本发明专利技术提供了一种测序文库构建方法，所述方法包括以下步骤：1)打断待测DNA；2)对打断的DNA进行末端修复，3’端加“A”，其中末端修复缓冲液包含有标记的dNTP；3)连接接头，形成文库‑接头连接产物；4)利用步骤2)中的所述标记对所述文库‑接头连接产物进行纯化；5)对纯化的所述文库‑接头连接产物进行PCR扩增；6)纯化PCR产物。相比于传统建库方法，利用本发明专利技术的方法可以有效分离文库与接头二聚体，实现高质量建库。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于测序，具体涉及一种测序文库构建方法。
技术介绍
1、随着基因测序技术的普及，尤其是大通量的二代测序(ngs)的普遍使用，对于费用成本和准确度的要求也越来越高。基因测序一般需要经过文库构建、然后将构建好的文库进行测序两个步骤。
2、在ngs文库构建中，接头连接是一个重要步骤。在被打断、末端修复的dna片段的两端分别加上接头，该过程是没有选择性的，因此连接过程中也会存在大量的接头之间直接连接，无插入片段。这样的接头二聚体在建库过程中很难完全去除。
3、尤其是对于低起始量或质量较差的样本，文库构建过程中接头二聚体的存在将影响文库的产量，这些接头二聚体并不是所需要了解的序列信息，且这些序列大量重复存在将严重影响目的序列的数据产出，浪费测序成本。同时这些大量的非目的序列片段将拉低整张芯片的数据质量。但如果通过降低接头使用量来降低二聚体的产出，则将造成文库的产量较低，受限于待测样本质量，仍不可避免接头二聚体的存在。
4、因此，本领域亟需一种可以去除接头二聚体的测序文库构建方法。
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【技术保护点】
1.一种测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述末端修复缓冲液包含Tris-HCl、KCl或NaCl、MgCl2或MnCl2。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述dNTP是dATP、dTTP、dCTP、dGTP或其任何组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述标记是生物素，步骤4)中利用连接有链霉亲和素的磁珠对所述文库-接头连接产物进行纯化。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中...
【技术特征摘要】
1.一种测序文库构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述末端修复缓冲液包含tris-hcl、kcl或nacl、mgcl2或mncl2。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述dntp是datp、dttp、dctp、dgtp或其任何组合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述标记是生物素，步骤4)中利用连接有链霉亲和素的磁珠对所述文库-接头连接产物进行纯化。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中的所述标记是抗原，步骤4)中利用连接有抗体的磁珠对所述文库-接头连接产物进行纯化，所述抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞超，梁加龙，孙永乐，皮永硕，任丽平，蔡万世，
申请(专利权)人：艾吉泰康生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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