白血病遗传检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测白血病遗传风险的试剂盒。该试剂盒包括检测细胞色素Ｐ４５０　１Ａ１基因（ＣＹＰ１Ａ１）、谷胱甘肽硫转移酶Ｍ１基因（ＧＳＴＭ１）、谷胱甘肽硫转移酶Ｔ１基因（ＧＳＴＴ１）、还原型辅酶Ｉ醌类氧化还原酶基因（ＮＱ０１）、５，１０－亚甲基四氢叶酸还原酶基因（ＭＴＨＦＲ）的单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对、荧光定量ＰＣＲ常规组件、ＰＣＲ反应组件等。本发明专利技术的试剂盒通过同时检测与白血病遗传风险密切相关的基因上的多态性位点基因型来评估个体白血病遗传风险。

Leukemia genetic test kit

The present invention discloses a kit for detecting genetic risk of leukemia. The kit includes detection of cytochrome P450 1A1 gene (CYP1A1), glutathione S-transferase M1 gene (GSTM1), glutathione S-transferase T1 gene (GSTT1), reduced coenzyme I quinone oxidoreductase gene (NQ01), 5, 10 - methylenetetrahydrofolate reductase gene Ya Jiaji (MTHFR) specific primer nucleotide polymorphism genotype and specific fluorescent probes, fluorescence quantitative PCR, PCR reaction components and other conventional components. The inventive kit evaluates genetic risk of individual leukemia by simultaneously detecting genotypes of polymorphic loci closely associated with genetic risk of leukemia.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本专利技术涉及一种检测个体白血病遗传易感性的试剂盒， 通过同时检测与白血病密切相关的细胞色素P450 1A1基因(CYP1A1)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)、 谷胱甘肽硫转移酶T1基因(GSTT1)、还原型辅酶I醌类氧化还原酶基因(NQOl)、 5， 10-亚甲基四氢叶酸 还原酶基因(MTHFR)上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体白血病遗传易感性。
技术介绍
白血病俗称"血癌"，是造血系统的恶性肿瘤。其特征是骨髓、淋巴结等造血系统中一种或多种血细 胞成分发生恶性增殖，并浸润体内各脏器组织，导致正常造血组织细胞受抑制，产生各种症状，临床上常 以发热、出血、贫血，肝、脾、淋巴结肿大为特点。白血病根据自然病程和白细胞的成熟程度，可分为急性和慢性。急性白血病多发于儿童，慢性白血病 多发于成年人。白血病的恶性程度极高，急性白血病的自然病程平均只有三个月。近年来，随着医疗技术 的发展，可以用化疗、放疗等方法遏制病变的白细胞，延长病人的生命。但是这种方法的副作用大，复发 率高，不但给病人带来极大的痛苦，而且对家庭、社会造成了沉重的负担。白血病的病囱尚未完全阐明，较为公认的因素有电离辐射、化学因素、病毒、遗传因素和其他血液病-等。虽然白血病的病因尚未明确，但部分人群患此病与遗传因素有一定的相关性。因此，了解自己在遗传 方面的患病风险对于防治白血病方面具有重要意义。目前，涉及白血病的一些基因，已经被很好的进行研 究。其作用机制、生化功能、信号通路、调控、转录等等方面都有明确可靠的研究结果；研究手段、方法、 仪器设备和试剂等都已经发展到了一个相当的高度。目前，经证实并且机理研究清楚的与白血病密切相关 的基因有细胞色素P450 1A1基因(CYP1A1)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)('谷胱甘肽硫转移酶Tl 基因(GSTT1)、还原型辅酶I醌类氧化还原酶基因(NQOl)、 5, 10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)。CYP1A1基因是活化多环芳烃类致癌物的主要酶类。它作为一种微神经元体细胞酶与一些致癌物质的生 物激活有关。Msp I酶切多态是CYP1A1最常见的多态位点之一，位于3'端非编码区多聚腺嘌呤下游264bp 处，为T/C置换(T3801C)。当CYP1A1 Msp I酶切位点发生突变后，该酶的诱导活性增强，即容易收到环 境致癌物的影响，从而诱导产生更多的CYP1A1，使得致癌物质的活化加速，若其它解毒酶不能及时将该类 物质代谢排出，则会造成DNA损伤和细胞畸变，增加癌症的发病风险。此外，由于造血干细胞处于活跃的 分化期的，容易产生氧化应激的环境，当存在高水平的致癌物质时，更易导致DNA损伤和DNA链断裂。因 此m2等位基因是白血病，特别是儿童期急性白血病的危险因素。GSTM1编码谷胱甘肽硫转移酶M1，是GST-u亚家族中研究最多的成员。GSTM1是机体最重要的解毒酶' 之一，GSTM1酶活性的降低或缺失会增强个体对氧化应激产物和致癌物质的敏感性，使机体容易发生氧化 应激损伤和各种癌变。该基因的多态性与酶活性的改变有关，因此也与各种炎症及癌症有关，其中包括肺 癌、慢性胰腺炎、头颈癌、肝癌。对于造血干细胞，自身氧化应激和环境致癌物都能造成DNA损伤，GSTM1 则是灭活这些致癌物的解毒酶之一，直接关系到白血病的易感风险，所以GSTM1基因多态性也是白血病的 风险因素。GSTT1是谷胱甘肽硫转移酶T1的编码基因，其编码产物是GST-9亚家族中最研究最多的成员。GSTT1 是机体最重要的解毒酶之一，GSTT1酶活性的降低或缺失会增加个体对氧化应激产物和致癌物质的敏感性， 使机体容易发生氧化应激损伤和各种癌变。该基因的多态性与酶活性的改变有关，因此也与各种炎症及癌 症有关，其中包括多发性硬化(MDS)、再生障碍性贫血、白血病、宫颈癌、乳腺癌等。由于红细胞中也含 有GSTT1,因此该酶可能在血液系统中发挥重要的解毒功能，并且与GSTM1之间有相互补偿作用，所以GSTT1 基因多态性可能也是各类白血病的风险因素。毒物代谢酶是代谢外来化学物(xenobiotic)以降低此类物质对机体毒性的一类酶，NQOl属于II相代 谢酶，全称为还原型辅酶I醌类氧化还原酶，又称为DT-硫辛酰胺脱氢酶(DT-diaphorase)。 NQOl基因编 码的蛋白是苯在人体骨髓中代谢的一种关键酶，该酶是细胞内的一种保护性还原酶，能够保护细胞免受外' 界醌类物质的氧化损伤，比如将苯醌转化为低毒性的氢醌和羟基化合物，从而避免醌类对细胞DNA的损伤，3保证机体的正常生理功能。研究表明，苯是易引起白血病发生的一种危险因素，它本身毒性较低，但在人 体中的代谢物有血.液毒性，NQOl能将其转化为低毒物质，因此NQ01活性是影响白血病发生的关键因素。 NQ01基因的多态性会改变酶的活性，从而对白血病的发生风险产生不同程度的影响。MTHFR是5, 10-亚甲基四氢叶酸还原酶的编码基因，该酶的主要作用是在叶酸代谢通路中将5， 10-亚甲 基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，使之参与随后的核苷酸合成代谢以及甲基传递通路。MTHFR参与的这' 个反应是5-甲基四氢叶酸生成的限速步骤，若MTHFR酶活性降低，则会导致叶酸代谢失衡，DNA不能正常 甲基化，细胞分化增殖则趋缓。虽然MTHFR酶活性降低是多数疾病的易感因素，然而在肿瘤的形成过程中 是保护因素。叶酸缺乏引起肿瘤细胞的分裂减速， 一定程度上抑制了肿瘤的恶性增殖，从而降低了多种血 液及消化道癌症的发病风险。
技术实现思路
基于细胞色素P450 1A1基因(CYP1A1)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)、谷胱甘肽硫转移酶Tl 基因(GSTT1)、还原型辅酶I醌类氧化还原酶基因(NQOl)、 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)上 的5个SNP位点多态性可用来评估个体白血病遗传易感性的基础上，本专利技术提供一种检测个体白血病遗传 易感性的试剂盒。该试剂盒包括检测CYP1A1基因上MspI(T3801C) SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对； 检测GSTM1華因上SNP多态性基W型的电泳检测引物对； 检测GSTT1基因上SNP多态性基因型的电泳检测引物对；检测NQ01基因上C609T SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对； 检测MTHFR基因上C677T SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对； PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、PCR反应缓冲液、去离子水等)； 荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCh溶液、反应缓冲液,、去离子水等)。本试剂盒中所述的引物对是本领域技术人员能够轻易完成设计的，并可用常夫i的合成技术进行合成。本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成 技术进行合成。本专利技术试剂盒的组分和含量包括1. 荧光定量PCR反应套装10 X荧光定量PCR反应缓冲液3nl，25raM dNTP混合液0.3pl，25mM MgC12溶液1. 8|al，5units/(al .Taq DNA聚合酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测个体白血病遗传易感性的试剂盒，其特征在于：包括同时检测细胞色素Ｐ４５０　１Ａ１基因（ＣＹＰ１Ａ１）上ＭｓｐＩ（Ｔ３８０１Ｃ）ＳＮＰ位点、谷胱甘肽硫转移酶Ｍ１基因（ＧＳＴＭ１）上ＳＮＰ位点、谷胱甘肽硫转移酶Ｔ１基因（ＧＳＴＴ１）上ＳＮＰ位点、还原型辅酶Ｉ醌类氧化还原酶基因（ＮＱ０１）上Ｃ６０９Ｔ　ＳＮＰ位点、５，１０－亚甲基四氢叶酸还原酶基因（ＭＴＨＦＲ）上Ｃ６７７Ｔ　ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ混合液、ＭｇＣｌ２溶液、荧光定量ＰＣＲ反应缓冲液、去离子水。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]