【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种类器官的制造方法、类器官制造用培养基、类器官及被检物质的评价方法。本申请基于2021年9月30日在日本提出申请的日本专利特愿2021-160758号而主张优先权，将其内容引用至本申请中。
技术介绍
1、已知转化生长因子-β(transforming growth factor-β，tgf-β)信号与上皮细胞、内皮细胞、血细胞、淋巴细胞等多种细胞的增殖抑制能力、细胞外基质的积累能力有关。为了制造类器官，需要对tgf-β信号进行控制，特别是为了使细胞增殖，需要对tgf-β信号进行下调控制。
2、作为对tgf-β信号进行下调控制的方法，使用了与作为tgf-β信号相关的受体之一的tgf-β受体键结并进行抑制的tgf-β受体拮抗剂(参照专利文献1、非专利文献1)。然而，报告了在使用了a83-01等拮抗剂时其他靶标(off-target，tgf-β受体以外的受体)也被抑制的情况，其影响令人担忧(参照非专利文献2)。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1：美国专利申请公开第2014/0243227号说明书
6、非专利文献
7、非专利文献1：佐藤t.等人，人结肠、腺瘤、腺癌及巴雷特上皮来源的上皮类器官的长期扩展，《肠胃病学》(sato t.,et al.,long-term expansion of epithelialorganoids from human colon,adenoma,adenocarcinoma,and barrett's
8、非专利文献2：沃格特j.等人，tgf-β与bmp途径的小分子抑制剂的特异性，《蜂窝信号(cellular signalling，cell signal)》(vogt j.,et al.,the specificities ofsmall molecule inhibitors of the tgf-beta and bmp pathways,cell signal.)，23(11),1831-1842,2011.
技术实现思路
1、专利技术所要解决的问题
2、本专利技术的目的在于提供一种优异的类器官的制造方法、用于所述制造的培养基、通过所述制造方法获得的类器官、及使用了类器官的被检物质的评价方法。
3、解决问题的技术手段
4、本专利技术包含以下的实施方式。
5、[1]一种类器官的制造方法，包括在含有环肽或其药学上能够接受的盐(以下，也称为“环肽群组”)的培养基中对人类干细胞进行培养，所述环肽具有下述式(1)中记载的氨基酸序列(序列编号1)。
6、[化1]
7、
8、[式(1)中，x1表示tyr、w6n、w7n或nal1，x2表示val、lys、kcop或kcom，x3表示tyr或4py，x4表示asp、phe、kcop、glu或kcom，x5表示tyr或4py，x6表示val、glu、kcop或kcom，x7表示任意的氨基酸残基，r不存在或表示c末端修饰基，n表示0或1的整数，peg为n-(2-苯基乙基)-甘氨酸，nal1为β-(1-萘基)-l-丙氨酸，w6n为(s)-2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基)丙酸，w7n为(s)-2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸，kcop为n6-(4-(羧甲基)哌嗪-1-羰基)-l-赖氨酸，kcom为n6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-)五羟基己基)氨甲酰基)-l-赖氨酸，4py为4-吡啶基-l-丙氨酸]
9、[2]根据[1]所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中的x1～x7、r、n的组合为下述表1中所示的组合。
10、[表1]
11、
12、表1中，“peg”表示聚乙二醇链。
13、[3]根据[1]或[2]所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中记载的氨基酸序列中的x1为nal1，x2为val，x4为asp，x5为tyr。
14、[4]根据[1]至[3]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列中的phe与cys的键结是经由硫醚键的键结。
15、[5]根据[1]至[4]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列的x7包含gly。
16、[6]根据[1]至[5]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基中包含的所述环肽及其药学上能够接受的盐的合计浓度为0.1nm～10μm。
17、[7]根据[1]至[6]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有wnt信号增强剂。
18、[8]根据[1]至[7]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有上皮生长因子(egf)、成纤维细胞生长因子(fgf)、胰岛素样生长因子(igf)或肝细胞生长因子(hgf)、或者它们的组合。
19、[9]根据[1]至[8]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有骨形成因子(骨形成蛋白质)抑制剂。
20、[10]根据[1]至[9]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有rho激酶(rho相关卷曲螺旋激酶)信号转导抑制剂。
21、[11]根据[1]至[10]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基实质上不含有间变性淋巴瘤激酶5、间变性淋巴瘤激酶4或间变性淋巴瘤激酶7、或者它们的组合的拮抗剂。
22、[12]根据[1]至[11]中任一项所述的类器官的制造方法，其中，在使所述人类干细胞与细胞外基质接触的同时对所述人类干细胞进行培养。
23、[13]一种类器官制造用培养基，含有环肽或其药学上能够接受的盐，所述环肽具有下述式(1)中记载的氨基酸序列(序列编号1)。
24、[化2]
25、
26、[式(1)中，x1表示tyr、w6n、w7n或nal1，x2表示val、lys、kcop或kcom，x3表示tyr或4py，x4表示asp、phe、kcop、glu或kcom，x5表示tyr或4py，x6表示val、glu、kcop或kcom，x7表示任意的氨基酸残基，r不存在或表示c末端修饰基，n表示0或1的整数，peg为n-(2-苯基乙基)-甘氨酸，nal1为β-(1-萘基)-l-丙氨酸，w6n为(s)-2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基)丙酸，w7n为(s)-2-氨基-3-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸，kcop为n6-(4-(羧甲基)哌嗪-1-羰基)-l-赖氨酸，kcom为n6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-)五羟基己基)氨甲酰基)-l-赖氨酸，4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种类器官的制造方法，包括在含有环肽或其药学上能够接受的盐的培养基中对人类干细胞进行培养，所述环肽具有下述式(1)中记载的氨基酸序列，
2.根据权利要求1所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中的X1～X7、R、n的组合为下述表1中所示的组合，
3.根据权利要求1或2所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中记载的氨基酸序列中的X1为Nal1，X2为Val，X4为Asp，X5为Tyr。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列中的Phe与Cys的键结是经由硫醚键的键结。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列的X7包含Gly。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基中包含的所述环肽及其药学上能够接受的盐的合计浓度为0.1nM～10μM。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有Wnt信号增强剂。
8.根据权利要求1至7中
9.根据权利要求1至8中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有骨形成因子(骨形成蛋白质)抑制剂。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有Rho激酶(Rho相关卷曲螺旋激酶)信号转导抑制剂。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基实质上不含有间变性淋巴瘤激酶5、间变性淋巴瘤激酶4或间变性淋巴瘤激酶7、或者它们的组合的拮抗剂。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的类器官的制造方法，其中，在使所述人类干细胞与细胞外基质接触的同时对所述人类干细胞进行培养。
13.一种类器官制造用培养基，含有环肽或其药学上能够接受的盐，所述环肽具有下述式(1)中记载的氨基酸序列，
14.一种类器官，通过如权利要求1至12中任一项所述的类器官的制造方法而获得。
15.一种被检物质的评价方法，包括：使所述被检物质与如权利要求14所述的类器官接触的步骤；以及对所述被检物质给所述类器官造成的影响进行评价的步骤。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种类器官的制造方法，包括在含有环肽或其药学上能够接受的盐的培养基中对人类干细胞进行培养，所述环肽具有下述式(1)中记载的氨基酸序列，
2.根据权利要求1所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中的x1～x7、r、n的组合为下述表1中所示的组合，
3.根据权利要求1或2所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中记载的氨基酸序列中的x1为nal1，x2为val，x4为asp，x5为tyr。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列中的phe与cys的键结是经由硫醚键的键结。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述式(1)中所示的氨基酸序列的x7包含gly。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基中包含的所述环肽及其药学上能够接受的盐的合计浓度为0.1nm～10μm。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有wnt信号增强剂。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的类器官的制造方法，其中，所述培养基还含有上皮生长因子(egf)、...
【专利技术属性】
技术研发人员：新井一也，伊藤学，庄司健太郎，杉本奈津美，冈田辽，
申请(专利权)人：JSR株式会社，
类型：发明
国别省市：
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