本发明专利技术公开了属于动物基因工程领域的一种用于诱导猪IGFN1蛋白多克隆抗体的抗原多肽，该抗原多肽由SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的；其次，本发明专利技术公开了由SEQ ID No:2所示的核苷酸序列组成所述抗原多肽的编码基因；此外，本发明专利技术还公开了一种猪IGFN1蛋白多克隆抗体。本发明专利技术猪IGFN1蛋白多克隆抗体对猪IGFN1蛋白表达水平的检测特异性强，为IGFN1在猪组织中的表达分析及其相关研究提供了重要工具；其次，本发明专利技术中的抗原序列长，检测灵敏度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物基因工程领域，具体涉及一种猪IGFN1蛋白多克隆抗体，以及该多克隆抗体的制备方法和用途。
技术介绍
免疫球蛋白样和纤维连接蛋白Ⅲ型域含蛋白质1(immunoglobulin-like and fibronectin type III domain containing 1，简称为IGFN1)，是Mansilla等在2008年发现的一种真核翻译延伸因子1A(Eukaryotic translation elongation factor 1A,eEF1A)的结合蛋白。IGFN1基因可在骨骼肌中特异性表达，并呈现出免疫球蛋白Ⅰ和纤维连接蛋白III组合的肌小节蛋白的结构域特征。同时，IGFN1蛋白在序列和结构上与快型肌球蛋白结合蛋白C(myosin binding protein C fast-type)和慢型肌球蛋白结合蛋白C(myosin binding protein C slow-type)具有较高的同源性(Mansilla等.Journal of Cell Biology.2008,105:847-858)。对IGFN1基因在骨骼肌中的表达研究发现在培养的肌管细胞中，高分解代谢型创伤患者的IGFN1基因表达会抑制肌管细胞的凋亡，并促进细胞增殖(Bosutti等.Metabolism-Clinical and Experimental.2007,56:1629-1634)。在由去除神经支配产生肌萎缩的骨骼肌中，IGFN1表达显著上调，并通过与eEF1A的相互作用下调骨骼肌蛋白的合成(Mansilla等.Journal of Cell Biology.2008,105:847-858)。由IGFN1、KY和FLNC组成的蛋白复合物可能对骨骼肌的肌小节起到结构支撑作用(Baker等.Experimental Cell Research.2010,316:1856-1870)。IGFN1这种激酶基因主要参与蛋白翻译、骨骼肌收缩、肌肉的发育、骨骼肌细胞骨架以及胞内钙离子平衡等过程(Kilpinen等.Plos One.2010,5:e15068-e15081)。从上述可以看出，IGFN1基因可影响骨骼肌的生长和发育，因此关于该基因功能的深入研究极具理论价值和实践意义。骨骼肌是动物体供人类食用的主要部分，它的特性直接影响着肉的品质。目前已有关于家禽肌肉中IGFN1的研究报道。如利用长链寡核苷酸芯片分析正常火鸡和PSE肉火鸡的骨骼肌中差异表达的基因，发现PSE肉中IGFN1基因表达下调(Malila等.Poultry Science.2013,92:1621-1633)，说明该基因的表达可能影响肉品质，但IGFN1的表达规律及其与肉品质的关系未见报道。在猪的研究方面，除NCBI数据库于2013年9月26日公布的IGFN1基因的完整序列信息(XM_005656791)外，目前国内外尚无关于猪IGFN1基因的报道，其确切功能及是否也会影响肉品质更是不清楚。商品化的IGFN1抗体仅有两种(鼠单抗和羊多抗)，且仅针对人或鼠，而这两种抗体可检测猪样本中IGFN1表达的效果不理想。目前还没有专门针对猪的IGFN1抗体，大大限制了IGFN1在猪上的功能研究。因此，亟待研制高特异性的猪IGFN1多克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种用于诱导猪IGFN1蛋白多克隆抗体的抗原多肽。本专利技术另一目的在于提供上述抗原多肽的编码基因。本专利技术第三目的在于提供含有上述编码基因的表达载体。本专利技术第四目的在于提供用于扩增上述抗原多肽编码基因的引物对。本专利技术第五目的在于提供一种猪IGFN1蛋白多克隆抗体。该多克隆抗体特异性好、效价高，可为IGFN1在猪骨骼肌组织或细胞中的表达分析及其相关研究提供重要工具。本专利技术第六目的在于提供上述猪IGFN1蛋白多克隆抗体的制备方法。本专利技术第七目的在于提供用于检测猪IGFN1蛋白表达的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术一种用于诱导猪IGFN1蛋白多克隆抗体的抗原多肽，命名为IGFN1-I，由SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成。上述抗原多肽的编码基因，命名为Igfn1-I，由SEQ ID No:2所示的核苷酸序列组成。含有上述抗原多肽编码基因的表达载体。上述表达载体中所述的载体是指pET-28a(+)等。用于扩增上述抗原多肽编码基因的引物对，所述的引物对由SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的核苷酸序列组成；所述的核苷酸序列为：上游引物I：5’-ATGCCGGATTGGCGCTC-3’(SEQ ID No:3)，下游引物I：5’-CAGCACATGTTCTTTACCGCC-3’(SEQ ID No:4)。本专利技术一种猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其所述多克隆抗体的抗原为SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的多肽。上述猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其所述抗原的编码基因由SEQ ID No:2所示的核苷酸序列组成。上述猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其所述抗原的编码基因的PCR扩增引物由SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的核苷酸序列组成。上述猪IGFN1蛋白多克隆抗体的制备方法，包括：(1)、人工合成SEQ ID No:2所示的核苷酸序列，装载于pUC57载体上，得优化的猪GEFN1基因质粒；(2)、以步骤(1)所得的质粒为模板，以上游引物I和下游引物I为引物进行PCR扩增，得Igfn1-I基因片段(SEQ ID No:2)；(3)、用EcoR I和Xho I分别对Igfn1-I基因片段和原核表达载体pET28a(+)进行双酶切，再将酶切后的载体和Igfn1-I基因片段进行连接，得连接产物；将连接产物转化感受态细胞，挑取阳性克隆，获得原核表达载体；(4)、对原核表达载体进行外源蛋白的诱导表达与纯化；以纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔，四免7天后心脏穿刺采血，制备抗血清；用His-MBP重组蛋白抗原偶联NHS活化的琼脂糖柱，亲和纯化抗血清，得猪IGFN1蛋白多克隆抗体。用于检测猪IGFN1蛋白表达的试剂盒，含有上述猪IGFN1蛋白多克隆抗体。与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果：本专利技术制备的猪IGFN1蛋白多克隆抗体对猪IGFN1蛋白表达水平的检测特异性强，为IGFN1在猪组织中的表达分析及其相关研究提供了重要工具；(2)本专利技术中的抗原序列长，检测灵敏度高。附图说明图1.PCR扩增产物电泳图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于诱导猪IGFN1蛋白多克隆抗体的抗原多肽，其特征在于由SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成。
【技术特征摘要】
1.一种用于诱导猪IGFN1蛋白多克隆抗体的抗原多肽，其特征在于由
SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成。
2.权利要求1所述的抗原多肽的编码基因，其特征在于由SEQ ID No:2
所示的核苷酸序列组成。
3.含有权利要求2所述的抗原多肽编码基因的表达载体。
4.按照权利要求3所述的表达载体，其特征在于所述的载体是指pET-28a
(+)。
5.用于扩增权利要求2所述的抗原多肽编码基因的引物对，其特征在于
所述的引物对由SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的核苷酸序列组成。
6.一种猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其特征在于其所述多克隆抗体的抗
原为SEQ ID No:1所示的氨基酸序列组成的多肽。
7.按照权利要求6所述的猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其特征在于其所
述抗原的编码基因由SEQ ID No:2所示的核苷酸序列组成。
8.按照权利要求6所述的猪IGFN1蛋白多克隆抗体，其特征在于其所
述抗原的编码基因的PCR扩增引物由SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示的核
苷...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝月，顾宪红，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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