一种生物素化蛋白质的制备方法及应用技术

技术编号:46610907 阅读:1 留言:0更新日期:2025-10-14 21:09
本发明专利技术公开了一种生物素化蛋白质的制备方法及应用,所述制备方法包括:获取纯化的生物素连接酶;获取携带第一标签的第一蛋白;利用所述生物素连接酶与所述第一蛋白制备工具蛋白,所述工具蛋白连接有生物素,且携带所述第一标签;获取携带第二标签的第二蛋白,所述第二标签与所述第一标签不同;利用第二蛋白与所述工具蛋白制备生物素化蛋白质,所述生物素化蛋白质连接有所述生物素,以及连接有携带第一标签的第一蛋白,且携带所述第二标签。本发明专利技术相比现有技术,间接对第二蛋白进行定点偶联,通过简单的结合反应,就可使工具蛋白结合在第二蛋白带有的第二标签上。该生物素化仅局限于第一标签,蛋白的其余部分未受影响,因而不会影响蛋白的活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物,具体涉及一种生物素化蛋白质的制备方法及应用


技术介绍

1、生物素化(biotinylation)是将生物素以共价键连接到分子(如氨基酸或蛋白质)上的过程。由于生物素很小,生物素化通常快速且具有特异性,不易干扰分子固有功能。生物素与链霉亲和素或抗生物素蛋白的结合具也有极高的亲和力、快速性和高特异性。因此,生物素化被广泛应用于生物医学领域,可作为一种检测系统,将蛋白质标记生物素,就可以和连接了酶(如hrp)的亲和素形成共价键,酶催化底物显色后就可以测定微量抗原/抗体。

2、抗原或抗体上有诸多的化学基团,如胺基、羧基、巯基等等。这些基团有其对应的反应基团,可以相互连接。通过给生物素商代这些反应基团,就可以将其连接到抗原或抗体上。但现有技术中利用化学法标记对目标抗原或抗体生物素化,化学标记是随机标记,是将蛋白n-末端游离胺基及其内部的赖氨酸侧链上的胺基与生物素分子结合,通常一个蛋白质分子会被标记上多个生物素分子,而这其中的一些位点可能是蛋白活性位点,如果蛋白活性位点被遮盖,会影响蛋白活性,抑制抗原抗体结合,影响检测。

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【技术保护点】

1.一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,获取纯化的生物素连接酶,包括:

3.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,获取携带第一标签的第一蛋白,包括:

4.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,利用所述生物素连接酶与所述第一蛋白制备工具蛋白,包括:

5.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,利用所述第二蛋白与所述工具蛋白制备生物素化蛋白质,包括:

6.根据权利要求1所述的一种生物素...

【技术特征摘要】

1.一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,获取纯化的生物素连接酶,包括:

3.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,获取携带第一标签的第一蛋白,包括:

4.根据权利要求1所述的一种生物素化蛋白质的制备方法,其特征在于,利用所述生物素连接酶与所述第一蛋白制备工具蛋白,包括:

5.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员:黄芳王彩虹闫亚茹
申请(专利权)人:南京基蛋生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:

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