本发明专利技术公开了一种猪精液冻存液，所述的冻存液每１００ｍｌ中含有：（ａ）５－２０ｇ乳糖；（ｂ）０．００５－０．０５ｇ Ｎ－乙酰－Ｄ－氨基葡萄糖；（ｃ）０．０５－０．５ｇＤＨＡ；（ｄ）１．０－５．０ｍｌ甘油；（ｅ）０．２－１．５ｍｌ ＯＥＰ；（ｆ）１０－４０ｍｌ卵黄；和（ｇ）５－２０万国际单位的青霉素和／或链霉素。本发明专利技术还公开了一种猪精液的处理方法，并提示通过本发明专利技术提供的方法处理的猪精液经过检测其精子的活力达到０．３－０．６，精子顶体完整率超过５０％，完全符合目前人工授精的要求。
Boar semen cryopreservation liquid and pig semen processing method
The invention discloses a boar semen cryopreservation solution, the frozen liquid of each 100ml contains: (a) 5 - 20g (b) 0.005 lactose; 0.05g N acetyl D glucosamine; (c) 0.05 - 0.5gDHA; (d) 1 - 5.0ml (E) 0.2 glycerol; 1.5ml OEP (f) 10 - 40ml; egg yolk; and (g) 5-20 million IU of penicillin and / or streptomycin. The invention also discloses a method for treating pig semen, and prompt treatment by the method of pig semen through the detection of the sperm activity reached 0.3 - 0.6, the sperm acrosome integrity rate of more than 50%, can satisfy the requirements of artificial insemination.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术，尤其涉及猪精液冻存液和猪精液的处理方法。
技术介绍
精液冷冻技术对于充分发挥优良种猪的遗传潜力以及地方猪种遗传资源 的保存均有极其重要的应用价值。猪的精液冷冻技术研究始于1956年，Polge 等首次报道应用猪冷冻精液获得产仔。但几十年来，与牛、羊等家畜相比，猪 的冷冻精液应用还相当有限，部分原因是因为猪冻精活力低、受胎率低、产仔 数较鲜精少；部分原因是因为猪精液量大，传统的麦管(0.25/0.5ml)实际应 用中操作不便；而颗粒法冷冻，易造成污染且不易标记。国外畜牧研究人员一直在探索猪大容量包装，如5ml塑料袋、大管(5ml) 等精液冷冻技术，使之像牛、羊等家畜一样做到一支麦管精液输一头母猪。但 在使用大管法时，目前还没有理想的猪精液的稀释液添加剂、精子密度、冷冻 及解冻方法等的提供。因此，本领域迫切需要从精子活力、活率、弯尾率、顶体完整率等参数检 查精子质量，以解冻后的精子质量、人工输精结果作为评价指标，筛选出最佳 的猪精液冷冻方法和程序，从而提供高效、实用的猪精液冷冻生产工艺。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种猪精液的冻存液。本专利技术的另一个目的是提供一种如上述的猪精液的冻存液的用途。 本专利技术的再一个目的是提供一种猪精液的处理方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种猪精液冻存液，所述的冻存液每lOOml中含有-(a) 5 —20g乳糖；(b) 0. 005 —0. 05g N-乙酰-D-氨基葡萄糖;(c) 0. 05 — 0. 5g 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid， DHA);(d) 1. 0 — 5. 0ml甘油；(e) 0. 2—1. 5ml氨基-钠-十二烷基硫酸脂(O醒Es Paste ， 0EP)(f) 10 — 40ml卵黄；和(g) 5 — 20万国际单位的青霉素和/或链霉素。 在另一优选例中，所述的冻存液每100ml中含有(a) 8—15g乳糖；(b) 0. 008 — 0.04g N-乙酰-D-氨基葡萄糖；(c) 0. 08 — 0. 4gDHA;(d) 1. 5 — 4. 0ml甘油；(e) 0. 3—1. 0ml 0EP;(f) 15 —30ml卵黄；和(g) 8—15万国际单位的青霉素和/或链霉素。在本专利技术的第二方面，提供了一种如上所述的冻存液的用途，所述的冻存 液可用于保存猪精液。本专利技术的第三方面，提供了一种猪精液的处理方法，所述的方法包括步骤-.(1) 将猪精液和如上所述的冻存液混合，得到含猪精液的混合物；(2) 将步骤(1)得到的混合物加入5ml大管；和(3) 将装有猪精液的大管投入液氮中冻存，得到冷冻保存的猪精液。 在另一优选例中，在步骤(l)得到的混合物中，猪精液的密度为0. 5-4xl09个/ml;更佳地，密度为0. 8-3.0xl()9个/ml。在另一优选例中，所述的步骤(1)包括以下步骤(l')将猪精液和乳糖、N-乙酰-D-氨基葡萄糖、DHA、卵黄、和青霉素 和/或链霉素混合，得到含猪精液的初始混合物，在每100ml初始混合物中含 有l一8g乳糖，0. 008 — 0. 05g N-乙酰-D-氨基葡萄糖，0. 05 —0. 6gDHA， 3 — 20ml卵黄，1.5—10万国际单位的青霉素和/或链霉素；和(l")将步骤(l')所得到的含猪精液的初始混合物和乳糖、甘油、0EP、 卵黄、和青霉素和/或链霉素混合，得到如上述步骤(1)中所述的含猪精液的 混合物。在另一优选例中，所述的步骤(l')在室温下进行；所述的步骤(1〃 ) 在2 — 8'C进行；更佳地，步骤(l")在3 — 6'C进行。在另一优选例中，步骤(1)中得到的含猪精液的混合物每100ml中含有2 一16g乳糖、0. 004 — 0. 03gN-乙酰-D-氨基葡萄糖、0. 03-0. 3gDHA、 0. 5 — 4ml 甘油、0. 125—1.0ml 0EP、 5 — 30ml卵黄、和2—10万国际单位的青霉素和/ 或链霉素。在另一优选例中，步骤(1)中得到的含猪精液的混合物每100ml中含有 3. 5—12g乳糖、0.006 — 0. 02g N-乙酰-D-氨基葡萄糖、0. 06 — 0. 25gDHA、 0.8 一3ml甘油、0. 18 — 0. 7ml 0EP、 8 — 20ml卵黄、和3 — 8. 5万国际单位的青霉 素和/或链霉素；优选步骤(1)中得到的含猪精液的混合物每100ml中含有5.5 —8.5g乳糖、0.008 — 0. 013g N-乙酰-D-氨基葡萄糖、0. 10 — 0. 15gDHA、 1.0 一2. 0ml甘油、0.25 — 0. 5ml 0EP、 10—15ml卵黄、和5 — 7. 5万国际单位的青 霉素和/或链霉素。在另一优选例中，所述的方法还包括步骤 (4)将步骤(3)得到的冷冻保存的猪精液和解冻液在25 — 7(TC混合10 一100秒；所述的每100ml解冻液中含有2. 0 — 8. 0g葡萄糖、0. 05 — 0. 25gEDTA、 0. 3—1. 2g拧檬酸三钠、0. 05 — 0. 25g碳酸氢钠、0. 03 — 0. 20g氯化钾；优选在 37 — 60。C混合25 — 80秒。据此，本专利技术提供了最佳的猪精液冷冻方法和程序，从而提供了高效、实 用的猪精液冷冻生产工艺。附图说明图l显示了大管冷冻工艺。图2显示了大管冷冻的主要器具。图3显示了不同解冻温度解冻后精子质量变化曲线。具体实施例方式专利技术人经过广泛而深入的研究，意外地发现了一种猪精液的冷冻保存液， 它可以长久而有效地保持猪精液中精子的活力、活率、质膜完整性和顶体完整 性。另外，专利技术人发现使用大管对上述处理的猪精液进行冷冻保存，能克服常规颗粒法易造成污染好不易标记的缺点。进一步地，专利技术人还发现了解冻温度 和时间对上述冻精活力等的影响。具体地，专利技术人发现可以将猪精液和含有DHA的溶液混合后，在大管中进行冻存。较佳地，将猪精液通过两次稀释后所得到的混合溶液进行冻存，所述混合溶液中含有DHA。如本文所用，"二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid， DHA，含6个 不饱和键)"是一种"-3脂肪酸，所谓的"-3脂肪酸是指在多不饱合脂肪酸 分子中，距羧基最远端的双键在倒数第3个碳原子上。本专利技术中的DHA可以由 本领域技术人员所熟知的方式获得，例如通过化学合成、或提取自海洋生物(如 海鱼)等。本专利技术所使用的DHA中可以含有少量其它的属于"-3脂肪酸的物质， 例如但不限于二十碳五烯酸(Eicosapen taenoic acid， EPA，含5个不饱和 键)，所述的少量物质的含量为0—10wt。/。，较佳地为0 — 5wt°/。，更佳地为0 — 2wt0/o。如本文所用，"大管"是指在冷冻猪精液中所使用的放置猪精液和相关处 理溶液的管状容器，容器材料可以是本领域技术人员所熟知的；其容量可以是 2-10ml，较佳地是4-6ml。在本专利技术的一个优选例中，所述的大管是本领域熟 知的可以通过任何商业渠道所获得的，例如但不限于德国米尼图公司所生产 的。如本文所用，"卵黄"是指鸡蛋黄。如本文所用，"室温"和"常温"可互换使用，都是指10 — 3(TC，优选 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪精液冻存液，其特征在于，所述的冻存液每１００ｍｌ中含有： （ａ）５－２０ｇ乳糖； （ｂ）０．００５－０．０５ｇ Ｎ－乙酰－Ｄ－氨基葡萄糖； （ｃ）０．０５－０．５ｇ二十二碳六烯酸； （ｄ）１．０－５．０ｍｌ甘油 ； （ｅ）０．２－１．５ｍｌ氨基－钠－十二烷基硫酸脂 （ｆ）１０－４０ｍｌ卵黄；和 （ｇ）５－２０万国际单位的青霉素和／或链霉素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张德福，戴建军，殷方芝，吴彩凤，吴华莉，刘东，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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