甘草黄酮的提取纯化方法技术

种甘草黄酮的提取纯化的方法，包括甘草根干燥、粉碎、溶剂萃取、过滤和浓缩，其特征是溶剂萃取液过滤后用膜进行超滤，再浓缩得产品甘草黄酮。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种甘草黄酮(Glycyrrhiza Uralensis Fisch.，G.lnflata Bat.，G.glabra L.，等甘草)的提取及纯化新方法，本法改革了国内外文献所叙述的以溶剂萃取后相分配及以大孔径树脂吸附杂质等，以获得甘草黄酮，代之以使用膜技术或/和层析进行纯化，使生产工艺大为简便，流程缩短，收率提高，成本降低。此工艺十分繁复，流程多，生产周期长，且得率低(按甘草黄酮含量而浮动)，并要消耗大量溶剂和昂贵的吸附材料。所述的膜分离方法是使用孔径为分子量1000～15000的膜。该超滤压力为1～10公斤(kg)，换言之为0.1-1mPa.。所述的溶剂萃取是用有机溶剂及它们的混合溶剂在回流温度下萃取或0～40℃时冷浸或渗漉萃取，萃取时间为1～48小时。所述的有机溶剂可以是乙醚、乙醇、氯仿、醋酸乙酯、石油醚、苯等。本专利技术的方法中，所述的过滤通常用滤布予以粗过滤就能满足要求。也可以用分子筛、硅藻土或微孔膜进行过滤。所述的浓缩可以是低温浓缩、冷冻干燥、减压浓缩或粉末喷雾干燥的方法。经浓缩所得的甘草黄酮可以进一步柱层析纯化，所述的层析柱可以采用硅胶柱、聚酰胺柱或分子筛柱等柱层析的方法。层析溶剂为包括醇、烷烃、酯、氯代烃，芳香烃等在内的一种或二种混合有机溶剂。此工艺所得产品和旧工艺所得产品，经HPLC和红外、质谱、核磁等光谱数据核证得到确认，无黄酮丢失。本专利技术所采用的工艺大为简便，收率提高。由于节省了大量溶剂和消耗性吸附材料，成本也大为降低。其中，①甘草酸；②芒柄花黄素Formononetin⑧甘草啶Licoricidin；④甘草醇Glycyrol⑤甘草利酮Licoricone⑥光甘草定Glabridine；⑦光甘草醇Glabrol；⑧HISPA光甘草定HISPA Glabridin；⑨4′-O-甲基光甘草啶(4′-O-Methylglabridin)；⑩3′-甲氧基光甘草啶(3′-Methoxyglabridin)。实施例2按实施例1的操作得乙醇提取液，以0.5μM微孔膜作预滤，然后以2000分子量膜进行超滤，(外压4kg，温度25～40℃)滤液经减压(温度35～100℃下)浓缩得产品甘草黄酮2.3公斤。实施例3按实施例1操作，先以水提取除去极性有机物质，干燥后再以乙醇萃取，萃取液以0.5μM微孔膜过滤，然后以10000分子量膜进行超滤，(外压3kg，温度25～30℃)滤液经减压浓缩(温度35～100℃下)，得产品甘草黄酮1.56公斤。实施例45g上述实施例3萃取得到的粗甘草黄酮，用氯仿溶解，加入含250ml聚酰胺柱，然后用氯仿-甲醇(94∶4～80∶20)进行洗脱，得各种活性甘草黄酮，共1.56g(化合物1～10)。实施例55g上述实施例3萃取得到的粗甘草黄酮，用氯仿溶解，加入装有150g硅胶的柱，用氯仿-甲醇(99∶1～90∶10)进行洗脱，得各种(化合物1～10)含量不同的甘草黄酮。实施例6以上实施例1采用西北兰州产甘草所得甘草黄酮经高压液相色谱(HPLC)并和标准样品对照得谱图如附图说明图1所示。HPLC条件如下 仪器Agilent 1100 Series，流速1.8ml/min，柱150×4.6mm 5μ C18， 进样量0.4mg/ml；10μl，流动相CH3CN∶2％CH3COOH＝1∶1， 压力150bar，波长282nm， 滞留时间2.6min。经层析得样品，分析数据如下甘草醇(Glycyrol)紫外，u.vλETOHmaxnm228，247，256inf，349，358inf. 红外，RνKBrmaxcm-13400，2920，1715，1612，1595，1516，1446. 核磁，N.M.Rδ4-DXSOPPm1.62(3H，S，CH3ofγ，γ-dimethylallyl)，1.73(3H，S，CH3ofγ，γ-dimethylallyl)，3.24(2H，d，8，CH2ofγ，γ-dimethylallyl)，3.86(3H，S，Ome)，5.15(1H，b.s，OH-5 and OH-4′，exchangeable with D.Q). 质谱，M.S m/e366(M+). 甘草利酮(Licoricone)紫外，UVλETOHmaxnm(ε)238(20640)，248(19720)，284(10240)，302(7800)；红外，λEtOH-NaoaCmaxnm250，253(inf.)，303(sh.)，330.IRγchclmaxcm-13500，3160，1631，1612，1585，1570；γKBrmaxcm-13140，1628，1611，1584. 核磁NMR(60MC，dδ-DMSO)δ1.63(3H，br.s)，1.69(3H，br.s，-CH2-CH＝C(CH3)2，3.20(2H，br.d，J＝7Hz，-CH2-CH＝C(CH3)2)，3.40(3H，s)(OCH3)，5.14(1H，brt，J＝7Hz，-CH2＝CH-C(CH3)2)，6.35(1H，s，H-3)，6.89(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.96(1H，d.d，J＝9，2.5Hz，H-6)，7.92(1H，d，J＝9Hz，H-5)，8.01(1H，s，H-2)，9.2(1H，br.)，10.6(1H，br.)(-OH，disappeared after the addition of D2O). 质谱，M.S m/e382(M+，base peak)，367(M-CH3，57％)，351(m-och3，44)，327(M-CH＝C(CH3)2，17)，314(M-CHCH＝C(CH3)2，19)，257(25)，137(37).元素分析计算值C22H22O6C，69.10；H，5.80.分析值C，68.95；H，5.87. 光甘草定(Glabridin)紫外，UVλEtohmaxnm(logε)281.5(4.18)，288(4.13inf)，312(3.47sh.). 红外，IRγKBrmaxcm-13270，2940，1611，1587，1526，1480. 核磁，NMRδCDCLPPM1.42(3H×2，s，CH3-2″)，2.87(1H，d，6.0，H-4eq)，2.89(1H，d，10.0，H-4ax)，3.3-3.4(1H，m，H-3ax)，4.00(1H，t，10，H-2ax)，4.35(1H，q，10 and 3.5，H-2eq)，5.53(1H，d，10，H-3″)，5.80(2H，broad s，OH-2′and 4′，disappeared by the addition of D2O)，6.23(1H，d，2，H-3′)，6.31(1H，d.d，8 and 2，H-5′)，6.34(1H，d，8H-6)，6.61(1H，d，10，H-4″)，6.76(1H，d，8，H-5)，6.86(1H，d，8，H-6′).M.S m/e324(M+). 元素分析计算值C20H20O4C，74.05；H，6.22.分析值C，74.33；H，6.23光甘草醇(Grabrol)紫外，UVλEtohmaxnm(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱育新，孙东海，
申请(专利权)人：上海奥利实业有限公司，
类型：发明
国别省市：