牙鲆鱼精子DNA灭活方法技术

技术编号:45153 阅读:333 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种牙鲆鱼精子DNA灭活方法,属生物工程,用于海水鱼养殖全雌性育苗。其特征是该方法包括用事先配制好存放于低温下含有少量氯化钠、钾、钙和葡萄糖的蒸馏水将精液稀释后放于平底培养皿中再用紫外线灯照射等步骤。具有方法简单,所需设备少,便于操作,精子DNA灭活率达98%以上,且精子仍具有活力激活卵子,能实现大规模全雌牙鲆鱼育苗,提高养殖产量等优点。(*该技术在2018年保护过期,可自由使用*)

DNA inactivation method of Paralichthys olivaceus fish sperm

The invention relates to a method for inactivating sperm DNA of flounder fish, which belongs to the biological engineering. The method is characterized in that the method comprises the following steps: preparing the distilled water which is stored at a low temperature, containing a small amount of sodium chloride, potassium, calcium and glucose, and then diluting the semen in a flat bottomed culture dish and then irradiating the ultraviolet lamp. The method is simple, needs less equipment, easy operation, sperm DNA inactivation rate reached more than 98%, and still have the vitality sperm egg is activated, can achieve large-scale hologynic tooth flounder breeding, improve aquaculture production etc..

【技术实现步骤摘要】
牙鲆鱼精子dna灭活方法一种牙鲆鱼精子DNA灭活方法,属于生物工程
,用于海水鱼养殖全雌性鱼苗育苗。在现有技术中,只有淡水鱼已有雌核发育技术。但淡水鱼精子DNA灭活比较容易,方法亦较简单;而海水鱼比淡水鱼要复杂得多,淡水鱼精子灭活的方法根本不能适用于海水鱼,故海水鱼精子DNA灭活目前尚属空白,特别是能达到灭活98%以上进入实用阶段的更未见有过报导。在海水养殖鱼种中有些鱼种雌雄个体生长差别很大,在相同条件下多为雌性生长快于雄性。为了提高单位面积养殖产量,必须解决全雌性鱼苗的问题但是由于海水鱼的精子与淡水鱼的精子相比有许多不同,不能象淡水鱼那样直接施以雌性激素使其性转化,否则会有激素药物残留在鱼体内,不符合食品卫生法的规定。本专利技术的目的在于提供一种方法简单,所需设备少,易于操作,实用性强,能够使牙鲆鱼精子遗传物质DNA98%以上灭活且精子仍具有激活卵子的功能,既能保证其后代全部是雌核生殖的二倍体雌性鱼,又能保证在其性转化的“功能雄”亲鱼中全部是“假雄”而非正常真雄性鱼的牙鲆鱼精子DNA灭活方法。根据牙鲆鱼精子经过减数分裂至受精前,每个精子内只含有一套染色体,而其遗传物质DNA就在染色体内的特点以及紫外线的物理特性,针对现有技术中所存在的主要问题,本专利技术的基本构思是将取出的牙鲆鱼精液用事先配制好存放于低温下(使精子不致消耗过多能量,以备以后有足够的能量与卵子受精)其内含有少量氯化物(钠、钾、钙)和葡萄糖的蒸馏水稀释,稀释后分放在底面平整玻璃质浅盘器皿中,用紫外线灯照射,每个器皿中液柱的高度与紫外线的穿透力相适应,以保证每个精子都能受到紫外线的均匀照射,适当控制照射时间,调整照射距离,以便既能保证100%的破坏DNA,又不致杀死精子为宜。本专利技术所述的牙鲆鱼精子DNA灭活方法,其特征在于该方法包括下列步骤(1)取牙鲆鱼的精液,(2)用事先配制好保存在1℃~2℃低温下,按重量计其内含0.7~0.8%的氯化钠、0.03~0.05%的氯化钾、0.01~0.03%的氯化钙、0.05~0.15%的葡萄糖且其PH值为7~7.3的蒸馏水将上述的(1)所取的精液稀释40~100倍,(3)将稀释后的精液分放在底部平整的培养皿中,每个培养皿中的液柱高2~3mm,(4)在上述的培养皿垂直上方高200~300mm处用紫外线灯照射100~200秒,(5)照射完毕立即与牙鲆鱼卵子人工授精。本专利技术的优点是方法简单,所需设备少,便于操作,精子NDA灭活率达98%以上且精子仍具有活力激活卵子,保证其后代全是雌核生殖的二倍体雌性鱼,生长快可提高单位面积养殖产量,同时又能保证在其后性转化的“功能雄”亲鱼中全部是“假雄”而非正常雄性鱼,为大规模全雌牙鲆鱼育苗打下基础。本专利技术最佳实施例之一是取牙鲆鱼精液2ml,用事先配制好存在1℃~2℃低温下其内含有NaCL7.5克,KCL0.4克,CaCL0.2克葡萄糖1克,PH=7~7.3的1000克蒸馏水稀释50倍,然后把稀释后的精液分放在4只底部平整的培养皿中,在该培养皿垂直上方250mm处用2只15W紫外线灯照射160秒,边照射边轻轻震动培养皿。照射完毕立即与卵子人工授精。作为本实施例的变更1、稀释中所氯化钠、氯化钾、氯化钙和葡萄糖的百分比,以及稀释倍数均可在许可的范围内适当变更;2、紫外线灯离培养皿的高度,每个培养皿中所放稀释后精液液柱高度以及照射时间均可在许可的范围内适当变更。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牙鲆鱼精子DNA灭活方法,其特征在于该方法包括下列步骤:(1)取牙鲆鱼的精液,(2)用事先配制好保存在1℃~2℃低温下,按重量计其内含0.7~0.8%的氯化钠、0.03~0.05%的氯化钾、0.01~0.03%的氯化钙、0.05~0.15%的葡萄糖且其PH值为7~7.3的蒸馏水将上述的(1)所取的精液稀释40~100倍,(3)将稀释后的精液分放在底部平整的培养皿中,每个培养皿中的液柱高2~3mm,(4)在上述的培养皿垂直上方高200~300mm处用紫外线灯照射100~200秒,(5)照射完毕立即与牙鲆鱼卵子人工授精。

【技术特征摘要】
1.一种牙鲆鱼精子DNA灭活方法,其特征在于该方法包括下列步骤(1)取牙鲆鱼的精液,(2)用事先配制好保存在1℃~2℃低温下,按重量计其内含0.7~0.8%的氯化钠、0.03~0.05%的氯化钾0.01~0.03%的氯化钙、0.05~0.15%的葡萄糖且其PH值...

【专利技术属性】
技术研发人员:王新成张培军尤锋
申请(专利权)人:中国科学院海洋研究所
类型:发明
国别省市:95[中国|青岛]

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