本发明专利技术涉及一种人ＡＢＯ／Ｒｈ／ＭＮ血型的快速检测方法及所使用的试剂盒。本发明专利技术的方法和检测试剂盒是根据免疫层析法的原理，利用血型物质抗原抗体反应后是否有因为红细胞凝集而残留的红色物质来实现对血型的检测。本发明专利技术的方法操作简单、可避免现有普通血型检测方法的各种缺陷。本发明专利技术的方法中，被检血样的加样量不超过１０微升，全部检测过程不超过２分钟。
Method and kit for rapid detection of human ABO/Rh/MN blood group
The invention relates to a rapid detection method of human ABO / Rh / MN blood group and a kit used by the same. The method and the detection kit of the invention are based on the principle of immunochromatography, and the detection of the blood group is carried out after the reaction of the blood group substance antigen antibody and whether there is a red substance remaining because of the agglutination of the red blood cell. The method of the invention has simple operation and can avoid various defects of the existing common blood group detecting method. In the method of the invention, the added amount of the blood sample is not more than 10, and the total detection process is not more than 2 minutes.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及快速检测人类ABO/Rh/MN血型的方法及相应的试剂盒。
技术介绍
血液分型方法是将人血液红细胞分成A、 B、 AB和O四种不同类型以及Rh 血型系统和MN血型系统的常规方法。鉴定血型的一般方法是将受检红细胞与含 有血型抗体的试剂混合，两者反应后，通过观察红细胞是否发生细胞凝集来判断 被检红细胞的血型。此类方法是首先从病人血清中分离红细胞。将适量的红细胞 与引入试管中或玻片上的试验溶液(含有抗A血清、抗B血清或者抗D血清或 者抗M血清、抗N血清)混和，可以另外加入利于免疫反应进行的其他试剂并 保温、离心和搅拌。然后肉眼观察，确定细胞是否发生了聚集。如果样品在抗A试剂存在下发生细胞聚集，而在抗B存在下不发生聚集即 鉴定为A型血。样品在抗B试剂存在下发生细胞聚集，但在抗A存在下不发生 聚集则鉴定为B型血。样品与抗A和抗B试剂均有聚集，样品为AB型血。样 品与抗A和抗B试剂均不发生反应则定为O型血。样品与抗D试剂发生聚集的 为Rh阳性血型，样品与抗D试剂不发生凝集的血样为Rh阴性血型。MN血型 系统根据是否发生相应的凝集反应可以分为M、 N和MN三种血型。目前检测人ABO/Rh/MN血型的技术可以分为两类， 一类是检测细胞膜上结 合的血型抗原，包括红细胞盐水凝集法、中和实验、吸收实验、解离实验和混合 凝集反应等。另一类是直接检测游离血型抗原，包括协同凝集反应、放射免疫反 应等。目前常用的红细胞盐水凝集法是通过己知的IgM或IgG型抗体结合新鲜红 细胞表面的血型抗原，导致红细胞凝集，进而判断被检血液的血型。此方法被广 泛用于临床输血前的血型检验(配型)。然而，这种方法需要相应的配套试剂， 而且试剂需要低温保存，结果也难以判断。其他血型检测方法也都存在各自的缺点，例如中和实验方法费时较长，而3且灵敏度比较低。解离实验和混合凝集反应法操作要求高，每次实验需要反复摸 索条件，其灵敏度也不高；协同凝结反应方法是用IgG型抗体致敏金黄色葡萄球 菌A蛋白(SPA)，通过观察葡萄球菌是否凝集来判断被检样品的血型，但该方 法对试剂保存要求较高；放射免疫和酶联免疫方法虽然灵敏度高，但是费时较长、 不适合单人份检测，也无法进行现场检测。总之，目前常用的临床血型鉴定方法存在检定时间长、手工劳动强度大，以 及结果受主观偏差影响较大和存在污染的可能等问题。因此，有必要对传统的血 型检测方法做出实质性的改进。
技术实现思路
本方法的一个目的是提供一种检测人ABO/Rh/MN血型的方法，该方法包括 将被测血样滴加在预先包被固定了抗A或抗B或抗D或者抗M或者抗N血型 抗体的测试条上，在测试条的一端滴加冲洗液后，使未与抗体发生凝集反应的红 细胞在冲洗液的泳动下远离加样点处，而与抗体发生免疫凝集的红细胞被残留在 加样点处，然后即可根据反应位点是否有凝集的红细胞残留来判定被测样品的血 型。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中测试条上滴加的待测血样的体积可以 小至l-10pl。所说的冲洗液是lOmM磷酸盐缓冲液(PBS)、生理盐水或者其他 溶液。所说的待检血样是滴加在检测试剂条的加样垫上。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的固定血型抗体的方法可以是物 理吸附或者化学交联等方法。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的待测血样可以是红细胞或者全 血或者是用生理盐水、磷酸盐缓冲液等等张溶液稀释的红细胞或全血悬浮液。并 且所说的血样也可以包括部分溶血或者高血脂含量的血样。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中检测结果的判断可以是肉眼观察或者 利用光学信号或者电信号采集仪器进行判断。简单地说，当血液样品与结合了相应的血型抗体的加样垫接触并反应后，即 在加样垫上与相应的抗体发生免疫结合反应。用冲洗液体冲洗之后，发生了免疫 结合反应的样品即在加样垫上残留显著的红色物质，而没有发生免疫结合反应的血样则被冲洗液冲洗而离开加样垫，加样点处便没有红色物质残留。从而可根据 红细胞与相应抗体发生免疫反应后，加样垫上是否有红色物质的残留来判断红细 胞是否和血型抗体发生了免疫反应，进而判定血液样品的ABO/Rh/MN血型。本专利技术的另一个目的是提供完成上述检测方法的试剂盒，该试剂盒由检测试 剂条、冲洗液和采血工具组成，其中检测试剂条由冲洗垫、加样垫、缓冲垫、吸 水垫、防水胶布以及用来做背衬的聚酯板组成。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的待测血样可以是红细胞或者全 血或者是用生理盐水、磷酸盐缓冲液(PBS)等等张溶液稀释的红细胞悬浮液或 者全血稀释液。并且所说的血样也可以包括溶血样品或者高血脂含量的血样。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的滴加的待测血样的体积不大于 10pl。所说的冲洗液是10mM磷酸盐缓冲液、生理盐水或者其他溶液。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的固定血型抗体的方法可以是物 理吸附或者化学交联等方法。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的冲洗垫、加样垫、缓冲垫、吸 水垫是由玻璃纤维等具有一定孔径的多孔高分子材料制成的，并且其孔径大小至 少允许单个红细胞通过。根据其材质的选择，其中冲洗垫、加样垫和缓冲垫有时 又统称为玻璃纤维垫。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的待测血样是滴加在加样垫上， 并且所说的冲洗液体是滴加在冲洗垫上。加样垫是固定有血型抗体的多孔载体。 并且固定血型抗体的方法可以是物理吸附或者化学交联等方法。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的血样包括有一定程度溶血或者 血脂含量较高的血样。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中检测结果的判断可以是用肉眼或者利 用光学信号或者电信号采集和判读仪器来完成。具体地说，使用本专利技术的试剂盒，检测人ABO/Rh/MN血型的操作步骤包括1)将人ABO/Rh/MN血型抗体直接或者间接固定在加样垫3 (图2)上通 过物理吸附或者化学交联手段将血型抗体固定在具有一定孔径的玻璃纤维垫上。 其中所采用的物理或者化学固定方法对抗体的生物活性影响不大，同时固定化抗 体内添加有抗体蛋白保存剂，保护剂可选自牛血清白蛋白、小牛血清、蛋白胨、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮及其组合物。取高效价的人ABO/Rh/MN血型单克隆抗体，以5mM磷酸盐缓冲液稀释到 适当的效价，并加入抗体固定保护剂以利于抗体在玻璃纤维垫上的固定和保存， 稀释后的抗体溶液中可加入反应增强剂，以促进后续免疫反应的进行。按照每 1.5ml稀释后的抗体铺展5cmX5cm的纤维垫的比例，将抗体铺敷在预先活化的 玻璃纤维垫上，37'C烘干后密封保存。2) 在加样垫3上滴加待测样品，然后在冲洗垫2 (图3)上滴加冲洗液体。 加样并滴加冲洗液后，即发生免疫结合反应，同时显现结果。3) 反应完成并冲洗后，可根据加样垫上是否有红色残留物来判定被检血样 的血型。在ABO血型检测试剂条上，当反应物被冲洗后，含有抗A抗体的加样垫上 有显著的红色物质残留时，说明待测血样被相应抗A抗体捕获，从而与抗A抗 体发生了凝集反应(即阳性反应)；冲洗后，含有抗A抗体的加样垫上没有显著 的红色物质残留时，说明待测血样与抗A抗体未发生凝集反应(即阴性反应)； 当反应冲洗完毕后含有抗B抗体的加样垫上有显著的红色物质残留时，说明待 测血样与抗B抗体发生了凝集反应；冲洗后，含有抗B本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测人ＡＢＯ／Ｒｈ／ＭＮ血型的方法，该方法包括将被测血样滴加在预先包被固定了抗Ａ或抗Ｂ或抗Ｄ或抗Ｍ或抗Ｎ血型抗体的测试条上，在测试条的一端滴加冲洗液后，使未与抗体发生凝集反应的红细胞在冲洗液的泳动下远离加样点处，而与抗体发生免疫凝集的红细胞被残留在加样点处，然后即可根据反应位点是否有凝集的红细胞残留来判定被测样品的血型。
【技术特征摘要】
1、一种检测人ABO/Rh/MN血型的方法，该方法包括将被测血样滴加在预先包被固定了抗A或抗B或抗D或抗M或抗N血型抗体的测试条上，在测试条的一端滴加冲洗液后，使未与抗体发生凝集反应的红细胞在冲洗液的泳动下远离加样点处，而与抗体发生免疫凝集的红细胞被残留在加样点处，然后即可根据反应位点是否有凝集的红细胞残留来判定被测样品的血型。2、 根据权利要求1的方法，其中所说的待测血样可以是红细胞或者全血或 者是用生理盐水或等渗磷酸盐缓冲液稀释的红细胞或全血。3、 根据权利要求1的方法，其中所说的血样可以包括部分溶血或者高血脂 含量的血样。4、 根据权利要求1的方法，其中所说的抗体是以物理吸附或者化学交联法 固定在测试条上。5...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪大明，杨文，肖江群，王保丹，
申请(专利权)人：英科新创厦门科技有限公司，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]
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