述病毒菌株接种于人胚肺二倍体细胞中，置32℃恒温培养箱中培养，每28天传一代，连续传5代。得甲型肝炎病毒H2减毒株。将病毒减毒菌株冻存在-70℃培养基中。实验证明，用以上方法制取的甲肝减毒疫苗，已不能引起肝细胞病变，失去口服感染的能力，毒力已几乎不存在。人与动物接触后，血清谷丙转氨酶均无异常升高，证明以上疫苗是相当安全的。但却具有相当强的免疫原性，能诱导抗体产生，是一种较为理想的，实用的甲肝免疫疫苗。而且，遗传性相当稳定，连续传代不发生返祖现象。将上述甲肝病毒减毒株于人胚肺二倍体细胞中连续培养2代，溶于含氨基酸的盐平衡溶液中，再经纯化，抽提，消毒，最后制得甲肝疫苗。(三)、幽门螺旋杆菌抗原的制备1、试剂、材料、仪器A、培养基(1)、牛心、牛脑浸出液琼脂(2)、WCG无血培养基(3)、空肠弯曲菌选择性琼脂基础(4)、胎儿弯曲杆菌琼脂基础(Campylobacter AgarBase)以上2、3、4培养基均为美国Sigma公司及美国BIORAD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫牛奶，其特征在于它含有抗甲型肝炎抗体、抗乙型肝炎抗体和抗幽门螺旋杆菌的抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄河，
申请(专利权)人：黄河，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]