一种固定化L-半胱氨酸合成酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种固定化L‑半胱氨酸合成酶及其制备方法和应用。该固定化L‑半胱氨酸合成酶的制备方法包括：从L‑半胱氨酸发酵液中离心得到湿菌体；将湿菌体与辅酶、表面活性剂混合后，破碎得到破碎液，再冷冻处理，得到预固定的溶液；先将预固定的溶液进行加热，再向溶液中依次加入载体树脂和辅酶，调整pH进行固定化反应，反应结束后，清洗得到固定化的L‑半胱氨酸合成酶。本发明专利技术采用预固定和再固定的两段式固定化处理，并引入辅酶共固定，有效的提高了固定化酶的速度和酶促反应速率，酶促反应2h收率＞90％，套用轮数在30～50次。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶的固定化，尤其涉及一种固定化l-半胱氨酸合成酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、现存的l-半胱氨酸生物发酵酶催化路线，将底物l-丝氨酸溶液经过预浓缩后，添加l-半胱氨酸合成酶、辅酶和巯基供体进行酶促催化反应得到l-半胱氨酸。

2、在酶促过程中，以活酶为酶催化剂进行反应，得到l-半胱氨酸溶解液，后续要经历一系列氧化、离心、溶解、陶瓷膜等分离步骤分离菌和产品，且只能单釜运行，成本较高，难以连续化。而以固定化酶的方式代替活菌参与反应，能有效降低成本，提高酶利用率将反应连续化。但是，固定化酶操作繁琐，固定时间长，酶促反应速度较活菌略有劣势。

3、目前，固定化l-半胱氨酸合成酶的制备仍然还有待提高，尤其是在固定化酶的催化速度和酶促反应速率上。因此，有必要探索一种新的有效提高固定化酶的催化速度和酶促反应速率的方法。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供了一种固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，并利用制得的固定化l-半胱氨酸合成酶进行l-半胱氨酸的生产，从而有效提高固定化酶的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种固定化L-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的固定化L-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述湿菌体的含水量为20～40％。

3.如权利要求1所述的固定化L-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)和(3)中，所述辅酶为磷酸吡哆醛、磷酸吡哆醇、磷酸吡哆胺中的一种。

4.如权利要求1所述的固定化L-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，以湿菌体为基准，按质量百分数计，所述辅酶的添加量为0.001～0.01％；所述表面活性剂为曲拉通或吐温，表面活性剂的添加量＞湿菌体质量的0.1...

【技术特征摘要】

1.一种固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述湿菌体的含水量为20～40％。

3.如权利要求1所述的固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)和(3)中，所述辅酶为磷酸吡哆醛、磷酸吡哆醇、磷酸吡哆胺中的一种。

4.如权利要求1所述的固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，以湿菌体为基准，按质量百分数计，所述辅酶的添加量为0.001～0.01％；所述表面活性剂为曲拉通或吐温，表面活性剂的添加量＞湿菌体质量的0.1％。

5.如权利要求1所述的固定化l-半胱氨酸合成酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述破碎的方法为超声破碎或机械破损；所述冷冻的温度为-15～-20℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵德胜，路博文，孙本晶，石铭，张建宁，赵福临，张立明，
申请(专利权)人：黑龙江新和成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：