【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机化工，特别涉及本专利技术提供一种抗剪切力强的脂肪酶固定方法以及一种用于固定化脂肪酶抗剪切力的快速评价方法。在水体系模拟高速搅拌状态，通过测定浊度和酶活力的方法评价固定化脂肪酶的吸附稳定性和抗剪切力。
技术介绍
1、固定化脂肪酶是将脂肪酶通过物理或化学的方法与某种物体结合制备成为不溶于水的，但仍具有催化活性的脂肪酶复合体，这一过程是将单体的游离脂肪酶催化剂转变成了被某种物体束缚的复合脂肪酶催化剂。常见的已经商品化的固定化酶大都以树脂作为载体，通过交联或吸附法进行游离脂肪酶的固载。商品化固定化酶在重复使用过程中，经常会出现溶胀、破碎、酶活力降低等状况。如何在使用前有效的评估其抗剪切力和稳定性，对于实际工业化应用有较大的意义。但目前，关于固定化脂肪酶抗剪切力的研究较少，大多数文献和专利关注于新型载体材料的制备以及固定化脂肪酶重复使用过程中的酶活力稳定性。而通过对于树脂等其他耐压材料的抗剪切力，破碎度等评价方法的查询，发现大都采用材料力学测试仪器等设备进行抗剪切强度、破碎度等检测所测定材料与固定化脂肪酶差异较大，且应用场景和目的差异较大，因此不具备参考价值。
技术实现思路
1、针对现有技术空白，本专利技术提供一种用于固定化脂肪酶抗剪切力的评价方法。在水体系模拟高速搅拌状态，通过测定浊度和浊度后酶活保留率的方法评价固定化脂肪酶的吸附稳定性和抗剪切力。工艺条件简单，无需严苛实验条件，即可实现评价，对后续固定化脂肪酶的产业化应用提供数据和方法支持。
2、本专利技术请
3、一种快速检测固定化脂肪酶抗剪切力的方法，通过下述步骤实现：
4、s1.固定化脂肪酶制备：投加20g树脂，30g去离子水于室温200rpm搅拌1h，过滤；向洗涤的树脂中投加30g液体脂肪酶于室温200rpm搅拌1h，过滤；向吸附的树脂中投加30g去离子水室温200rpm搅拌1h。过滤后，烘干备用。
5、s2.剪切过程：投加固定化脂肪酶于水中，于1000rpm/min机械搅拌1h后，静置分液，搅拌保证搅拌桨不触底，固定化酶投加比例为1-10％。
6、s3.样品检测：取上述液体于浊度计测定浊度，以评估固定化脂肪酶破碎率和吸附稳定性；取测定浊度后固定化酶烘干后测定酶活，计算酶活保留率：浊度后酶活/初始酶活*100％＝酶活保留率。
7、进一步的，所述步骤s3中，酶活测定方法具体为：称取月桂酸8.0g于50ml具塞锥形瓶中，于60℃水浴锅内使月桂酸溶解，在加热状态缓慢加入3ml丙醇和0.3ml纯水，使其充分混匀，此为底物，保存于60℃。向上述溶液投加30mg脂肪酶，瓶盖塞紧后，放入60℃水浴，不断摇晃20min，取上清液0.5ml。转移至100ml容量瓶用正庚烷定容，待气相检测，利用外标法进行酶活力测定。
8、作为本专利技术一个优选的实施例，所述步骤s2中，投加3.0g固定化脂肪酶于50.0g水中，于1000rpm/min搅拌1h后，静置分液。
9、本专利技术同时请求保护固定化脂肪酶制备方法，步骤如下：每投加20g树脂，用30g去离子水于室温200rpm/min搅拌1h，过滤；向洗涤的树脂中投加30g液体脂肪酶于室温200rpm/min搅拌1h，过滤；向吸附的树脂中投加30g去离子水室温200rpm搅拌1h。过滤后，烘干备用。其中，树脂采用大孔吸附树脂，型号包括但不限于d101、ab-8、xad-4、xad-16、hp-20等。
10、所述液体脂肪酶来源包括：米根霉脂肪酶、德氏根霉脂肪酶、雪白根霉脂肪酶、猪胰脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、南极假丝酵母脂肪酶、米曲霉脂肪酶等。
11、为了实现固定化脂肪酶的抗剪切力和酶活稳定性快速评价的目的，本专利技术构建了能够模拟实际釜式长期应用的反应模型，特别限定了转速和搅拌时间，搅拌时间延长，浊度变化趋于稳定，因此，当转速达到1000rpm/min，搅拌1h可以在该反应模型下进行快速评价。
12、有益效果：
13、1.本专利技术的创新点在于工序简单，无需材料力学测试仪器、混床等设备，只采用搅拌、分液、浊度以达到评价，简单便捷。
14、2.本专利技术的创新点在于采用高速、短时的搅拌模拟和代表实际釜式的长期应用的效果，填补了固定化脂肪酶抗剪切力评价方法的空白。
15、3.本专利技术的创新点在于通过测定浊度以及酶活保留率的方法综合评估固定化脂肪酶的抗剪切力和酶活稳定性。
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1.一种固定化脂肪酶抗剪切力快速评价的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，酶活测定方法具体为：称取月桂酸8.0g于50ml具塞锥形瓶中，于60℃水浴锅内使月桂酸溶解，在加热状态缓慢加入3ml丙醇和0.3ml纯水，使其充分混匀，此为底物，保存于60℃；向上述溶液投加30mg脂肪酶，瓶盖塞紧后，放入60℃水浴，不断摇晃20min，取上清液0.5ml；转移至100ml容量瓶用正庚烷定容，待气相检测，利用外标法进行酶活力测定。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的固定化脂肪酶制备方法具体为：投加20g树脂，30g去离子水于室温200rpm搅拌1h，过滤；向洗涤的树脂中投加30g液体脂肪酶于室温200rpm搅拌1h，过滤；向吸附的树脂中投加30g去离子水室温200rpm搅拌1h，过滤后，烘干备用。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，投加3.0g固定化脂肪酶于50.0g水中，于1000rpm/min搅拌1h后，静置分液。
5.一种固定化脂肪酶的制备方法，
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，树脂采用大孔吸附树脂，型号包括但不限于D101、AB-8、XAD-4、XAD-16、HP-20。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，液体脂肪酶包括但不限于米根霉脂肪酶、德氏根霉脂肪酶、雪白根霉脂肪酶、猪胰脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、南极假丝酵母脂肪酶、米曲霉脂肪酶。
...【技术特征摘要】
1.一种固定化脂肪酶抗剪切力快速评价的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤s3中，酶活测定方法具体为：称取月桂酸8.0g于50ml具塞锥形瓶中，于60℃水浴锅内使月桂酸溶解，在加热状态缓慢加入3ml丙醇和0.3ml纯水，使其充分混匀，此为底物，保存于60℃；向上述溶液投加30mg脂肪酶，瓶盖塞紧后，放入60℃水浴，不断摇晃20min，取上清液0.5ml；转移至100ml容量瓶用正庚烷定容，待气相检测，利用外标法进行酶活力测定。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的固定化脂肪酶制备方法具体为：投加20g树脂，30g去离子水于室温200rpm搅拌1h，过滤；向洗涤的树脂中投加30g液体脂肪酶于室温200rpm搅拌1h，过滤；向吸附的树脂中投加30g去离子水室温200rpm搅拌1h，过滤后，烘干备用。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：石亚楠，洪永德，杨文文，刘明，王玲双，吴文忠，
申请(专利权)人：大连医诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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