ＭＭＰ９作为卵巢癌的诊断标记物的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种诊断受试者中的卵巢癌的方法，包括：检测来自受试者的样本中的ＭＭＰ－９含量，对所述ＭＭＰ－９含量进行分析，和根据分析结果确定所述受试者是否患有卵巢癌。本发明专利技术还提供了用于卵巢癌诊断的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学
具体地说，本专利技术涉及一种提高样本分类准确性 的方法、以及一种用于检测样本中匪P-9蛋白的试剂盒。
技术介绍
上皮性卵巢癌(印ithelial ovarian cancer,E0C)在所有女性癌症死亡原因中排 名第五位。美国癌症学会预计2008年将会新增21650个卵巢癌病例，同时大约有15520例 病患将死于该疾病(www. cancer, org) 。 E0C的高死亡率都是发生在起始阶段，因为大部分 妇女在诊断时已是晚期(stage 111/IV)，其中15_20%的病人有5年的存活率(1)。相比 较而言，被准确诊断为stage I的小部分病人，超过90%只5年的存活率(2)。当前E0C检 测的候选策略是建立在生物化学肿瘤标志物的基础之上，例如CA125和通过超声或者卵巢 的多普勒显像得到的生物物理标记物。不幸的是，利用这些策略进行早期E0C检测的阳性 预测值(PPV) —致性小于10% (3， 4)。通过利用CA125复杂算法(complex longitudinal algorithms) (5-7)、串联测试(sequentialtesting) (8，9)和全新生物标记物(10)的应用， 在对上皮性卵巢癌(E0C)早期诊断中得到了一定的提高。所以，现在仍非常需要继续发展 新的循环生物标志物对卵巢癌进行早期诊断。
技术实现思路
本专利技术部分地基于以下发现卵巢癌患者血清中的匪P-9含量明显高于健康受试 者血清中的匪P-9含量，并且具有统计学显著性，可用作卵巢癌的诊断标志物。 因此，本专利技术提供了以下实施方案。[实施方案1] 一种诊断受试者中的卵巢癌的方法，包括 检测来自受试者的样本中的匪P-9含量， 对所述MMP-9含量进行分析，和 根据分析结果确定所述受试者是否患有卵巢癌。[实施方案2] —种提高样本分类准确性的方法，包括 检测所述样本中的匪P-9含量， 对所述匪P-9含量进行分析，和 根据所述分析结果，对样本进行分类。[实施方案3] —种对受试者的卵巢癌进行诊断、预后评估、治疗效果监测或病程 监测的方法，包括检测受试者血液样本中匪P-9的表达。[实施方案4]权利要求1-3之任一项的方法，其中所述样本选自由尿液、脑脊液、 唾液和眼泪所构成的组。[实施方案5]权利要求1-3之任一项的方法，其中所述样本为血液样本。 [实施方案6]权利要求1-3之任一项的方法，其中所述样本为血清样本。 [实施方案7]权利要求l-6之任一项的方法，其中所述检测采用ELISA或定量Western blot进行。[实施方案8]权利要求1-7之任一项的方法，其中所述检测采用匪P-9的特异结 合剂进行。[实施方案9]权利要求8的方法，其中所述匪P-9的特异结合剂为匪P-9的抗体 或其MMP-9结合片段。[实施方案10]权利要求8的方法，其中所述匪P-9的抗体为单克隆抗体。 [实施方案11]权利要求8的方法，其中所述匪P-9的抗体为多克隆抗体。 [实施方案12]权利要求1-11之任一项的方法，其中所述分析包括绘制ROC曲线， 其中以匪P-9为变量，根据不同的阈值绘制出R0C曲线，并计算曲线下面积AUC，并且按照期 望的灵敏度和特异性进行判断。[实施方案13]权利要求1-11之任一项的方法，其中所述分析包括将所述匪P-9 含量与来自健康受试者的参比值进行比较，如果明显高于所述参比值则确定所述受试者患 有卵巢癌。[实施方案14]用于实施权利要求1-13之任一项的方法的试剂盒，其包含匪P-9 的特异结合剂。[实施方案15]权利要求14的试剂盒，还包含能够结合匪P-9的标记抗体。 [实施方案16]权利要求14-15之任一项的试剂盒，其中所述匪P-9的特异结合剂 为MMP-9的抗体或其MMP-9结合片段。[实施方案17]权利要求16的试剂盒，其中所述匪P-9的抗体为单克隆抗体。 [实施方案18]权利要求16的试剂盒，其中所述匪P-9的抗体为多克隆抗体。 [实施方案19]权利要求15-18之任一项的试剂盒，其中所述标记抗体被辣根过氧 化物酶或者荧光标记。[实施方案20]权利要求14-19之任一项的试剂盒，还包含 包含已知量匪P-9溶液的标准样；以及 用于检测的抗体标记物，其可以与抗体结合形成偶联物。[实施方案21]权利要求20的试剂盒，其中所述抗体标记物为辣根过氧化物酶或 者荧光物质。[实施方案22]权利要求14-21之任一项的试剂盒，还包含 任选的携带工具，其空间任选地被划分为限定空间的组分； 任选的选自由显色剂、酶抑制剂、缓冲液、稳定剂、稀释剂、洗涤试剂构成的组的辅 助试剂；和 任选的说明书。[实施方案23]权利要求14-22之任一项的试剂盒，其中所述匪P-9的特异结合剂 被固定于固相载体上。[实施方案24]匪P-9的特异结合剂在制备用于诊断卵巢癌的试剂中的用途。 [实施方案25]权利要求24的用途，其中所述匪P-9的特异结合剂为匪P-9的抗 体或其MMP-9结合片段。[实施方案26]权利要求25的用途，其中所述匪P-9的抗体为单克隆抗体。 [实施方案27]权利要求25的用途，其中所述MMP-9的抗体为多克隆抗体。5[实施方案28]MMP-9作为卵巢癌诊断标志物的用途。 [实施方案29] —种提高样本分类准确性的方法，其包括 测定样本中匪P-9的含量，和匪P-9的含量在时间上的变化； 以匪P-9含量在时间上的变化为变量，根据不同的阈值对癌症诊断的灵敏度和特异性绘制出R0C曲线，并计算曲线下面积AUC ; 按照AUC值、灵敏度和特异性对样本进行分类。 研究表明，采用本专利技术的方法及试剂盒对个体的样本中蛋白匪P-9进行联合检 测，可以有效提高癌症诊断的灵敏度、特异性和准确率，并且可以推广至许多疾病的诊断、 预后评估、治疗效果评估及病程监测。附图说明 图1是对患者血清样本进行匪P-9检测的R0C曲线界面。其中，specificity是 指特异性，sensitivity是指灵敏度。具体实施方式 术语 本文所用的术语匪P-9 是指基质金属蛋白酶_9 (MatrixMetal loproteinase-9)， 其含义是本领域公知的。 本文中使用的术语受试者，指任意哺乳动物，例如，小鼠、大鼠、兔子、狗、牛，特 别是灵长类动物，如人。在本专利技术的某些优选实施方式中，受试者是人。在本文中，术语 受试者和个体有时可互换使用。 本文中使用的术语血液样本，指来自受试者的血液的样本，例如全血、血浆或者 血清样本。 本文中使用的术语匪P-9的特异结合剂，指能够特异结合匪P-9的试剂，例如 匪P-9的抗体、结合配体(如Aptmer)等。 本文中使用的术语特异结合指本专利技术的特异结合剂专一性地结合匪P-9抗原。 例如，通常情况下，匪P-9抗体结合匪P-9抗原的亲和力是结合匪P-9抗原之外的非特异抗 原(例如，BSA、酪蛋白)的亲和力的至少2倍。 匪P-9抗体的匪P-9结合片段是指匪P-9抗体的一个或多个片段，其保留结合 匪P-9抗原的能力，例如Fab、 F(ab' )2、 Fv或单链Fv片段。已经表明通过全长抗体的片段 可以实施抗体的抗原结合功能。抗体的匪P-9结合片段包括(i)Fab片段，其是由V。V^ C^和CH1结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断受试者中的卵巢癌的方法，包括：检测来自受试者的样本中的ＭＭＰ－９含量，对所述ＭＭＰ－９含量进行分析，和根据分析结果确定所述受试者是否患有卵巢癌。

【技术特征摘要】
一种诊断受试者中的卵巢癌的方法，包括检测来自受试者的样本中的MMP-9含量，对所述MMP-9含量进行分析，和根据分析结果确定所述受试者是否患有卵巢癌。2. —种提高样本分类准确性的方法，包括检测所述样本中的匪P-9含量， 对所述MMP-9含量进行分析，和 根据所述分析结果，对样本进行分类。3. —种对受试者的卵巢癌进行诊断、预后评估、治疗效果监测或病程监测的方法，包 括检测受试者血液样本中匪P-9的表达。4. 权利要求1-3之任一项的方法，其中所述样本选自由尿液、脑脊液、唾液和眼泪所构 成的组。5. 权利要求l-3之任一项的方法，其中所述样本为血液样本。6. 权利要求l-3之任一项的方法，其中所述样本为血清样本。7. 权利要求1-6之任一项的方法，其中所述检测采用ELISA或定量Western blot进行。8. 权利要求1-7之任一项的方法，其中所述检测采用匪P-9的特异结合剂进行。9. 权利要求8的方法，其中所述MMP-9的特异结合剂为匪p-9的抗体或其MMP-9结合 片段。10. 权利要求8的方法，其中所述MMP-9的抗体为单克隆抗体。11. 权利要求8的方法，其中所述MMP-9的抗体为多克隆抗体。12. 权利要求1-11之任一项的方法，其中所述分析包括绘制R0C曲线，其中以匪P-9为 变量，根据不同的阈值绘制出R0C曲线，并计算曲线下面积AUC，并且按照期望的灵敏度和 特异性进行判断。13. 权利要求1-11之任一项的方法，其中所述分析包括将所述匪P-9含量与来自健康 受试者的参比值进行比较，如果明显高于所述参比值则确定所述受试者患有卵巢癌。14. 用于实施权利要求l-13之任一项的方法的试剂盒，其包含匪P-9的特异结合剂。15. 权利要求14的试剂盒，还...

【专利技术属性】
技术研发人员：林标扬，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]