【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种人源化抗人cd132的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、cd132(il2rγ)，即白细胞介素2(interleukin-2，il-2)受体的γ亚基，该亚基同时是以下6种细胞因子受体复合物的γ亚基：il2，il-4，il-7，il-9，il-15，il-21。因此也被称为γc(commonγchain)。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，sle)是一种累及多脏器、多系统的慢性自身免疫性疾病。病因及发病机制复杂，与自身免疫耐受的破坏有关，但确切的病因和具体的发病机制尚不明确。其中b细胞功能紊乱，产生的自身抗体在患者体内沉积形成免疫复合物是sle发生发展的关键原因。靶向b细胞治疗sle是国内外研究重点，其中包括已经批准用于红斑狼疮治疗的靶向blys的belimumab单抗和能同时靶向blys和april的融合蛋白telitacicept。但是除了b细胞紊乱，t细胞过度增殖与活化也是sle病理学的核心因素。因此，仅仅靶向b细胞并未满足sle临床治疗的需求。sle患者体内数量和功能紊乱的cd4+滤泡辅助t细胞(tfh)和外周辅助性t细胞群(th1、th2、th17、treg)通过提供共刺激信号和细胞因子调解b细胞活化和自身抗体产生。因此一些t细胞相关的细胞因子因其在sle炎症和器官损伤中的促进作用而备受关注，成为有希望的治疗靶点。
2、多篇文献证明γ-chain家族细胞因子中的il4、il-7、il9、il-15和il-21在sle的免疫细胞中
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种人源化抗人cd132的单克隆抗体。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种人源化抗人cd132单克隆抗体，所述的单克隆抗体为人源化单克隆抗体，
4、其中，所述的单克隆抗体包含轻链互补决定区和重链互补决定区，其轻链互补决定区包括lcdr1、lcdr2和lcdr3，其重链互补决定区包括hcdr1、hcdr2和hcdr3；
5、具体的，所述的轻链互补决定区和重链互补决定区选择下列任意一组：
6、第一组：lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no.18、14、15所示；hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no.3、4、5所示；
7、或者，
8、第二组：lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列依次如seq id no.26、27、31所示；hcdr1、hcdr2和hcdr3的氨基酸序列依次如seq id no.8、9、10所示。
9、其中，所述的单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述的轻链可变区和重链可变区选择下列任意一组：
10、第一组：轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.22所示；重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示；
11、或者，
12、第二组：轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.29所示；重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所示。
13、其中，所述的单克隆抗体还包括恒定区，所述的恒定区为kappa链恒定区ckappa和人igg4恒定区ch1-ch3。
14、本专利技术还提供了一种核酸分子，具体的，其编码上述单克隆抗体的核苷酸序列。
15、本专利技术还提供了一种表达载体，具体的，包含上述核酸分子。
16、本专利技术还提供了一种宿主细胞，具体的，包含上述表达载体。
17、其中，所述的宿主细胞为hek293细胞。
18、本专利技术还提供了一种检测试剂或试剂盒，其特征在于，它包含所述的单克隆抗体h2d4h4k12和/或h5h10h6k4。
19、上述单克隆抗体在制备用于抑制或降低人cd132活性的药物中的应用也在本专利技术所保护的范围之内。
20、具体的，在一些实施例中，在体外活性实验检测人源化候选抗体对cd132的抑制活性中，人源化抗人cd132抗体h2d4h4k12可以抑制il-21刺激nk92细胞释放ifn-γ的活性；人源化抗人cd132抗体h5h10h6k4可以抑制il-4刺激ramos细胞表达cd23的活性。
21、具体的，在一些实施例中，对c57bl/6背景小鼠(来自百奥赛图繁殖集群的经遗传修饰以用相应的人序列置换内源性cd132全长结构域的c57bl/6背景小鼠)以8mg/kg或16mg/kg的剂量皮下施用抗体h2d4h4k12或h5h10h6k4，频率为4天一次，持续给3次药，通过流式细胞术分析不同时间点(每10天1次)外周血中的总免疫细胞、b细胞、t细胞、nk细胞、中性粒细胞、单核细胞、红细胞和血小板的绝对数及比值，来评估h2d4h4k12和h5h10h6k4抗体对这些细胞类型的绝对数量的作用。结果发现，h2d4h4k12和h5h10h6k4两种抗体对b细胞、t细胞和nk细胞均有不同程度的抑制作用，但并不影响中性粒细胞、单核细胞、红细胞和血小板的数量。
22、上述单克隆抗体在制备用于预防、中和或治疗自身性免疫疾病治疗药物中的应用也在本专利技术所保护的范围之内。
23、其中，所述的自身性免疫疾病为与il-4、il-7、il-9、il-15和/或il-21细胞因子受体相关的免疫性疾病，包括：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。
24、具体的，在一些实施例中，向c57bl/6背景小鼠(为来自百奥赛图繁殖集群的经遗传修饰以用相应的人序列置换内源性cd132全长结构域的c57bl/6背景小鼠)的腹腔中注射pristane(mce)0.5ml，对照组注射等体积的pbs缓冲液(ph 7.2)。在造模前3天予以20mg/kg的剂量皮下施用h2d4h4k12或h5h10h6k4或anti klh同型对照(以上抗体均由康诺亚生物科技有限公司公司生产)，频率为每周2次，一直持续6周，或者不进行施用(表5)。对小鼠尿蛋白、尿肌酐、血浆抗dsdna水平进行监测。结果发现，h2d4h4k12和h5h10h6k4两种抗体能显著降低pristane诱导狼疮小鼠的尿蛋白和血浆抗dsdna水平，提高小鼠生存率。
25、有益效果：
26、本专利技术通过对实验室先前获得的两种抗体(2d4和5h10)进行人源化改造，再经筛选后，获得了两种(h2d4h4k12和h5h10h6k4)可以靶向人cd132的高亲和力的单克隆人源化抗体。这两种抗体对5种γc细胞因子的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人源化抗人CD132单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体为人源化单克隆抗体，
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述的轻链可变区和重链可变区如下所示：
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体还包括恒定区，所述的恒定区为kappa链恒定区Ckappa和人IgG4恒定区CH1-CH3。
4.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体。
5.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求4所述的核酸分子。
6.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要求5所述的表达载体。
7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为HEK293细胞。
8.一种检测试剂或试剂盒，其特征在于，它含有权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体。
9.权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体在制备用于预防、中和或治疗自身性免疫疾病治疗药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特
...【技术特征摘要】
1.一种人源化抗人cd132单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体为人源化单克隆抗体，
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述的轻链可变区和重链可变区如下所示：
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体还包括恒定区，所述的恒定区为kappa链恒定区ckappa和人igg4恒定区ch1-ch3。
4.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体。
5.一种表达载体，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆前进，印慧琪，冯曦微，李黎明，赵俊鹏，樊欣雨，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病医院中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：
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