【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及二肽盐及其在细胞培养中的用途。此外，本专利技术涉及生物技术生产方法。更具体地说，本专利技术涉及用于生物技术生产方法的改进的培养基、使用这种改进的培养基的方法，以及从使用所述改进的培养基的方法中获得的产品。
技术介绍
0、专利技术背景
1、化学成分确定的二肽是细胞培养基配方中广泛使用的高可溶性和稳定的氨基酸前体。为了增加某些限制性氨基酸如l-酪氨酸或l-胱氨酸的溶解度，高可溶性氨基酸如甘氨酸、l-丙氨酸、l-脯氨酸和l-赖氨酸可以被偶联形成二肽，这导致那些限制性氨基酸的高可溶性天然二肽前体。例如，wo 2011/133902公开了包含二肽的细胞培养基，其中所述二肽包括在水中具有低溶解度的氨基酸，在这种情况下是酪氨酸和半胱氨酸。作者发现，通过在二肽中掺入酪氨酸和半胱氨酸，可以改善氨基酸的溶解度和稳定性问题。更高的稳定性和溶解度使得能够配制化学成分确定的高浓度培养基，这是运行强化和高产的工业细胞培养方法所必需的。
2、wo 2012/019160公开了动物细胞培养物，其中在生产阶段，用含tyr和his的二肽补充无血清培养基。描述了添加含tyr和his的二肽对生长和产物形成的积极作用。
3、由于其在中性ph下的高溶解度，l-赖氨酸特别适合作为二肽形成的伴侣，以提高低溶解度氨基酸的溶解度。这一见解已被用于合成高可溶性形式的l-胱氨酸、l-酪氨酸和支链氨基酸l-缬氨酸、l-亮氨酸和l-异亮氨酸。ep3372671公开了含有lys的二肽，其比赖氨酸残基被l-丙氨酸或l-甘氨酸取代的
4、然而，除了以二肽的形式提供高可溶性营养素外，还需要以高度生物相容性和稳定的形式提供这些营养素。高度生物相容的形式能够提供高浓度的这些营养素，以解决代谢或生物加工的限制。稳定性需要足以防止在液体或干粉培养基和补充剂中在较长时间内降解。也需要足够的稳定性从而以干燥形式运输和储存单个成分，最好是在环境温度下。特别是在进料培养基中，营养素以较高浓度存在。此外，储存培养基还应含有较高浓度的可溶性营养素，因为这些培养基被稀释以用于细胞培养的最终应用。这些问题没有得到充分解决，仍然需要改进这些参数。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本专利技术解决了上述缺点。本专利技术由所附独立权利要求的术语限定。本专利技术的优选实施方案由从属权利要求限定。
2、令人惊奇的是，发现这些参数可以通过制备和使用含有碱性氨基酸的二肽的正确盐形式来改善，特别是对于含有l-赖氨酸的二肽。
3、当制备各种盐酸盐并将其与不含无机抗衡离子的赖氨酸二肽的碱性内盐进行比较时，发现氯化物形式显著提高了干粉的储存稳定性。
4、还发现在细胞培养过程中，肽中的l-赖氨酸的二盐酸盐形式在高浓度下的生物相容性低于一盐酸盐形式(并且这不是由ph效应引起的)。
5、例如，在(lys-cys)2的情况下，二盐酸盐(2hcl)形式可以以显著高于四盐酸盐(4hcl)形式的浓度提供。事实上，虽然高浓度的二盐酸盐形式提高了细胞活力，但四盐酸盐形式在相同浓度下却降低了细胞活力。
6、根据本专利技术的组合物还可以是化妆品、营养补充剂、用于临床营养的营养液、或细胞或组织培养基(基础培养基、补料培养基或灌注培养基)的组成部分。
7、本专利技术进一步涉及本专利技术的培养基用于培养细胞，优选植物细胞、动物细胞或哺乳动物细胞的用途。
8、本专利技术的另一方面涉及一种制造细胞培养产物的方法，包括以下步骤：(i)提供能够产生所述细胞培养产物的细胞；(ii)使所述细胞与根据本专利技术的培养基接触；(iii)从所述培养基或从所述细胞获得所述细胞培养产物。
9、在下面的专利技术详述中进一步详细描述本专利技术的优选实施方案。
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1.一种二肽盐，所述二肽盐包含由两个氨基酸组成的二肽和氯抗衡离子，所述氨基酸是天然氨基酸，其中至少一个氨基酸是碱性氨基酸，其中碱性氨基酸与氯离子的摩尔比为0.8至1.2。
2.根据权利要求1所述的二肽盐，其中所述二肽是Xxx-Yyy或Yyy-Xxx，其中Xxx是碱性氨基酸，Yyy是另一种氨基酸。
3.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述另一种氨基酸Yyy选自半胱氨酸/胱氨酸(Cys)或酪氨酸(Tyr)。
4.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述二肽是Xxx-Cys或Cys-Xxx，并且其中所述二肽盐是(Xxx-Cys)2 2HCl或(Cys-Xxx)22HCl的形式。
5.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述碱性氨基酸选自赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)和组氨酸(His)。
6.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述二肽盐是根据式I的(Lys-Cys)22HCl：
7.一种化妆品、营养补充剂、临床营养用营养液或生物药品制剂，其包含根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种二肽盐，所述二肽盐包含由两个氨基酸组成的二肽和氯抗衡离子，所述氨基酸是天然氨基酸，其中至少一个氨基酸是碱性氨基酸，其中碱性氨基酸与氯离子的摩尔比为0.8至1.2。
2.根据权利要求1所述的二肽盐，其中所述二肽是xxx-yyy或yyy-xxx，其中xxx是碱性氨基酸，yyy是另一种氨基酸。
3.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述另一种氨基酸yyy选自半胱氨酸/胱氨酸(cys)或酪氨酸(tyr)。
4.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述二肽是xxx-cys或cys-xxx，并且其中所述二肽盐是(xxx-cys)2 2hcl或(cys-xxx)22hcl的形式。
5.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述碱性氨基酸选自赖氨酸(lys)、精氨酸(arg)和组氨酸(his)。
6.根据前述权利要求中任一项所述的二肽盐，其中所述二肽盐是根据式i的(lys-cys)22hcl：
7.一种化妆品、营养补充剂、临床营养用营养液或生物药品制剂，其包含根据前述权利要求中任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·贝尔，A·贝内迪克特，C·约斯特，M·席林，
申请(专利权)人：赢创运营有限公司，
类型：发明
国别省市：
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