用于治疗微生物感染的哺乳动物肽制造技术

本发明专利技术提供可作为抗微生物制剂应用的组合物，其中包括哺乳动物血红蛋白、不含血红素的血红蛋白α和β链、α和β链经ＣＮＢｒ裂解所产生的片段以及相应的合成肽。组合物对细菌和真菌均有抗微生物活性，这种活性与人嗜中性粒细胞中的已知抗微生物肽－组织蛋白酶Ｇ和ａｚｕｒｏｃｉｄｉｎ相当。敏感的微生物包括革兰氏阴性细菌如大肠杆菌和铜绿假单胞菌、革兰氏阳性细菌如金黄色葡萄球菌和粪链球菌、以及真菌类白假丝酵母。本发明专利技术还提供制备这些组合物的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
用于治疗微生物感染的哺乳动物肽本申请要求具有1997年10月8日提出申请的美国临时申请流水号60／061，454的权利(该临时申请已全文引入本文作为参考)。专利
本专利技术涉及治疗哺乳动物(包括人类及其它灵长类)的微生物感染的方法；杀死细菌和真菌的方法；以及用抗微生物有效量的血红蛋白、或此分子的α或β链(不含血红素)、或经溴化氰裂解α和β链而得的多肽片段或其合成片段处理被微生物污染的物质的方法。本专利技术还涉及包含这类蛋白质、多肽或片段的组合物。专利技术背景天然来源的抗细菌肽已有较长历史。1939年Dubos证实某种土壤芽孢杆菌(后鉴别为短芽孢杆菌)产生能阻止小鼠肺炎球菌感染的物质。随后，Hotchkiss＆Dubos纯化出由氨基酸组成的两种物质，其中之一的短杆菌肽成为有实用价值的治疗剂。此后对抗微生物肽的研究鉴别出很多活性试剂(1)。(本申请中很多文献以括号中的阿拉伯数字提及。引用这些参考文献的完整说明按顺序列于本说明书的最后。所有这些参考文献及本申请引用的任何其它参考文献均全文引入作为参考。)很多细菌产生抗微生物肽(细菌素)和蛋白质；革兰氏阴性细菌释放的抗微生物肽比较有效而且作用范围较广(2)。防卫素(defensin)是在嗜中性粒细胞、非人类巨噬细胞和Paneth细胞中发现的小分子抗微生物肽(3)。两栖类的皮肤含有丰富的抗微生物肽，其中分离自滑爪蟾的爪蟾抗菌肽目前已进入临床试验阶段(4，5)。植物形成多种基因编码型抗微生物肽，包括植物抗毒素、PR蛋白和AMP(6，7)。昆虫也显示能合成杀菌肽和杀菌蛋白，如塞各洛比蛾的杀菌肽(8，9，10)和麻蝇类棕尾别麻蝇的幼虫产生的麻蝇毒素(11)。马蹄形鲎的血细胞含有快速修复素(tachyplesin)，而具有抗微生物活性的氨基类固醇物质角鲨胺-->(squalamine)可从白斑角鲨中分离得到(12)。因此，很多抗微生物物质属于“天然”抗生素家族，如杀菌肽、爪蟾抗菌肽、防卫素、serprocidin等等。这些物质在自然界广泛存在，并在从昆虫到两栖类到哺乳动物的各物种中提供抗感染的先天性防御机制。这些物质一般贮存于细胞内，当动物受到微生物攻击时可以诱导并分泌在体内。它们大都通过选择性破坏细菌细胞膜而发挥作用；若不经隔绝，它们中不少对宿主细胞也有毒性(13)。这些化合物有很多已被推荐用作抗微生物制剂(14，15)。血红蛋白(分子量为64，500)由四条多肽链及四个血红素辅基(其中的铁原子为亚铁状态)组成。血红素是由中心含有铁原子的卟啉结构组成的一种金属复合物。被称为球蛋白的蛋白质由两条α链和两条β链组成。人球蛋白有两条各含141个氨基酸残基的α链和两条各含146个残基的β链。人血红蛋白的α和β链氨基酸序列如下：α链1            15               16           30               31           45VLSPADKTNVKAAWG               KVGAHAGEYGAEALE               RMFLSFPTTKTYFPH46           60               61           75               76           90FDLSHGSAQVKGHGK               KVADALTNAVAHVDD               MPNALSALSDLHAHK91          105               106         120              121         135LRVDPVNFKLLSHCL               LVTLAAHLPAEFTPA              VHASLDKFLASVSTV136  141LTSKYRβ链1            15               16           30               31           45VHLTPEEKSAVTALW               GKVNVDEVGGEALGR               LLVVYPWTQRFFESF46           60               61           75               76           90GDLSTPDAVMGNPKV               KAHGKKVLGAFSDGL               AHLDNLKGTFATLSE91          105               106         120               121         135LHCDKLHVDPENFRL               LGNVLVCVLAHHFGK               EFTPPVQAAYQKVVA136      146GVANALAHKYH    (SEQ ID NO: 1)-->血红素(亚铁原卟啉Ⅸ)的结构已众所周知。通过铁原子与组氨酸残基的R基团之间的配位键使每条多肽链结合一个血红素基团。铁原子的第六个配位键可与氧结合。此外，血红蛋白还能转运H+、CO2和NO。具有血红蛋白的所有动物其血红素的结构都相同，但球蛋白链的序列差异较大。如果不考虑这些差异，各物种之间此四聚体的构型十分相似。血红蛋白与氧和二氧化碳的相互作用取决于血红素以及围绕在其周围的残基的状态，并受到异养型配体包括H+、Cl-、CO2、HCO3-和2，3，二磷酸甘油酸的调节。这些配体可调节高亲和力状态(松弛状态或R结构)与低亲和力紧张状态(或T结构)之间的平衡。已有人对血红蛋白的立体化学进行了全面回顾(16，17)。基于血红蛋白的组合物已经开发为血液替代品(18，19)。它们包括含有正确输送氧气所必需之氧合血红素基团的化学修饰型血红蛋白。尽管这类基于修饰型血红蛋白的化合物已作为血液替代品施用，但此前尚无人报道为了同样的目的或其它治疗目的而施用未经修饰的血红蛋白、不含血红素的亚基或片段或其相应合成肽。事实上，不含血红素的α和β亚基不能作为血液替代品使用，因为它们不能结合氧。专利技术简述本专利技术提供一种杀死细菌或真菌的方法，该方法包括使细菌或真菌与抗微生物有效量的哺乳动物血红蛋白、血红蛋白片段或其多肽片段接触，它们选自下组：完整血红蛋白、不含血红素的血红蛋白α链、不含血红素的血红蛋白β链、血红蛋白α-3片段、血红蛋白β-2片段、SEQID NO：3的氨基酸序列、SEQ ID NO：4的氨基酸序列、SEQ ID NO：5的氨基酸序列、SEQ ID NO：6的氨基酸序列、上述蛋白质或其多肽片段的片段，以及它们的组合形式。本专利技术还提供治疗细菌或真菌感染者的方法，包括施用抗微生物有效量的上述蛋白质、多肽和／或片段组合物；处理受细菌或真菌污染的物-->质的方法，包括将这样的物质加入或混合抗微生物有效量的上述组合物)；还涉及上述组合物在细菌或真菌的抗微生物治疗中的应用。本专利技术另提供药物剂型，该剂型包含抗微生物有效量之上述蛋白、多肽和／或片段组合物及药学可接受载体，还提供SEQ ID NO：5氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杀死细菌或真菌的方法，该方法包括使细菌或真菌与抗微生物有效量的选自下组的哺乳动物血红蛋白、血红蛋白片段或其多肽片段进行接触：完整血红蛋白、不含血红素的血红蛋白α链、不含血红素的血红蛋白β链、血红蛋白α－３片段、血红蛋白β－２片段、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３的氨基酸序列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４的氨基酸序列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５的氨基酸序列、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６的氨基酸序列、所述蛋白质或其多肽片段的片段和它们的组合形式。

【技术特征摘要】
US 1997-10-8 60/061,4541．一种杀死细菌或真菌的方法，该方法包括使细菌或真菌与抗微生物有效量的选自下组的哺乳动物血红蛋白、血红蛋白片段或其多肽片段进行接触：完整血红蛋白、不含血红素的血红蛋白α链、不含血红素的血红蛋白β链、血红蛋白α-3片段、血红蛋白β-2片段、SEQ ID NO：3的氨基酸序列、SEQ ID NO：4的氨基酸序列、SEQ ID NO：5的氨基酸序列、SEQ ID NO：6的氨基酸序列、所述蛋白质或其多肽片段的片段和它们的组合形式。2．权利要求1的方法，其中所述血红蛋白、血红蛋白片段或多肽片段均来自人类。3．权利要求1的方法，其中细菌为革兰氏阴性细菌。4．权利要求3的方法，其中革兰氏阴性细菌选自由大肠杆菌和铜绿假单胞菌组成之组。5．权利要求1的方法，其中细菌为革兰氏阳性细菌。6．权利要求5的方法，其中革兰氏阳性细茵选自由金黄色链球菌和粪链球菌组成之组。7．权利要求1的方法，其中真菌为白假丝酵母。8．一种治疗细菌或真菌感染者的方法，包括给予感染者抗微生物有效量的选自下组的哺乳动物血红蛋白、血红蛋白片段或其多肽片段：完整血红蛋白、不含血红素的血红蛋白α链、不含血红素的血红蛋白β链、血红蛋白α-3片段、血红蛋白β-2片段、SEQ ID NO：3的氨基酸序列、SEQ ID NO：4的氨基酸序列、SEQ ID NO：5的氨基酸序列、SEQ ID NO：6的氨基酸序列、所述蛋白质或其多肽片段的片段和它们的组合形式。9．权利要求8的方法，其中所述血红蛋白、血红蛋白片段或多肽片段均来自人类。10．权利要求8的方法，其中细菌为革兰氏阴性细菌。11．权利要求10的方法，其中革兰氏阴性细菌选自由大肠杆菌和铜绿假单胞菌组成之组。12．权利要求8的方法，其中细菌为革兰氏阳性细菌。13．权利要求12的方法，其中革兰氏阳性细菌选自由金色链球菌和粪链球菌组成之组。14．权利要求8的方法，其中真菌为白假丝酵母。15．处理受细菌或真菌污染的物质的方法，包括将抗微生物有效量的选自下组...

【专利技术属性】
技术研发人员：BF哈弗曼，B杜比尼克，
申请(专利权)人：塞拉格姆公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]