羰基还原酶突变体M6及其制备氟苯尼考关键中间体的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种羰基还原酶突变体M6，由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经下列组合突变所得：(1)第138位丙氨酸突变为缬氨酸；(2)第190位丙氨酸突变为甲硫氨酸；(3)第193位丝氨酸突变为丙氨酸；(4)第201位酪氨酸突变为色氨酸；(5)第204位天冬酰胺突变为组氨酸；(6)第205位缬氨酸突变为谷氨酸。本发明专利技术的突变体的相对活性与野生型相比提高了19倍，易于发酵制备，湿菌体单位酶活高，可直接用于氟苯尼考关键中间体2a的酶法催化制备，在300g/L底物浓度下反应8小时即可实现完全转化，且产物立体选择性高，相较于化学法来说该反应绿色安全，具有很好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种立体选择性羰基还原酶变体m6及其编码基因，以及其在生物催化制备氟苯尼考关键中间体2a中的应用。

技术介绍

1、立体选择性羰基还原酶(carbonylreductase,e.c.1.1.1.148)是一类能够催化醇与醛/酮之间的双向可逆反应，需要辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad(h))或者烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp(h))作为氢传递体。羰基还原酶广泛存在于细菌、真菌与动植物体内，种类和数量繁多。近年来，立体选择性羰基还原酶被广泛应用于手性醇的不对称合成中。

2、氟苯尼考又称氟甲砜霉素，是一种新型兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，该药于1988年由美国先灵-葆雅公司成功研制，先后在日本、韩国、挪威、法国等20多个国家上市，目前在我国已经有大量生产，每年需求量达4000吨。氟苯尼考具有抗菌谱广，吸收好，体内分布广、安全高效等特点，因此广泛应用于兽医临床防治细菌性疾病，例如巴氏杆菌引起的牛呼吸道感染、乳腺炎、猪传染性胸膜肺炎、黄痢、白痢、鸡大肠杆菌病、禽霍乱等。

3、氟苯尼考由于良好的抗菌效果一直吸引着各国本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种羰基还原酶突变体M6，其特征在于所述羰基还原酶突变体M6由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经下列组合突变所得：(1)第138位丙氨酸突变为缬氨酸；(2)第190位丙氨酸突变为甲硫氨酸；(3)第193位丝氨酸突变为丙氨酸；(4)第201位酪氨酸突变为色氨酸；(5)第204位天冬酰胺突变为组氨酸；(6)第205位缬氨酸突变为谷氨酸。

2.如权利要求1所述的羰基还原酶突变体M6的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于羰基还原酶突变体M6的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.含有如权利要求3所述羰基还原酶突变体...

【技术特征摘要】

1.一种羰基还原酶突变体m6，其特征在于所述羰基还原酶突变体m6由seq id no.2所示的氨基酸序列经下列组合突变所得：(1)第138位丙氨酸突变为缬氨酸；(2)第190位丙氨酸突变为甲硫氨酸；(3)第193位丝氨酸突变为丙氨酸；(4)第201位酪氨酸突变为色氨酸；(5)第204位天冬酰胺突变为组氨酸；(6)第205位缬氨酸突变为谷氨酸。

2.如权利要求1所述的羰基还原酶突变体m6的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于羰基还原酶突变体m6的编码基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.含有如权利要求3所述羰基还原酶突变体m6的编码基因的重组载体。

5.如权利要求4所述的重组载体构建的含有所述羰基还原酶突变体m6的编码基因的重组基因工程菌。

6.如权利要求1所述的羰基还原酶突变体m6在生物催化制备氟苯尼考关键手性中间体((2s,3r)-2-乙酰氨基-3-羟基-3-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙酸甲酯中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的应用的方法为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，周涛顺，张晓健，李向阳，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：