【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种抗β-兴奋剂的单链抗体及其应用。
技术介绍
1、溴布特罗(brombuterol，bro)和齐帕特罗(zilpaterol，zil)均是“瘦肉精”的一种，属于β-兴奋剂。能够明显的提高动物的瘦肉率，且易在动物体内的可食性组织中形成残留，过量使用会造成呼吸急促、肌肉震颤等症状，给动物源性食品安全带来严重的威胁。
2、目前针对β-兴奋剂类物质的检测仍以仪器分析为主，包括气相色谱-质谱和液相色谱-串联质谱技术。虽然这些方法能够对不同样品中的bro和zil做到精确的定量和定性检测，但因为仪器价格昂贵、耗时、耗力，并且需配备专用的实验室和操作人员，以及冗长而严格的样品处理程序，使得这种检测方法的广泛使用受到了很大限制。而针对bro和zil的免疫学检测方法所使用的抗体主要以单克隆抗体(monoclonal antibody,mab)和多克隆抗体(polyclonal antibody,pab)为主，因mab和pab的常规制备方法存在制备程序繁琐、复杂、花费时间长，并且存在不可优化、且不同批次间的抗体灵敏度存在差异等缺点，易导致构建的免疫学检测方法稳定性欠佳。相比于传统抗体，单链抗体(single chainantibodyfragment,scfv)是仅具有一条链的基因工程抗体，不仅可以在分子水平上对其进行研究，而且还可以通过随机诱变和定点诱变等改造技术提高抗体的亲和力和稳定性。在结合噬菌体展示技术的基础上，该抗体的获得可以不通过制备杂交瘤细胞株进行大量生产，具有方便和易于制备等优点，已逐渐成为建
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种抗β-兴奋剂的单链抗体及其应用，以解决现有对于β-兴奋剂的检测存在程序繁琐、价格昂贵、耗时耗力或稳定性差等问题。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
3、一种抗β-兴奋剂的单链抗体，β-兴奋剂为溴布特罗，抗溴布特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、进一步地，编码抗溴布特罗单链抗体重链可变区的核苷酸序列如seq id no.3所示，轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.4所示。
5、进一步地，连接肽的氨基酸序列如seq id no.5所示。
6、进一步地，β-兴奋剂为齐帕特罗，抗齐帕特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如seqid no.6所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。
7、进一步地，编码抗齐帕特罗单链抗体重链可变区的核苷酸序列如seq id no.8所示，轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示。
8、进一步地，连接肽的氨基酸序列如seq id no.10所示。
9、一种表达载体、噬菌体或重组菌，包括上述全部核苷酸。
10、一种单克隆细胞株，包括上述全部核苷酸。
11、一种用于检测β-兴奋剂的试剂盒，包括上述的抗β-兴奋剂的单链抗体。
12、上述抗β-兴奋剂的单链抗体或用于检测β-兴奋剂的试剂盒在用于β-兴奋剂检测中的应用。
13、本专利技术具有以下有益效果：
14、本专利技术分别利用重氮法将bro和改造修饰后的zil小分子分别与牛血清蛋白和鸡血清蛋白进行偶联，通过制备得到的完全抗原免疫小鼠并进行血清效价和灵敏度鉴定后，筛选得到能够分泌特异性和高灵敏的mab细胞株；然后以获得的单克隆细胞株为基础，利用pcr技术扩增得到完整的抗体基因，最终筛选得到了高敏感性的抗溴布特罗单链抗体和抗齐帕特罗单链抗体，为后续开发bro和zil的快速检测试剂盒奠定基础。
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1.一种抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，β-兴奋剂为溴布特罗，抗溴布特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，编码抗溴布特罗单链抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，β-兴奋剂为齐帕特罗，抗齐帕特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
5.根据权利要求4所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，编码抗齐帕特罗单链抗体重链可变区的核苷酸
6.根据权利要求4所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。
7.一种表达载体、噬菌体或重组菌，其特征在于，包括权利要求2或5中所述的全部核苷酸。
8.一种单克隆细胞株，其特征在于，包括权利要求2或5中所述的全部核苷酸。
9.一种用于检测β-兴奋剂的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任一项所述的抗β-兴奋剂的单链抗体。
10.权利要求1-6任一项所述的抗β-兴奋剂的单链抗体或权利要求9所述的用于检测β-兴奋剂的试剂盒在用于β-兴奋剂检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，β-兴奋剂为溴布特罗，抗溴布特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，编码抗溴布特罗单链抗体重链可变区的核苷酸序列如seq id no.3所示，轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.4所示。
3.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，连接肽的氨基酸序列如seq id no.5所示。
4.根据权利要求1所述的抗β-兴奋剂的单链抗体，其特征在于，β-兴奋剂为齐帕特罗，抗齐帕特罗单链抗体由重链可变区、连接肽和轻链可变区组成，连接肽位于重链可变区和轻链可变区之间，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭东光，王选年，陈明艳，卞爽丽，崔龙威，岳锋，张艳芳，李文明，孙莲莲，朱艳平，李鹏，徐小博，齐永华，
申请(专利权)人：新乡学院，
类型：发明
国别省市：
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