促甲状腺激素检测微粒、其制备及应用制造技术

本发明专利技术涉及甲状腺疾病的辅助诊断试剂，公开了一种促甲状腺激素检测微粒，为抗促甲状腺激素抗体包被的发光微粒。本发明专利技术还公开了上述促甲状腺激素检测微粒的制备及应用。此外，本发明专利技术又进一步公开了一种测定样品中促甲状腺激素的体外诊断试剂盒，同时公开了该试剂盒的使用方法。本发明专利技术的试剂盒可以与其它血清和临床信息联合用于甲状腺疾病的辅助诊断及相关病人治疗效果的监测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及促甲状腺激素的诊断试剂，具体涉及基于光激化学发光原理的促甲状腺激素检测微粒、其制备及应用。
技术介绍
甲状腺疾病是一组较常见的内分泌疾病，包括缺碘性甲状腺肿、其他原因引起的甲状腺肿、甲亢、甲状腺瘤、甲状腺炎、甲状腺功能减退等。甲状腺病的发生率比较高。 甲亢也就是甲状腺功能亢进症，它是一种临床上十分常见的内分泌疾病。是指由各种原因导致甲状腺功能增强，甲状腺激素分泌过多或因甲腺原氨酸(TSH)在血液中水平增高所导致的机体神经系统、循环系统、消化系统心血管系统等多系统的一系列高代谢症候群以及高兴奋症状和眼部症状。 甲状腺机能减退症系甲状腺激素TSH合成与分泌不足，或甲状腺激素生理效应不好、生物效应不足而致的全身性疾病。临床上可分为呆小病、幼年甲低、成人甲低。若功能减退始于胎儿或新生儿期，称为克汀病；始于性发育前儿童称幼年型甲减；始于成人称成年型甲减。 甲状腺瘤是临床常见病，其中绝大多数为良性病变，少数为癌，肉瘤、恶性淋巴瘤等。该病女性发病率明显高于男性，男女发病比例约1 : 2 3。 甲状腺炎是以炎症为主要表现的甲状腺疾病，包括感染性和非感染性。不少见。临床权威上所说的急性、亚急性及已经慢性甲状腺炎，只表明青年疾病过程的长短，它们之间无内在联系，也不互相转变，每种具有发表不同的病因、有着临床特点、病理过程及固有的结局。 促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,縮写为TSH)，由垂体前叶分泌，促使甲状腺产生并释放T4和T3。它是一种分子量约为28000道尔顿的糖蛋白，由两种不同的亚单位a、 13组成。虽然人血中的TSH水平极低，但对保证正常的甲状腺机能是至关重要的，TSH的释放受下丘脑分泌的TSH释放激素(TRH)所调节。TSH和TRH与甲状腺激素的水平成反比。当血中有高水平的甲状腺素时，下丘脑释及TRH减少，因此垂体释放TSH减少，如血中甲状腺激素下降，则产生相反的结果。这种过程称为负反馈，由此保持这些激素在血中的正常水平。TSH和垂体糖蛋白、黄体生成素(LH)、卵泡剌激素(FSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)具有相同的a链，而|3链则不同，具有特有的氨基序列。检测血清TSH对于甲状腺功能亢进、甲状腺功能减低及甲状腺肿瘤的诊断或鉴别诊断，对甲状腺功能相关疾病的发展过程、疗效及预后评估中具有十分重要的意义。 免疫学检测是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质，激素等微量生物活性物质。 我国免疫学检测基本经历了放射免疫检测(兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院)；酶联免疫检测(兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍使用)；以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术(20世纪90年代开始推广使用，产品步入成长期)三个阶段。这一衍变过程主要是基于对检测方法的敏感性、准确性、以及操作简捷性的需求的不断提高而决定的。 化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。检测原理是以发光物质作为信号放大系统并籍助其发光强度直接测定免疫结合。由于其高灵敏度，检测范围宽等优点，已成为放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫学检测重要的发展方向。 但目前国内自行研制的化学发光检测试剂，大多为非均相反应，采用化学底物直接标记，通过化学反应激发。其分析过程与传统酶标检测类似，需反复清洗与分离，检测耗时长，自动化程度不高。国外厂家检测试剂随发光基质与检测形式而各不相同。以Abbott，Bayer与Chiron等公司为代表的化学激发，即以化学发光底物直接标记抗原或抗体进行免疫测定。最常用的为吖啶酯，在碱性环境中可被过氧化氢氧化而发光。BD则以AKP，金钢脘为基质采用酶促化学发光。Roche则采用电化学发光(electrochemiluminescence， ECL)，发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌，随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行，不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。因反应过程中牵涉到分离清洗，自动化设计复杂，仪器相当昂贵。此外，发光基质的稳定性也是一大问题。 光激化学发光法通过引入激光技术与纳米微球技术，成功地解决了上述不足。因反应在均相中进行，既加快了反应速度，又避免了反复分离与清洗步骤，能有效降低检测背景值，减少反应时间，并可实现自动化操作。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可用于定量检测血清中促甲状腺激素的检测微粒，其制备、检测条件及应用。 本专利技术的技术原理 本专利技术的促甲状腺激素检测试剂及试剂盒与光激化学发光检测技术相关，光激化学发光免疫技术是一种利用化学发光物质发射的光波进行免疫测定的方法。该技术主要整合了高分子微粒技术，有机合成，蛋白质化学与临床检测相关领域的研究。 本专利技术之所以能检测血清中的促甲状腺激素的水平，是由于在均相条件下，将内部带有染料的感光微粒(纳米级)以及包被有抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)并且内部带有发光化合物的发光微粒(纳米级)的混合物作为试剂和检测样品混合。此时纳米感光微粒和包被有表面抗体的纳米发光微粒可迅速有效地捕捉促甲状腺激素(TSH)，在近距离内，三者形成免疫夹心复合物。激发光照射后，纳米感光微粒中的染料被诱导激活，并释放高能态的活性氧离子(单线态氧)。该高能态的活性氧离子被近距离的纳米发光微粒俘获，从而传递能量以激活所述发光微粒中的发光化合物。数微秒后，发光微粒中的发光化合物将释放出高能级红光。用光子计数器测定这些高能级光子，并通过电脑将光子数换算为目标分子浓度，光子数的多少即精确地反映了目标分子的浓度。而当样本不含促甲状腺激素(TSH)时，无法在近距离形成免疫夹心复合物，活性氧离子也无法传递至发光微粒表面。活性氧离子在液相中迅速衰减，检测时则无高能级红光产生。具体原理参见图1及图2。 基于上述原理，本专利技术第一方面提供了一种用于检测促甲状腺激素(TSH)的检测微粒，为抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)包被的发光微粒。 本专利技术第二方面提供了一种促甲状腺激素(TSH)的检测试剂盒，包括上述抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)包被的发光微粒。试剂盒中还可包括生物素标记的抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)和/或亲和素包被的感光微粒。 在试剂盒中，上述抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)包被的发光微粒、生物素标记的抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)和亲和素包被的感光微粒分别独立包装，且均为混悬液。上述含有抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)包被的发光微粒、生物素标记的抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)或亲和素包被的感光微粒的溶液的溶剂可以是常规的适合抗原抗体反应的溶剂体系，如HEPES缓冲体系、Tris缓冲体系。抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)包被的发光微粒的溶剂优选PH8. 0的成分为HEPES、 NaCl和EDTA-Na_2H20的HEPES缓冲液，生物素标记的抗促甲状腺激素抗体(TSHAb)的溶剂优选pH8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测促甲状腺激素的检测微粒，为抗促甲状腺激素抗体包被的发光微粒。

【技术特征摘要】
一种用于检测促甲状腺激素的检测微粒，为抗促甲状腺激素抗体包被的发光微粒。2. 如权利要求1所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述发光微粒的粒径范围为100-400nm。3. 如权利要求1所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述发光微粒的表面官能团选自羧基或醛基。4. 如权利要求1所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述发光微粒的发光量为150， 000-350， 000光子数/100 y g发光微粒。5. 如权利要求1-4中任一权利要求所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述检测微粒经如下工艺制得a) 混合将发光微粒与抗促甲状腺激素抗体混合于缓冲液中；b) 反应加入缓冲液配制的EDAC溶液混合并反应；c) 往步骤b获得的反应液中加入缓冲液配制的BSA溶液混匀并反应；d) 清洗产物，获得抗促甲状腺激素抗体包被的发光微粒。6. 如权利要求5所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述缓冲液为MES缓冲液。7. 如权利要求5所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述步骤a中，发光微粒与抗促甲状腺激素抗体的质量比例为(8-15) : 1。8. 如权利要求7所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述，发光微粒与抗促甲状腺激素抗体的质量比例为12.5 : 1。9. 如权利要求5所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒，其特征在于，所述步骤d的清洗的方式为离心法清洗。10. —种促甲状腺激素的检测试剂盒，包括权利要求1-9中任一权利要求所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒。11. 如权利要求io所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括生物素标记的抗促甲状腺激素抗体或亲和素包被的感光微粒中的一种或两种。12. 如权利要求11所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗促甲状腺激素抗体中，生物素与抗体的分子比例为(20-40) : 1。13. 如权利要求11所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述亲和素包被的感光微粒中，亲和素与感光微粒的质量比例为1 : (3-10)。14. 如权利要求11所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒、生物素标记的抗促甲状腺激素抗体以及亲和素包被的感光微粒分别独立包装，且均为混悬液。15. 如权利要求14所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述混悬液的溶剂选自HEPES缓冲体系或Tris缓冲体系。16. 如权利要求15所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述用于检测促甲状腺激素的检测微粒混悬液的溶剂为PH8. 0的成分为HEPES、NaCl和EDTA-Na_2H20的HEPES缓冲液。17. 如权利要求15所述促甲状腺激素的检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗促甲状腺激素抗体混悬液的溶剂为pH8. 0的成分为Tris、 NaCl和EDTA_Na-2H20的Tris...

【专利技术属性】
技术研发人员：张伟，王海蛟，赵卫国，
申请(专利权)人：博阳生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]