一种检测辐照食品的微生物快速筛选方法技术

一种用于初筛检测辐照食品的方法，属于食品卫生领域，具体涉及一种运用微生物快速筛选方法检测辐照食品的方法。其技术方案是利用食品中内毒素的含量与革兰氏阴性菌计数的差异情况来判定食品是否经过辐照处理。本发明专利技术包括内毒素的检测方法、革兰氏阴性菌的计数方法以及与之配套的检测程序和结果判断方法。本发明专利技术填补了辐照食品微生物快速筛选方法的空白，用于大量辐照食品的快速高通量检测。该方法具有仪器设备要求低，操作简便，成本低、快速、高通量的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种检测辐照食品的方法，属于食品卫生领域，具体地讲，涉及用微生物快速筛选方法来检测辐照食品的技术。
技术介绍
食品辐照是第二次世界大战后发展起来的一种食品加工和食品保藏技术。它利用电离辐射(6°Co。或137放射源产生的Y射线、电子加速器产生的低于10MeV电子束或X射线)对食品和其他农副产品进行加工处理，以达到控制食源性病原体，减少微生物负载和虫害，抑制发芽和延长易腐烂农产品使用期的目的，其具有冷加工处理、无二次污染和化学残留、能耗低等特点，在食品包装材料，农产品、禽肉制品及水产品等杀虫、灭菌领域有着广泛的应用。 目前，我国颁布的辐照食品工艺标准涉及的食品种类有几十种，但由于缺乏必要的鉴别技术无法分辨食品是否经过辐照处理，很多企业认为辐照具有很好的灭菌效果，放松了对中间生产、加工过程的卫生控制，细菌病毒严重超标的产品拉去辐照一下达标，所以很多没有工艺标准的产品都去辐照，而且是辐照的剂量比较大。另外，辐照食品的潜在安全性问题尚存在争议，尽管在目前允许的食品种类，辐照剂量的作用下的辐照食品是安全的，但不当的辐照会对食品的颜色、味道、营养产生一些副作用，比如脱色、有臭味、破坏一些营养成分，辐照残留也对人的健康存在安全隐患，所以通过辐照食品鉴别来监控违法辐照对于防止危害，保障健康具有不可忽视的作用。 而且近年来随着进出口贸易的发展，辐照食品管理中标识的问题已得到欧盟、日韩等国的重视，其影响很可能类是于对转基因食品的要求一样波及全球。目前，美国、英国、德国等国家对食品辐照有比较详细的要求，对于食品种类、辐照剂量、辐照设施、食品辐照的标示都有明确的规定，强调只有得到许可和经批准的辐照设施才能为特定的目的处理特定的食品。而由于我国的辐照装置的资格认证一直没有标准可依，目前国内还没有欧盟批准的辐照机构，所以我国规定对欧盟出口食品均不得进行辐照处理，但2004年-2006年的两年时间内，我国出口食品先后10次被欧盟通报存在有非法辐照问题，而且水产品、药材和食品等被检出非法辐照或未标注辐照标示，导致相应货物的禁售和退运。 因此，日益严峻的食品安全问题和进出口贸易情况对进出口辐照食品鉴别技术的研究需求已迫在眉睫，只有加强进出口辐照食品鉴别技术的研究，才能监控违法辐照以防止危害保障健康；才能使辐照标签的标示管理规定得到真正的落实，维护消费者合法权益，进而保证进出口贸易的顺利发展。 目前，我国尚无相应的国家标准。2006-2007年农业部发布了热释光检测香辛料、脱水蔬菜和新鲜水果、蔬菜的两个行业标准，正在制定宠物食品等检测标准，但相对于当前我国已颁布的允许辐照的7个大类几十种食品的辐照工艺标准而言，无论是数量上还是食品类别上都无法满足检测的实际需求。此外，现有的热释光法、ESR法以及化学法均需要使用昂贵的仪器，方法复杂、对操作人员要求也比较高，检测时间长，不适于大批量检测，所以3加强检测辐照食品的快速初筛方法的研究是极其必要的。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对食品安全中辐照食品检测种类繁多，检测通量要求高 的特点，为解决当前辐照食品检测中存在的价格昂贵、操作费时、检测通量低等缺陷，提供 了一种微生物快速筛选方法检测辐照食品的方法，具体来讲就是，通过检测食品中内毒素 的含量和革兰氏阴性菌计数，并比较两者的差异情况来判定食品是否经过辐照处理。 通过微生物筛选方法检测辐照食品的方法包括内毒素含量的检测，革兰氏阴性 菌的计数和两者之间的差异比较。内毒素含量的检测原理是在适宜的条件下(温度，PH值 及无干扰物质)，细菌内毒素激活鲎变形细胞溶解物(鲎试剂)中的凝固酶原，使鲎变形细胞溶解物(鲎试剂)产生凝集反应形成凝胶。革兰氏阴性菌计数的原理是在2rc 士rc的条件下，革兰氏阴性菌在含有乳酸链球菌素、青霉素和结晶紫的选择性培养基中好氧生长。 通过比较待测样品中细菌内毒素含量与革兰氏阴性菌计数差异来初步判定所测样品是否 经过辐照处理。 本专利技术是通过以下技术方案实现的 1.内毒素标准品 (1)内毒素标准品的获得可通过商业公司购买所需要的内毒素标准品，例如厦 门鲎试剂厂的内毒素标准品(IOEU)。 (2)内毒素标准品的溶解取内毒素标准品(10EU)加入lml无内毒素水，复溶后置漩涡混匀器混匀15min，充 分溶解，制成10EU/mL的内毒素标准品溶液。 2.鲎试剂 (1)鲎试剂的获得可通过商业公司购买所需要的内毒素标准品，例如厦门鲎试 剂厂的鲎试剂。(2)鲎试剂的溶解按鲎试剂标示量，加入无内毒素水溶解，轻轻振摇至少30s至 试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用。 3.蛋白胨盐溶液的获得将氯化钠8.5g，酪蛋白消化酶l.Og，溶解在1000mL 蒸馏水中溶解并混合均匀，调整溶液pH为7.0±0.2(25°C )，分装于试管中，每管9mL，i2rc 士rc高压灭菌15min备用。溶液在4°c 士rc最多保存2周。 4.营养琼脂的获得5.0g氯化钠，5.0g酪蛋白消化酶，1.0g肉类提取物，2.0g酵 母提取物，和9. Og 18. Og(由琼脂的凝胶强度决定)琼脂加入1000mL蒸馏水混合，加热 煮沸至完全溶解后，调整溶液pH值至7.4士0. 2，121°C 士rC高压灭菌15min。待琼脂冷却 至45 5(TC后，倾注于平皿中，每个平皿倾注10mL备用。 5.基础培养基的获得将牛奶琼脂(Oxoid)24. 0g， Nisin (40000IU/L) 40. Omg，溶 解在997mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解后，调整溶液pH值至7. 4±0. 2， 121°C 士rC高 压灭菌15min，冷却至45°C 5(TC作为基础培养基备用。 6.结晶紫溶液的获得将10. Omg结晶紫充分溶解在10. OmL蒸馏水中，使用0. 22 ii m滤膜过滤除菌后备用，4t: 6t:可保存2周。 7.青霉素溶液的获得将100mg青霉素-G(20000IU/L)充分溶解在10. OmL蒸馏水中，使用0. 22nm滤膜过滤除菌后备用，4t: 6t:可保存1周。 8.革兰氏阴性菌培养基的获得无菌条件下，将1. 2mL青霉素溶液和2. 0mL结晶 紫溶液加入997mL45°C 50°C的基础培养基中，混合均匀后分装待用。 9.内毒素含量检测方法 (1)检测程序 以内毒素标准品为阳性对照，无内毒素水为阴性对照，分别取O. lmL不同稀释度 的样品匀液加入含有0. lmL鲎试剂的无内毒素试管中，混合摇匀，用paraflim封口膜封闭 管口，37。C 士rC反应60min士2min。 (2)结果判定当试管内的内容物发生完全凝集时为阳性记为+ ，部分凝集时记 为+/-，未凝集时为阴性记为_。 (3)效价的计算通过不同稀释度中最后的阳性结果来决定效价，效价计算实例如表所示，若试管内容物发生完全凝集时，以实际效价用于内毒素含量计算；若发生部分凝集时，则以此稀释度的效价加上其前发生完全凝集的稀释度效价，取其平均效价用于内毒素含量计算。例如表l。 表l.内毒素实验效价计算实例样品不同稀释度样品匀液内毒素实验反应结果效价10-1010510-20It)'2510-3010-3.51040样品1++1.5样品2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测辐照食品的微生物快速筛选方法，其步骤包括：　　（１）革兰氏阴性菌数的检测　　（２）细菌内毒素含量的检测　　（３）革兰氏阴性菌数与内毒素含量的差异比较　　（４）结果判定

【技术特征摘要】
一种用于检测辐照食品的微生物快速筛选方法，其步骤包括(1)革兰氏阴性菌数的检测(2)细菌内毒素含量的检测(3)革兰氏阴性菌数与内毒素含量的差异比较(4)结果判定2. 权利要求1所述的革兰氏阴性菌数，是通过革兰氏阴性菌计数方法，计算每克测试 样品中存在的革兰氏阴性菌数N(单位cfu GNB/g)，结果表述为l0gl。cfu GNB/g。3. 权利要求1所述的细菌内毒素含量，是通过细菌内毒素检测试剂盒，检测每克测试 样品中细菌内毒素含量，用EU/g来报告，结果表述为logl。EU/g。4. 权利要求1所述的结果判定是(1) 若样品中细菌内毒素含量高，革兰氏阴性菌数少或不可检测，即(logl。EU/ g-l0gl。CfUGNB/g) > O，则表明样品中微生物状态不正常，该样品疑是辐照样品，需进行进 一步的辐照鉴定试验。(2) 若细菌内毒素浓度与革兰氏阴性菌数都很高且近似，则表明样品的微生物状态正 常。即当log10EU/g-logloCfu GNB/g《0时，该样品是未辐照的样品。(3) 若细菌内毒素值l^。EU/g〈2，且革兰氏阴性菌数也很低，lc^。cfu GNB/g < 2时， 该结果应判定为不可确定，需进行进一步的辐照鉴定试验。5. 权利要求2中所述的革兰氏阴性菌计数方法，步骤包括(1) 使用不含内毒素的水将待测食品制备成适宜连续稀释度的样品匀液...

【专利技术属性】
技术研发人员：宓捷波，
申请(专利权)人：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]