一种基于滚环扩增RCA与二茂铁酪胺Fc-Tyr沉积双重信号放大的生物传感器、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于滚环扩增RCA与二茂铁酪胺Fc‑Tyr沉积双重信号放大的生物传感器，以Fc‑Tyr分子作为电活性探针，联合RCA级联放大反应，实现对肿瘤标志物m6A‑RNA的高灵敏检测。该生物传感器具有以下显著特点：(1)Fc‑Tyr具有高电化学活性，可作为一种良好的电化学生物传感器电活性探针，并且通过辣根过氧化物酶(HRP)催化原位沉积Fc‑Tyr进行信号放大；(2)RCA反应使核酸序列级联扩增，达到信号放大的效果，联合Fc‑Tyr沉积反应实现传感器检测的双重信号放大，显著提高传感策略的灵敏度；(3)该生物传感平台具有良好的线性范围以及低检测限；(4)m6A‑RNA生物传感器拥有良好的特异性、重现性、稳定性和抗干扰性。(5)该生物传感策略可以应用于细胞样本以及血清样本中的m6A‑RNA定量检测，为临床样本的检测提供新思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物基因，尤其涉及一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr积双重信号放大的生物传感器

技术介绍

1、rna的n6-甲基腺苷(m6a)修饰是指rna上的6-腺嘌呤碱基上的氮原子在甲基转移酶作用下甲基化。m6a是真核生物中研究最广泛的rna修饰之一，也是含量最丰富的rna修饰之一。m6a修饰受到甲基化转移酶和去甲基化转移酶的共同调控。随着高通量测序方法的快速发展，对m6a修饰的rna分子功能的研究得到了进一步发展。有研究发现，脂肪和肥胖相关蛋白(fto)与mrna上的m6a去甲基化酶有关。除此之外，有研究表明rna甲基化在转录后调控中起着至关重要的作用，例如转录剪接、蛋白质翻译等。越来越多的证据表明m6a可以影响靶基因的表达，在分子机制上，m6a几乎参与了所有rna代谢过程,从而调节多种生理过程，包括自我更新、侵袭和增殖。因此，rna的m6a修饰在人体的生理和疾病发展过程中均发挥着重要的作用。研究发现，m6a甲基化在癌症的发生以及发展过程，主要是通过调控癌基因的表达实现的，并且m6a甲基化调控因子发挥着“双刃剑”的作用，它可以促进癌基因的表本文档来自技高网...

【技术保护点】

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2.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增RCA与二茂铁酪胺Fc-Tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的m6A抗体滴加在晾干后在电极表面的抗体浓度为10μg/mL。

3.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增RCA与二茂铁酪胺Fc-Tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的磷酸化挂锁探针P1的引物浓度为1μM。

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【技术特征摘要】

1.一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr沉积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

2.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的m6a抗体滴加在晾干后在电极表面的抗体浓度为10μg/ml。

3.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的磷酸化挂锁探针p1的引物浓度为1μm。

4.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤3在30℃下温育的时间为10h。

5.如权利要求1所述的一种基于滚环扩增rca与二茂铁酪胺fc-tyr积双重信号放大的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述羟基苯甲酸的浓度为1mg/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勇，刘曦宇，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：