糖类蛋白CA72-4制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种糖类蛋白CA72‑4制备方法及应用，所述制备方法包括：将贴壁培养型LS‑174T细胞接种至含5％、2.5％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养，获得低血清贴壁培养型LS‑174T细胞系：将低血清贴壁培养型LS‑174T细胞系接种至无血清悬浮培养基中进行传代培养，获得无血清全悬浮培养型LS‑174T细胞系；悬浮培养LS‑174T细胞系，悬浮培养过程中添加药物，以刺激LS‑174T细胞系分泌CA72‑4；浓缩换液上述培养3‑5天后的细胞上清，获得浓缩的CA72‑4。本发明专利技术构建得到的无血清全悬浮培养型LS‑174T细胞系可适应无血清全悬浮培养，利于培养基中营养物质和细胞充分接触，细胞高密度生长，而且降低了生产过程中细胞培养难度；此外有利于短时间大规模生产，大大减少生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于体外诊断试剂，具体涉及一种糖类蛋白ca72-4制备方法及应用。

技术介绍

1、ls-174t细胞为人结肠癌细胞，该细胞是ls180结肠腺癌细胞株的胰蛋白酶化变种，可生产大量的癌胚抗原(cea)，电镜观察有丰富的微丝和胞浆黏液素液泡。

2、从ls-174t细胞提取的ca72-4抗原是一种由cc49和b72.3两株单抗识别的粘蛋白样的高分子量糖蛋白，分子量为220-400kd。ca72-4是检测胃癌和各种消化液道癌症的化验标志之一，反映肿瘤存在的化学类物质，不存在于正常成人组织，仅见于胚胎组织，正常人血清中含量<6u/ml，异常升高在各种消化道肿瘤、卵巢癌均可产生。对于胃癌的检测特异性较高，以>6u/ml为临界值。因此可借以存在或量变了解肿瘤得到组织发生、细胞分化，以帮助肿瘤的诊断、预后判断以及治疗指导。

3、目前，ca72-4为大分子糖类蛋白，重组蛋白表达难度大，市场上主要从人结肠癌细胞ls-174t提取天然ca72-4抗原，例如antibodies、abbexa以及岱翱生物现有天然提取ca72-4抗原在售。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种糖类蛋白CA72-4制备方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种糖类蛋白CA72-4制备方法，其特征在于，将贴壁培养型LS-174T细胞接种至含5％、2.5％胎牛血清的DMEM培养基中进行传代培养的步骤中，传代次数至少3代，不同浓度的胎牛血清的DMEM培养基中的传代比例为1:(2～5)，传代培养的条件为37℃，5％CO2。

3.根据权利要求1所述的一种糖类蛋白CA72-4制备方法，其特征在于，将低血清贴壁培养型LS-174T细胞系接种至无血清悬浮培养基中进行传代培养的步骤中，传代次数至少3代，每代培养天数3～5d，传代密度0.5*10^6～1...

【技术特征摘要】

1.一种糖类蛋白ca72-4制备方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种糖类蛋白ca72-4制备方法，其特征在于，将贴壁培养型ls-174t细胞接种至含5％、2.5％胎牛血清的dmem培养基中进行传代培养的步骤中，传代次数至少3代，不同浓度的胎牛血清的dmem培养基中的传代比例为1:(2～5)，传代培养的条件为37℃，5％co2。

3.根据权利要求1所述的一种糖类蛋白ca72-4制备方法，其特征在于，将低血清贴壁培养型ls-174t细胞系接种至无血清悬浮培养基中进行传代培养的步骤中，传代次数至少3代，每代培养天数3～5d，传代密度0.5*10^6～1.0*10^6，传代培养的条件为37℃，8％co2，90～120r/min。

4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭静，王彩虹，
申请(专利权)人：南京基蛋生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：