利用胸腺素α-1治疗胶质母细胞瘤制造技术

利用胸腺素α－１作为佐剂与卡莫司汀（ＢＣＮＵ）联合用于对恶性胶质母细胞瘤进行有效治疗。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
利用胸腺素α－1治疗胶质母细胞瘤的制作方法相关申请资料本申请要求2001年12月10日递交的临时申请60/337,149的优先权。本专利技术背景胶质母细胞瘤是成人中最常见的原发性CNS恶性肿瘤，占原发性CNS恶性肿瘤的近75％。尽管由于神经显像术、显微外科手术以及放射疗法等的进步使得胶质母细胞瘤的治疗方法已经有了稳固的进步，但是该疾病仍然是不可治愈的(McDonald，2001；Burton，2000；Prados，2000)。诊断后的平均预期寿命少于1年，采用包括对可视肿瘤进行切除等急切治疗后的五年生存率少于10％(Burton，2000；Nieder，2000；Napolitano，1999；Dazzi，2000)。胶质母细胞瘤通过在脑中的快速、侵略性和浸润性的生长而引起死亡。浸润性生长的特性是这类肿瘤不能被切除的原因。胶质母细胞瘤还对放射疗法以及化学治疗具有相应的抗性，因此治疗后的复发率很高。此外，切除和放射治疗后通过对肿瘤细胞的免疫反应并不能完全清除残余的肿瘤细胞(Roth，1999；Dix，1999；Sablotzki，2000)。恶性胶质瘤细胞通过产生能够损害T-细胞增殖和IL-2生成的免疫抑制肽来逃避宿主免疫系统的探测(Dix，1999)。甚至CNS也给予恶性胶质瘤细胞某些特权使之能够悄然生长。迄今仍在继续寻找对患者进行胶质母细胞瘤的有效治疗手段。已经利用许多模型来研究通过免疫治疗、或者通过恢复免疫系统进行治疗来对抗这些肿瘤细胞。在所研究的具有对抗恶性肿瘤能力的免疫相关因子中，胸腺素组分5(TF5)、胸腺素α-1(胸腺法新)、IFN-α、以及IL-2是其中的几个。卡莫司汀(双氯乙基亚硝脲，BCNU或BiCNU)是氯乙基亚硝脲家族的化学治疗剂，该家族还包括其它的化学治疗剂，如氯脲菌素(DCNU)(Anderson，1975)、环己亚硝脲(CCNU)(Carter，1968)、尼莫司汀(Sai jo，1980)以及雷莫司汀(Sekido，1979)。多年以来氯乙基亚硝脲类仅被用原发性脑瘤的单一化学疗法的治疗剂；但是，历史数据表明，采用这些化合物作为单一药剂来治疗脑部肿瘤并非特别有效(e.g.，Aquafedda，et al.)。与仅采用放射疗法相比，采用卡莫司汀与放射疗法联合进行治疗能够适度增加恶性胶质母细胞瘤病人的长期存活时间(18个月)，尽管生存曲线之间并未具有0.05水平的显著性差异(Walker，1980)。胸腺素α-1(胸腺法新)是一种28个氨基酸的肽，其为循环中天然存在的化合物的合成形式(Bodey，2000；Bodey，2001)。胸腺法新刺激胸腺细胞生长和分化，生成IL-2、T细胞IL-2受体、IFN-γ以及IFN-α(Andreone，2001；Sztein，1989；Knutsen，1999；Spangelo，2000；Tijerina，1997；Garbin，1997；Attia，1993；Cordero，1992；Baxevamis，1994 & 1990；Beuth，2000)。胸腺法新在临床试验中被用于治疗乙型肝炎病毒感染(Chan，L-Y，2001)、丙型肝炎感染(Chan，H.L.，2001；Sherman，1998；Schinazi)、肺或头和颈部癌症、黑色素瘤(Bodey，2000& 2001；Garaci，2000)、以及AIDS(Billich，2002)。这些研究所得到的有希望的结果及T细胞对胶质母细胞瘤的反应性降低的证据引导了本专利技术对采用胸腺素免疫疗法来治疗恶性胶质瘤的潜在治疗益处进行研究，并确定了胸腺法新抗肿瘤作用的机理。专利技术概述胶质母细胞瘤是高级、恶性的中枢神经系统肿瘤，通常在诊断后12个月内致命。近来的研究表明采用诸如IL-2或IL-12等炎症前细胞因子能够延长胶质母细胞瘤病人的存活时间。胸腺素α-1(胸腺法新)是一种能作为免疫调节剂的胸腺肽，其能增加IL-2的生成以及T-细胞的增殖。本专利技术的工作证实，与其它组相比，在以胸腺法新+BCNU进行治疗的患者中，显著降低了肿瘤负荷并增加了淋巴-单核炎症细胞的反应。体外试验证实，胸腺法新对培养的9L细胞的生存能力或者线粒体的功能都没有直接的影响。但是，胸腺法新能显著增加促细胞凋亡基因的表达，包括FasL，FasR以及TNFa-IR(分别为65.89％，44.08％和22.18％)。此外，胸腺法新还增加了9L细胞对氧化应激的敏感性，例如用常规非致死剂量的H2O2就能杀死30~50％的胸腺法新处理后的9L细胞。进一步的研究表明胸腺法新增强了9L细胞对端粒酶B-(T细胞)或BCNU介导的杀伤的敏感性。这些结果表明胸腺法新在体内增强了氯乙基亚硝脲对胶质母细胞瘤的清除作用，胸腺法新的上述作用是通过活化促细胞凋亡机制，使肿瘤细胞对氧化应激的敏感性增加，以及通过端粒酶B(T细胞)的杀伤作用或者化学治疗等来实现的。 附图说明图1显示胸腺法新对9L细胞的存活性以及线粒体功能的最小作用。图2显示了胸腺法新作用72小时后9L细胞中促细胞凋亡基因表达的增加。图3显示了胸腺法新使9L胶质母细胞瘤细胞对氧化应激或者BCNU化学治疗的杀伤作用更加敏感。图4显示了胸腺法新使9L胶质母细胞瘤细胞对端粒酶B-介导的杀伤作用更加敏感；图4A显示将细胞与药物溶剂或胸腺法新(24小时-急性，72小时-慢性)相接触，然后再用药物溶剂处理1小时后的效果；图4B显示将细胞与药物溶剂或胸腺法新(24小时-急性，72小时-慢性)相接触，然后再用药物溶剂处理3小时后的效果。图5显示向成年Long Evans大鼠的右额叶植入10,000的9L胶质母细胞瘤细胞后临床神经病理异常发展的时间曲线。图6显示了BCNU和BCNU+胸腺法新(THY)在体内对胶质母细胞瘤发展的作用。图7显示了用BCNU+胸腺法新(THY)处理大鼠降低了胶质母细胞瘤的负荷并且治愈了25％。专利技术详述现今已经发现胸腺法新能够增强对胶质母细胞瘤细胞的免疫介导杀伤作用，这使得它能作为佐剂与氯乙基亚硝脲类化学治疗化合物联合使用从而有效治疗胶质母细胞瘤。本专利技术可应用的胸腺法新(TA1)肽类包括天然存在的TA1、具有天然TA1的氨基酸序列的合成TA1和重组TA1、与其基本类似的氨基酸序列或其简短序列形式(abbreviated sequence form)、以及与TA1具有基本相似生物活性的取代、缺失、延长、替换、或者修饰的序列的生物活性类似物，例如，与TA1具有足够同源性的TA1衍生肽，其与TA1几乎通过同样的方式产生几乎同样的活性。利用胶质母细胞瘤实验模型的体内研究表明，尽管BCNU确实能够明显降低肿瘤负荷，但反应各不同，有许多实验模型都检测不到有反应产生。但是，采用胸腺法新+BCNU进行治疗却具有同时能够降低平均肿瘤负荷并治愈约25％的肿瘤的治疗益处。胸腺法新+BCNU所介导的对肿瘤负荷的降低作用与其增加脑中肿瘤细胞内以及肿瘤细胞周围的淋巴-单核细胞的浸润相关。对于找不到残存肿瘤的试验模型，仅能检测到与原发性肿瘤细胞浸润相关联的胶质增殖组织以及不足的炎症。在低剂量和高剂量的胸腺法新+BCNU处理组观察到约25％的胶质母细胞瘤被治愈。一个未曾预料的发现就本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗胶质母细胞瘤的方法，其包括联合给予氯乙基亚硝脲以及胸腺素－α１（ＴＡ１）肽。

【技术特征摘要】
US 2001-12-10 60/337,1491.一种治疗胶质母细胞瘤的方法，其包括联合给予氯乙基亚硝脲以及胸腺素-αl(TAl)肽。2.权利要求1的方法，其中所述氯乙基亚硝脲为BCNU。3.权利要求2的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰克R万兹，苏珊德拉蒙特，
申请(专利权)人：罗得岛医院，
类型：发明
国别省市：US[美国]