自复制mRNA原液工业化生产及分离纯化方法及其应用技术

本公开涉及一种自复制mRNA原液工业化生产及分离纯化方法及其应用。所述方法①通过对自复制RNA共转录体系(IVT反应体系)，通过优化缓冲盐离子的类型和浓度以及组合其他盐类型，提高自复制RNA原液产量及完整性；②通过对mRNA采用不同的纯化工艺以及纯化工艺组合入手；并对③对亲和层析中缓冲液体系中还原剂的添加种类、用量，以及优化柱层析的上样缓冲液盐离子成分及洗杂比例来提高工业生产的产能和完整性，并且降低saRNA原液中的杂质和副产物。

【技术实现步骤摘要】

本公开属于核糖核酸分离纯化，具体涉及一种自复制mrna原液工业化生产及分离纯化方法及其应用。

技术介绍

1、mrna疫苗是将编码疾病特异性抗原的mrna通过递送系统引入体内，利用宿主细胞的蛋白质合成机制产生抗原，从而触发免疫应答。除了疫苗，mrna技术作为通用性平台技术，理论上mrna具有合成任意一种蛋白的潜能，有可能一定程度上替代和补充蛋白质疗法。尽管在疫情之下，mrna疫苗已经取得了良好的效果，展现出巨大的应用潜力，但mrna技术依然存在诸多限制，比如表达时间过短、蛋白翻译数量有限就是其中之一。这一特性虽然可以带来一定的安全性，但是对于某些疗法比如蛋白质替代，这一特性就成了限制短板，导致需要重复给药以维持蛋白表达量，但这同时又会带来新的风险与挑战，比如免疫原性与中和抗体问题。

2、自复制mrna(即，self-amplifying rna，sarna)是源自正链rna病毒的一条单链rna，除了编码目标抗原蛋白，还编码rna细胞内扩增所需的病毒非结构蛋白(nsps)，被认为是下一代更具潜力的mrna技术。自复制mrna模拟正义单链rna病毒的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种自复制mRNA原液工业化生产及分离纯化方法，包括如下步骤：

2.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述共转录加帽反应过程中，采用缓冲溶液体系。

3.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液。

4.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁、氯化镁；优选为醋酸镁。

5.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述镁离子浓度为30～50mM，优选35mM。

6.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁，镁离子浓度为30～50mM。</p>

7.根据...

【技术特征摘要】

1.一种自复制mrna原液工业化生产及分离纯化方法，包括如下步骤：

2.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述共转录加帽反应过程中，采用缓冲溶液体系。

3.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括镁离子溶液。

4.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁、氯化镁；优选为醋酸镁。

5.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述镁离子浓度为30～50mm，优选35mm。

6.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁，镁离子浓度为30～50mm。

7.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁和醋酸钠的组合。

8.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液中，醋酸镁浓度为30～50mm，优选35mm。

9.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液中，醋酸钠浓度为5～30mm，优选15mm。

10.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁和醋酸钠的组合，其中，醋酸镁浓度为30～50mm，醋酸钠浓度为5～30mm。

11.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述纯化的方法选自亲和层析法、超滤换液法或纤维素层析法；优选为亲和层析法。

12.根据前述任一项所述权利要求的方法，其中，所述缓冲溶液包括醋酸镁，镁离子浓度为30～50mm；采用亲和层析法将mrna混合液进行纯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：董开，宋更申，李艳芬，杨婵，张晋瑜，梁丽敏，刘美婷，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：