一种测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法及其应用，所述测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法包括提取菌粉的RNA，依次进行RT‑PCR和qPCR反应，根据反应结果确定菌粉中的活菌数。本发明专利技术提供了一种新的嗜酸乳杆菌的计数方法，主要涉及RNA提取、RT‑PCR和qPCR过程，这些过程机械化水平更高，人力要求也更低，涉及的仪器设备精度较高，得到的结果也更准确，可对较多的样本进行批量分析，相较于传统计数方法更快速、准确且高通量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物，尤其涉及一种测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法及其应用。

技术介绍

1、2001年，世界贸易组织(wto)和联合国粮食及农业组织(fao)将益生菌定义为在摄入足够的量下，能够对宿主健康产生有益效果的活的微生物。近年来，随着各种流行病毒的入侵，人类对生命健康的认识不断加强，对益生菌的需求也迅速提升。2020年，益生菌食品占据了功能性食品市场的70％。嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)属于乳杆菌属，是一种能够在小肠中释放乳酸、乙酸和抗菌素的益生菌，可用于牛奶、酸奶和幼儿配方奶粉等食品中。已经有研究表明，嗜酸乳杆菌具有预防肥胖、预防和治疗肠道炎症、调节肠道微生物平衡等益生功能。

2、益生菌活菌数是评价益生菌相关产品质量的重要指标，益生菌的活菌数必须符合产品的说明和标准。益生菌产品在货架期内通过无氧、冻干、低温等方式将益生菌的代谢水平保持在极低的状态，使生长繁殖停滞。当产品保存不当，如保存温度较高或产品受潮水分增加时，益生菌的生长代谢水平会提高，最终在经历一定的生命周期后自然死亡，益生菌产品的活菌数也由本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法包括提取菌粉的RNA，依次进行RT-PCR和qPCR反应，根据反应结果确定菌粉中的活菌数。

2.根据权利要求1所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述菌粉中含有嗜酸乳杆菌和冻干保护剂；

3.根据权利要求1或2所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述提取菌粉的RNA包括将菌粉与稀释液混合，获得混合液，提取混合液的总RNA；

4.根据权利要求3所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述稀释液中含有7～10g/L NaCl和...

【技术特征摘要】

1.一种测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法包括提取菌粉的rna，依次进行rt-pcr和qpcr反应，根据反应结果确定菌粉中的活菌数。

2.根据权利要求1所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述菌粉中含有嗜酸乳杆菌和冻干保护剂；

3.根据权利要求1或2所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述提取菌粉的rna包括将菌粉与稀释液混合，获得混合液，提取混合液的总rna；

4.根据权利要求3所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述稀释液中含有7～10g/l nacl和10～20g/l蛋白胨；

5.根据权利要求1～4任一项所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所述rt-pcr的cdna第一链合成的反应体系包括1×rt mix、0.2～0.3mm super puredntps、0.5～1.5μm oligo-(dt)15、反转录酶quant reverse transcriptase 0.5～1.5μl/20μl反应体系和2.5～100ng/μl rna；

6.根据权利要求1～5任一项所述的测定嗜酸乳杆菌菌粉中活菌数的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：方曙光，王哲，李蕴涵，孟子惠，盖忠辉，朱建国，
申请(专利权)人：漯河微康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：