一种基于碳纳米管介导大豆叶片瞬时转化的方法技术

本发明专利技术涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种基于碳纳米管介导大豆叶片瞬时转化的方法。本发明专利技术的方法包括以下步骤：1）种子萌发；2）幼苗生长；3）碳纳米管处理；4）制备碳纳米管/基因复合物（CNT/DNA）；5）将浓度为1‑20mg/L的CNT/DNA复合物喷施在大豆叶片；6）取大豆叶片，检测目的基因是否表达。本发明专利技术建立简单、高效的基于碳纳米管介导的大豆叶片瞬时表达体系，将为优良大豆品种的分子遗传转化研究奠定基础，具有重要的理论意义和应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物基因工程，具体涉及一种基于碳纳米管介导大豆叶片瞬时转化的方法。

技术介绍

1、大豆是重要的粮食和经济作物，由于大豆稳定遗传转化体系周期较长，工作繁琐，因此快速验证大豆基因功能及其调控机理是目前大豆研究工作面临的难题。瞬时转化方法是在较短的时间内将目的基因导入靶细胞中，并获得目的基因在细胞中短暂的高水平表达的技术。目前广泛应用于大豆叶片瞬时表达的方法主要分为农杆菌侵染法及基因枪粒子轰击法；农杆菌侵染法存在物种局限性，基因枪粒子轰击法涉及到昂贵的仪器设备和表达位点零星的限制。

2、碳纳米管（cnt）具有优异的物理化学性能，尺寸小，纵横比高，生物兼容性好，其能够轻易的穿过植物细胞壁，透过细胞膜进入植物体内，碳纳米管可以负载大量的基因进入植物细胞，同时保护基因不被降解。

3、因此，纳米材料介导的植物遗传转化受到广泛关注。纳米材料介导的遗传转化可以避免农杆菌转化带来的缺点，具有成本低、易操作的优势，可以改善现有的基因递送系统。目前，利用碳纳米管在大豆叶片瞬时转化相关应用尚无报道。

4、因此，在大豆叶片瞬时转化效率本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于碳纳米管介导大豆叶片瞬时转化的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3）中，碳纳米管溶液于0.5-2% SDS溶液中分散（w：v=1：2）。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤4）中，SDS-CNT与DNA溶液以1：1-1：5的体积比混匀。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤5）中，CNT/DNA复合物中添加0.05%Silwet溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤6）中，所述的CNT/DNA浓度为1 mg/L-20 mg/L。

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【技术特征摘要】

1.一种基于碳纳米管介导大豆叶片瞬时转化的方法，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3）中，碳纳米管溶液于0.5-2% sds溶液中分散（w：v=1：2）。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤4）中，sds-cnt与dna溶液以1：1-1：5的体积比混匀。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤5）中，cnt/dna复合物中添加0.05%silwet溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤6）中，所述的cnt/dna浓度为1 mg/l-20 mg/l。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，幼苗生长条件为品氏土与蛭石比例为...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜俊波，罗丽秋，母德伟，蒋亨珂，王向前，廖树琳，郭昊昱，张雁鹏，孙歆，杨辉，余靓，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：