一种来源于酿酒酵母的谷氨酸脱氢酶的突变体及其在L-草铵膦合成中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种来源于酿酒酵母的谷氨酸脱氢酶的突变体及其在L‑草铵膦合成中的应用。本发明专利技术通过对谷氨酸脱氢酶与底物结合口袋内的氨基酸残基以及分子隧道内的几何形状进行理性设计分析的突变改造方法对SEQ ID NO.1所示的酿酒酵母来源的野生型谷氨酸脱氢酶进行单位点或多位点突变，相较于野生型谷氨酸脱氢酶，所得到的单位点或多位点突变体的酶活提高显著，应用所述谷氨酸脱氢酶突变体生物催化制备L‑草铵膦酸能够在高立体选择、高转化率、高收率的基础上显著提高底物的投料浓度及转化率，有效解决了现有谷氨酸脱氢酶对2‑羰基‑4‑(羟基甲基膦酰基)丁酸在生物催化中表现出无活性或低活性等问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶突变体及其应用，具体涉及一种来源于酿酒酵母（ saccharomyces  cerevisiae）的谷氨酸脱氢酶的突变体及其在l-草铵膦合成中的应用，属于谷氨酸脱氢酶的突变体及其应用领域。

技术介绍

1、谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase，ec 1.4.1.2–1.4.1.4）来源丰富且多样性，在制备手性l-氨基酸领域具有立体选择性严格、产率高、易分离等显著优势，应用前景非常广阔。因此，利用谷氨酸脱氢酶生物催化2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸在不对称胺化制备l-草铵膦的工艺开发中具有十分重要的意义。

2、中国专利cn107630052a将来源于酿酒酵母（ saccharomyces cerevisiae）的谷氨酸脱氢酶基因和甲酸脱氢酶基因共表达的工程菌全细胞在添加剂苹果提取粉和螺旋藻粉的共同作用下，催化30g/l 2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸生成l-草铵膦酸，l-草铵膦酸最高转化率为95本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种谷氨酸脱氢酶的突变体，其特征在于，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示的谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列进行V378G所获得的突变体，其中氨基酸的英文缩写含义如下：V代指缬氨酸，G代指甘氨酸。

2.一种如权利要求1所述的突变体的编码基因。

3.一种含有权利要求2所述的编码基因的表达盒或嵌合基因。

4.一种含有权利要求2所述的编码基因的重组表达载体。

5.一种含有权利要求4所述的重组表达载体的重组宿主细胞。

6.一种制备如权利要求1所述的突变体的方法，其特征在于，包括：

7.一种如权利要求1所述的突变体、权利要求2...

【技术特征摘要】

1.一种谷氨酸脱氢酶的突变体，其特征在于，所述突变体是将seq id no.1所示的谷氨酸脱氢酶的氨基酸序列进行v378g所获得的突变体，其中氨基酸的英文缩写含义如下：v代指缬氨酸，g代指甘氨酸。

2.一种如权利要求1所述的突变体的编码基因。

3.一种含有权利要求2所述的编码基因的表达盒或嵌合基因。

4.一种含有权利要求2所述的编码基因的重组表达载体。

5.一种含有权利要求4所述的重组表达载体的重组宿主细胞。

6.一种制备如权利要求1所述的突变体的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：季盛，陈建华，奚超群，
申请(专利权)人：绍兴东湖高科股份有限公司，
类型：发明
国别省市：