【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种仿生系统和其制造方法。本申请基于2021年10月19日在日本提出申请的日本特愿2021－170989号而要求优先权，并将其内容援引于本说明书中。
技术介绍
1、由于大多数药物由肝脏代谢，由此暴露于药物的肝脏的损伤有不可避免的副作用。药物诱发性肝损伤(drug－induced liver injury，dili)是候选药物在临床阶段退出和医药品退出市场的主要原因。
2、mdr1(multidrug resistance 1)也称为p糖蛋白(p－glycoprotein，p－gp)，是主要将脂溶性的药物从细胞内排出到细胞外的转运蛋白。药物是否是p－gp的底物或者对p－gp表现出抑制作用在评价胆汁淤积型的dili方面较为重要，在美国食品药物管理局(fda)的指南中也是备受重视的项目。
3、因此，尝试了通过在药物开发的早期阶段使用利用了人肝细胞的仿生系统(micro－physiological system，mps)预测dili来开发安全性高的药物(例如参照非专利文献1～非专利文献3)。
4、为了实现用于预测dili的仿生系统，需要充分表达了转运蛋白的肝细胞形成通过紧密连接(tight junction)而结合的膜。
5、然而，原代人肝细胞难以稳定地获得。另外，原代人肝细胞几乎不增殖，存在转运蛋白等肝功能经时降低的问题。
6、因此，非专利文献1中，使用作为来自人肝癌的细胞株的hepg2细胞代替原代人肝细胞。另外，非专利文献2中，使用由人ips细胞诱导的人肝前体
7、现有技术文献
8、非专利文献
9、非专利文献1：chen c.,et al.,kanglaite enhances the efficacy ofcisplatin in suppression of hepatocellular carcinoma via inhibitingcklf1mediated nf-kappab pathway and regulating transporter mediated drugefflux,journal of ethnopharmacology,264,113388,2021.
10、非专利文献2：asai a.,et al.,paracrine signals regulate human liverorganoid maturation frominduced pluripotent stem cells,development,144,1056-1064,2017.
11、非专利文献3：takayama k.,et al.,prediction of interindividualdifferences in hepatic functions and drug sensitivity by using human ips-derived hepatocytes,pnas,111(47),16772-16777,2014.。
技术实现思路
1、然而，由hepg2细胞形成的膜的转运蛋白表达不充分，并且取向性弱。另外，为了由人肝前体细胞形成膜，需要将人肝前体细胞与人脐带静脈内皮细胞(huvec)、乳癌细胞进行共培养。因此，与人肝细胞的差异大，作为评价工具有改进的余地。
2、因此，本专利技术的目的在于提供一种对胆汁排出的评价有用的仿生系统和其制造方法。
3、本专利技术包括以下的实施方式。
4、[1]一种仿生系统，包含容器以及含有人胆管细胞样细胞的膜，上述含有人胆管细胞样细胞的膜包含透过性基板以及层叠在上述透过性基板的一面上的人胆管细胞样细胞的二维组织，上述含有人胆管细胞样细胞的膜将上述容器划分为第一分区和第二分区，上述透过性基板的上述一面侧在上述第一分区露出，上述透过性基板的另一面侧在上述第二分区露出，上述人胆管细胞样细胞表达p糖蛋白(p－glycoprotein，p－gp)，由下述式(1)算出的排出比为1.5以上。
5、排出比＝(将罗丹明123(cas编号：62669－70－9)添加于上述第二分区时，从上述第二分区向上述第一分区透过的罗丹明123的透过速度)/(将罗丹明123添加于上述第一分区时，从上述第一分区向上述第二分区透过的罗丹明123的透过速度)…(1)
6、[2]根据[1]所述的仿生系统，其中，上述二维组织的跨上皮电阻为100ω·cm2以上。
7、[3]根据[1]或[2]所述的仿生系统，其中，上述二维组织为单层的人胆管细胞样细胞。
8、[4]根据[1]～[3]中任一项所述的仿生系统，其中，上述透过性基板是由胶原蛋白或层粘连蛋白、或者它们的组合涂敷而得的基板。
9、[5]根据[1]～[4]中任一项所述的仿生系统，其中，上述人胆管细胞样细胞进一步表达选自mrp2、bsep以及bcrp中的至少1种以上的转运蛋白。
10、[6]一种仿生系统的制造方法，包括：
11、在利用透过性基板划分为第一分区和第二分区的容器的上述透过性基板的一面上接种人胆管细胞样细胞的工序，以及
12、将上述人胆管细胞样细胞在包含0.001～5v/v％的细胞外基质的培养基中进行培养，其结果，形成在上述透过性基板的上述一面上层叠有上述人胆管细胞样细胞的二维组织的含有人胆管细胞样细胞的膜的工序。
13、[7]根据[6]所述的仿生系统的制造方法，其中，上述细胞外基质包含层粘连蛋白。
14、[8]一种仿生系统的制造方法，包括：
15、在利用透过性基板划分为第一分区和第二分区的容器的上述透过性基板的一面上接种人胆管细胞样细胞的工序，以及
16、将上述人胆管细胞样细胞中培养基中进行培养，其结果，形成在上述透过性基板的上述一面上层叠有上述人胆管细胞样细胞的二维组织的含有人胆管细胞样细胞的膜的工序；
17、上述透过性基板是由胶原蛋白或层粘连蛋白、或者它们的组合涂敷而得的基板。
18、[9]根据[6]～[8]中任一项所述的仿生系统的制造方法，其中，上述人胆管细胞样细胞的接种密度为5000～200000个/cm2。
19、[10]根据[6]～[9]中任一项所述的仿生系统的制造方法，其中，上述培养基含有选自wnt信号转导通路活化剂、上皮生长因子(egf)、成纤维细胞生长因子(fgf)、肝细胞增殖因子(hgf)以及camp信号转导通路活化剂中的1种或2种以上的因子。
20、[11]根据[6]～[10]中任一项所述的仿生系统的制造方法，其中，上述培养基含有tgfβ信号转导通路抑制剂。
21、[12]根据[6]～[11]中任一项所述的仿生系统的制造方法，其中，上述培养基实质上不含有选自dapt、wnt信号转导通路抑制剂以及二甲基亚砜(dmso)中的1种或2种以上。
22、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种仿生系统，包含容器以及含有人胆管细胞样细胞的膜，
2.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述二维组织的跨上皮电阻为100Ω·cm2以上。
3.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述二维组织为单层的人胆管细胞样细胞。
4.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述透过性基板是由胶原蛋白或层粘连蛋白、或者它们的组合涂敷而得的基板。
5.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述人胆管细胞样细胞进一步表达选自MRP2、BSEP以及BCRP中的至少1种以上的转运蛋白。
6.一种仿生系统的制造方法，包括：
7.根据权利要求6所述的仿生系统的制造方法，其中，所述细胞外基质包含层粘连蛋白。
8.一种仿生系统的制造方法，包括：
9.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，
10.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，所述培养基含有选自Wnt信号转导通路活化剂、上皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、肝细胞增殖因子(HGF)以及cAMP信号转导通路
11.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，所述培养基含有TGFβ信号转导通路抑制剂。
12.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，所述培养基实质上不含有选自DAPT、Wnt信号转导通路抑制剂和二甲基亚砜(DMSO)中的1种或2种以上。
13.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，所述人胆管细胞样细胞是由人原代肝细胞建立的人胆管细胞样细胞株。
14.一种仿生系统，是通过权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法而得到的。
15.一种受试物质的筛选方法，包括使受试物质与权利要求1～5中任一项所述的仿生系统的所述含有人胆管细胞样细胞的膜接触的工序。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种仿生系统，包含容器以及含有人胆管细胞样细胞的膜，
2.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述二维组织的跨上皮电阻为100ω·cm2以上。
3.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述二维组织为单层的人胆管细胞样细胞。
4.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述透过性基板是由胶原蛋白或层粘连蛋白、或者它们的组合涂敷而得的基板。
5.根据权利要求1所述的仿生系统，其中，所述人胆管细胞样细胞进一步表达选自mrp2、bsep以及bcrp中的至少1种以上的转运蛋白。
6.一种仿生系统的制造方法，包括：
7.根据权利要求6所述的仿生系统的制造方法，其中，所述细胞外基质包含层粘连蛋白。
8.一种仿生系统的制造方法，包括：
9.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造方法，其中，
10.根据权利要求6或8所述的仿生系统的制造...
【专利技术属性】
技术研发人员：增田范生，冈田辽，荻原琢男，
申请(专利权)人：JSR株式会社，
类型：发明
国别省市：
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