【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其是涉及一种通过基因突变来进一步提高无细胞合成体系中蛋白(尤其是毒素及毒素融合蛋白)的合成能力。
技术介绍
1、无细胞蛋白质合成(cell-free protein synthesis,cfps)是一种以外源mrna或dna为模板，在体外条件下的使用酶、氨基酸底物和能量来合成蛋白质的技术。与传统的体内重组表达系统相比，体外无细胞合成系统具有多种优点，如能够直接以pcr产物作为模板同时平行合成多种蛋白质，可开展高通量多肽或蛋白质类药物筛选，此外，体外无细胞合成系统在表达对细胞有毒害作用的多肽或蛋白质的应用方面也具有独特优势。无细胞蛋白质表达系统是基于细胞的蛋白质表达系统的重要补充。
2、现有的无细胞蛋白质合成体系主要可以分为两类：其一是将获得的纯化的蛋白质合成所需的核糖体、酶、trna等按一定的比例进行组合复配，使其获得体外表达蛋白质的能力，即纯化的无细胞蛋白质表达系统(pure)。该系统具有清晰的组分信息，可以方便地、定制化地对配方进行调整以获得不同的蛋白质表达特性，但缺点是制备工艺流程复杂且成本高昂；...
【技术保护点】
1.一种基因工程细胞，其特征在于：所述细胞中的DPH基因表达或活性被降低和/或eEF2的氨基酸序列发生突变；优选地，所述DPH基因的表达量≤10％，较佳地，≤5％，更佳地，≤2％；和/或将DPH基因的表达或活性降低满足以下条件：A1/A0的比值≤30％，较佳地≤10％，更佳地≤5％，更佳地，≤2％，最佳地为0-2％，其中，A1为所述基因工程细胞中DPH基因的表达或活性；A0为野生型DPH基因的表达或活性。
2.根据权利要求1所述的基因工程细胞，所述细胞中的DPH基因的表达或活性被降低通过选自以下组的方式实现：基因编辑、基因突变、基因敲除、基因中断、RNA干...
【技术特征摘要】
1.一种基因工程细胞，其特征在于：所述细胞中的dph基因表达或活性被降低和/或eef2的氨基酸序列发生突变；优选地，所述dph基因的表达量≤10％，较佳地，≤5％，更佳地，≤2％；和/或将dph基因的表达或活性降低满足以下条件：a1/a0的比值≤30％，较佳地≤10％，更佳地≤5％，更佳地，≤2％，最佳地为0-2％，其中，a1为所述基因工程细胞中dph基因的表达或活性；a0为野生型dph基因的表达或活性。
2.根据权利要求1所述的基因工程细胞，所述细胞中的dph基因的表达或活性被降低通过选自以下组的方式实现：基因编辑、基因突变、基因敲除、基因中断、rna干扰技术、或其组合。
3.根据权利要求1或2所述的基因工程细胞，其特征在于：所述dph基因选自dph1～7基因中的一种或多种。
4.根据权利要求1或3所述的基因工程细胞，其特征在于：所述eef2氨基酸序列中的第699位和/或701位发生突变；优选地将第699位的组氨酸(h)突变为甲硫氨酸(m)，和/或将第701位的甘氨酸(g)突变为精氨酸(r)。
5.根据权利要求1-4任一项所述的基因工程细胞，其特征在于：所述细胞中至少包含dph基因被敲除。
6.根据权利要求1-5任一项所述的基因工程细胞，其特征在于：所述dph基因所编码蛋白的氨基酸序列为seq id no:55～61或者为具有与seq id no:55～61所示氨基酸序列≥85％、≥90％、≥95％、≥97％、≥98％或≥99％以上同源性，且具有与seq id no:55～61序列相同活性的多肽；所述eef2的氨基酸序列为seq id no:63或者为具有与seq id no:seqid no:63所示氨基酸序列≥85％、≥90％、≥95％、≥97％、≥98％或≥99％以上同源性，且具有与seq id no:seq id no:63序列相同活性的多肽。
7.根据权利要求1-6任一项所述的基因工程细胞，其特征在于：所述细胞选自选自细菌、哺乳动物细胞、人体细胞、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞之一或其任意组合；优选酵母细胞；进一步优选地，所述的酵母细胞选自毕赤酵母(pichiapastoris)、芬兰毕赤酵母(pichiafinlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(pichia trehalophila)、科克拉马毕赤酵母(pichia koclamae)、膜醭毕赤酵母(pichia membranaefaciens)、微小毕赤酵母(pichiaminuta)、甲醇诱导型酵母(ogataeaminuta)、林氏毕赤酵母(pichia lind...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，熊亮，王海鹏，李兴龙，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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