用于检测和／或观测颗粒凝集的方法，包括：将一定体积的颗粒悬浮液置于滤器上，构建该滤器以便容许单个颗粒通过；将包含凝集试剂的一定体积的溶液或悬浮液置于颗粒悬浮液的位置；任选地将洗液置于凝集试剂的位置；以及观察该位置表面颗粒的存在，这种存在表示发生了颗粒凝集。也提供用于检测一般凝集反应和血凝集反应的方法，例如特别用于血型鉴定和交叉配血。该方法由向滤器连续垂直加入全血、血型鉴定试剂以及洗涤剂组成。在血凝集的情况下，洗涤后显示有色，优选红色或微红色的斑点。也要求保护基于本发明专利技术的装置和试剂盒，其便于在非实验室环境中不需要实验室用仪器而进行血型鉴定和配血。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总的来说涉及受体-配体相互作用的检测，而更特别地，涉及用于输血医学的血型鉴定和相配目的的血型抗原及其抗体的检测。
技术介绍
颗粒凝集由于其简单性、快速性和相对敏感性，是用于检测和显示抗原-抗体相互作用的广泛采用的免疫方法(Riochet 1993)。一般来说细胞，特别是红细胞，是可经受多种凝集方法作用的颗粒。因而，将红细胞凝集(血凝集)用于在血型鉴定或相配中作为预输血检测过程中的重要成分而检测其表面的抗原和针对这种抗原的抗体(Rouger1993；Brecher 2002)。血液的预输血测试的目的是防止由于供体和受体血细胞之间的免疫不相容性发生血细胞的血凝集或溶血而引起的不良反应。″血型鉴定(blood grouping)″或″血型相配(blood matching)″是用于检测供体红细胞的抗原性组成以及预测受体针对这种抗原的反应的一系列测试。临床最重要的抗原系统是ABO红细胞抗原系统，其是很独特的因为大多数人类个体产生针对那些抗原的抗体而无需已经主动对其免疫。因此，个体的红细胞可能显示A、B或同时显示A和B抗原。大约40％的人群不携带任何一个抗原，因此定型或分类为″O″或零。O型个体血液中的血浆或血清具有针对A和B型抗原的抗体。然而AB型个体血液中的血浆或血清，不显示对A或B型抗原的抗体。因此，A型个体血液中的血浆或血清具有针对B型抗原的抗体，而B型个体血液中的血浆或血清具有针对A型抗原的抗体。ABO抗原系统中的不相容性可能导致强烈的不良反应，其可通过使供体与受体进行相配而加以防止。理想地，供体和受体应属于相同的血型；然而当缺乏相同的供体时，备选的血型可能是合适的，只要受体血清或血浆不携带针对供体红细胞的天然抗体。因此O型是万能供体，因为其红细胞不会与存在于所有其他类型血液中的抗A或抗B的抗体反应。AB型个体可以接受来自所有血型的血液，因为他们不具有对任何上述血型的抗体。Rh或″D″抗原也作为上述″血型鉴定″的部分而一起进行测试。个体的红细胞可能携带Rh抗原(Rh+或″Rh-阳性″)或不携带Rh抗原(Rh-或″Rh-阴性″)。不同于ABO抗原系统，抗Rh(抗D)抗体通常不存在于Rh-阴性血型的个体中。然而，这种抗体在Rh-阴性个体中随着由于用Rh-阳性血液输血或由于怀有Rh-阳性胎儿而产生的免疫增强作用而发展。现代的输血医学规定除ABO相配外，供体和受体之间Rh也要相配，以免在Rh阴性个体中产生Rh抗体，以及防止携带抗Rh抗体个体中的不良反应。除A、B和Rh抗原外，红细胞可能携带往往称为″亚型(sub-groups)″的多种其它抗原(参见Brecher，2002，有详细的论述)。类似于Rh抗原(以及自然界中的大多数抗原)，针对那些抗原的抗体通常不存在于人类血液中，但可能由于先前的血液输入或怀有携带抗原的胎儿而产生抗体。这种抗体称为″出乎意料的″或″稀有的″。尽管归因于这种抗原和抗体的不良反应是稀有或较少的，在工业化国家中当供体血液的供应是充足且合适的时候，进行血液受体中出乎意料的抗体以及供体红细胞上相关抗原的测试。因此显然从上可知，血液凝集过程在输血医学以及经受各种水平测试的各个献血单位和各个献血的潜在受体中举足轻重，其可能包括下列全部或部分血型鉴定测试所有的献血单位和新近接纳的患者和/或潜在的血液受体的血液中ABO/Rh抗原的存在；反转鉴定(Reverse Grouping)测试潜在的血液受体中针对ABO/Rh血液抗原的抗体的存在以及任选地测试其血浆或血清中″出乎意料抗体″的存在；交叉配血这是预输血测试的最后阶段，其中使受体血清/血浆与所选择的供体血液单位的红细胞起反应。在一些国家中，实际上在实验室中不进行交叉配血，而是通过与计算机储存的测验数据进行相配。在其它国家中，例如法国，由护理人员在受体的床边进行交叉配血。可通过多种标准手册和自动化的颗粒凝集方法实行上述测试。所有的颗粒凝集方法涉及使颗粒与可以是血清/血浆的凝集试剂，或人工产生的抗体试剂混合，孵育该混合物不同长度的时间以及，最后观察混合物中凝集颗粒的存在。在所有的方法中，使红细胞与其在血液中的浓度相比稀释1∶10或以上，而洗涤细胞以除去血浆或血清痕迹是强烈推荐或完全必要的。可通过肉眼观察优选被涂敷到平面上的混合物而实现凝集的检测(Riochet，1993)。备选地，多种手段和仪器对于增强凝集和非凝集颗粒之间的视差是有效的。几乎可在任何地方进行″载玻片凝集反应″法，而不需要任何仪器。使一滴稀释的红细胞在显微镜载玻片或任何其它的不透水表面上与一滴血清/血浆/抗体混合。通过棒条或通过涡旋载片几分钟使二个成分混合，并小心观察凝集。这种方法的一些缺陷包括(a)需要混合几分钟；(b)主观目测结果；(c)由干燥导致的假阳性反应；以及(d)不能储存载片。在″试管凝集反应″法中将规定体积的稀释的血球悬浮液与规定体积的血清/血浆/抗体在圆底或V形底的透明试管中混合。在阴性反应的情况下，红细胞可能缓慢地降到试管底部中心里并且可能形成明显的红色″钮扣形″。在阳性反应的情况下，凝集的红细胞形成网格状而遍及试管底的表面而不形成明显的钮扣形。代之以表现为细胞″细筛(lawn)″。代替等待细胞缓慢沉淀的是，现行办法(Brecher，2002；Gamma Biologicals，2001)规定离心红细胞与抗体溶液的混合物，通过重悬浮。在阳性凝集反应情况下细胞块是清楚可见的。也可在微量滴定板的孔中进行试管凝集反应，从而减少试剂和血液的体积并且增加处理量。试管凝集反应法的一些缺陷包括(a)需要实验室用仪器、人员和环境；(b)主观目测结果；(c)不正确的离心速度或时间可能导致假阳性或假阴性结果，因为可能认为细胞块是免疫凝集的；(d)没有直接记录结果；(e)笨重的试管；以及(f)破损和溢出的危险。在″凝胶过滤″法中，将红细胞和血清/血浆/抗体的混合物施加到凝胶分离介质柱上(其可以是微粒)。通过离心迫使混合物进入凝胶。凝集的红细胞不能够穿透凝胶而将保留在凝胶顶部。未凝集的细胞可穿过凝胶柱而到达其底部。小型的凝集物可能进入凝胶柱但不会到达其底部。在美国专利号5,338,689中描述的一种这类方法，使用胶粒柱并且已经发展成用于血型鉴定的商业化成功的产品系列，其可从DiaMed AG，瑞士获得。这种方法的优点是(a)相对容易使用；(b)清楚的结果分析；(c)能够根据对于凝胶的进入分级凝集反应水平。缺陷是(a)需要实验室用仪器、人员和环境；b)没有直接记录结果；(c)笨重的测试硬件(即使制造商将产品称为“卡片”，其实际上是在支持物中的一系列试管，而并没有像″卡片″那么扁平)；以及(d)复杂的制备(将凝胶插入狭窄的试管)而导致高成本。有时，认为针对红细胞抗原的抗体是″不完全的″，因为它们不能直接使红细胞凝集而需要加入抗球蛋白和/或抗补体的抗体(时常称为″Coombs试剂″)以便于凝集反应(Coombs等人，1945；Brecher，2002)。当试图检测针对相对弱的抗原，例如血液亚型以及有时主要血型的某些变体的抗体时，这种现象是最普遍的。上述所有的3种方法都可经受使抗体-反应的红细胞经历Coombs试剂的附加步骤。然而，这种过程必然伴有大量的手工操作。首先，必须充分洗本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测和／或观测颗粒悬浮液中颗粒凝集的方法，包括：将一定体积的所述颗粒悬浮液和含有凝集试剂的一定体积的溶液或悬浮液置于滤器表面上基本相同的所选择的位置，构建所述的滤器使得容许单个未凝集颗粒以垂直于所述表面的方向通过；任选地将洗液置于与所述凝集试剂基本相同的位置；以及观察所述表面在所选择位置的颗粒的存在。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G罗特，F塞缪尔斯，F菲什，
申请(专利权)人：因韦尔尼斯医药瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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