【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测，更具体地，本专利技术涉及一种快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，以及该快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条的制备方法。
技术介绍
1、人乳头瘤病毒(human papilloma virus，简称hpv)，是一种无外包膜的环状双链dna病毒，包含200多种不同的基因型，根据其致癌风险可分为高危亚型和低危亚型。其中高危型hpv的持续感染与宫颈癌(cervical cancer，简称cc)的发生发展密切相关，其中hpv16型是世界感染率最高及致癌的主要亚型。此外，cc的发展通常是一个缓慢的过程，在感染hpv后，需要经历大约10～30年才会发展为cc。因此，针对高危型hpv，尤其是hpv16的及时检测对于cc的诊断、治疗及预后具有十分重要的意义。
2、目前，临床上cc的筛查方法包括巴氏涂片、液基薄层细胞检测和阴道镜组织活检等可较为灵敏且准确地对cc进行早期筛查，然而这些方法的可接受性较差，且通过这些方法所能获得的分子信息十分有限。hpv分子检测技术包括实时荧光pcr技术、核酸杂交信号放大技术、基因芯片技术以及新兴的下一代测序技术和原位杂交技术等，可以获得更多的hpv分子信息，具有准确性好、灵敏度高和特异性强等优点，但同时也存在耗时长、费用高、需要专业人员操作、依赖仪器等缺点，不利于大规模筛查。由于目前方法的局限性，hpv筛查的普及仍然是一项重大的挑战，特别是在一些资源匮乏的国家与地区。因此，迫切需要开发出一种操作简单、成本低、高效准确的检测高危型hpv的方法
技术实现思路
1、为了克服现有检测方法耗时、费用高、需要专业人员操作等不足，本专利技术提供了一种快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，采用该检测试纸条检测hpv16dna-rna杂合体时，检测方法操作简单、快速、准确、灵敏，在提高宫颈癌早期诊断的可及性和有效性方面具有较大的潜力，具有较大的应用价值。
2、为此，本专利技术提供的技术方案是这样的：
3、一种快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，包括pvc底板，所述的pvc底板上依次交叠粘贴有样品垫、结合垫、nc膜、吸水垫，所述的结合垫上喷涂有胶体金标记抗体；所述的nc膜上划上包被抗原作为检测线，划上羊抗鼠二抗作为质控线；
4、所述的胶体金标记抗体为胶体金-s9.6单克隆抗体的偶联物；
5、所述的包被抗原为hpv16 dna-rna杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物。
6、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述的s9.6单克隆抗体是通过培养atcc#hb-8730的s9.6杂交瘤细胞株，致敏小鼠制备腹水所得到的抗dna-rna杂合体的特异性抗体。
7、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述的hpv16 dna-rna杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物通过下述方法制备的：取浓度为20nm生物素标记的hpv16 dna-rna杂合体和浓度为2mg/ml的链霉亲和素等体积混合，在室温下搅拌反应1小时，即得到hpv16 dna-rna杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物。
8、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述的生物素标记的hpv16 dna-rna杂合体中的dna序列为genbank登录号k02718序列中的第65-559位；所述的生物素标记的hpv16 dna-rna杂合体中的rna序列与dna序列互补。
9、进一步的，上述的快速检测hpvl6 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述的包被抗原的使用浓度为1-10nm。
10、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述羊抗鼠二抗的使用浓度为0.5-2mg/ml。
11、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述胶体金标记抗体的喷涂量为2-8μl/cm。
12、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述的检测线与质控线在nc膜上的划线量为1-2μl/cm，且相互间平行距离为5mm。
13、进一步的，上述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，所述吸水垫粘贴于nc膜靠近质控线一端，并与nc膜交叠1-2mm，所述结合垫与样品垫依次粘贴于nc膜靠近检测线一端，并两两之间相互交叠1-2。
14、与现有技术相比，本专利技术至少具有如下优点或有益效果之一：
15、(1)本专利技术基于胶体金纳米颗粒开发了一种免疫层析试纸条用于hpv16 dna-rna杂合体的检测，检测过程简单，耗时短，灵敏度高，特异性强，在提高宫颈癌筛查的普及性及早期检出率方面具有极大的潜力，具有极大的应用价值。
16、(2)本专利技术所制备的胶体金标记抗体具有双重功能，一方面可以作为试纸条的信号标签，另一方面可以特异性结合dna-rna杂合体，具有稳定的性能。
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1.一种快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，包括PVC底板，所述的PVC底板上依次交叠粘贴有样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫，其特征在于，所述的结合垫上喷涂有胶体金标记抗体；所述的NC膜上划上包被抗原作为检测线，划上羊抗鼠二抗作为质控线；
2.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的S9.6单克隆抗体是通过培养ATCC#HB-8730的S9.6杂交瘤细胞株，致敏小鼠制备腹水所得到的抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体。
3.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的HPV16 DNA-RNA杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物通过下述方法制备的：取浓度为20nM生物素标记的HPV16 DNA-RNA杂合体和浓度为2mg/mL的链霉亲和素等体积混合，在室温下搅拌反应1小时，即得到HPV16 DNA-RNA杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物。
4.根据权利要求3所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特
5.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的包被抗原的使用浓度为1-10nM。
6.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述羊抗鼠二抗的使用浓度为0.5-2mg/mL。
7.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金标记抗体的喷涂量为2-8μL/cm。
8.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的检测线与质控线在NC膜上的划线量为1-2μL/cm，且相互间平行距离为5mm。
9.根据权利要求1所述的快速检测HPV16 DNA-RNA杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述吸水垫粘贴于NC膜靠近质控线一端，并与NC膜交叠1-2mm，所述结合垫与样品垫依次粘贴于NC膜靠近检测线一端，并两两之间相互交叠1-2mm。
...【技术特征摘要】
1.一种快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，包括pvc底板，所述的pvc底板上依次交叠粘贴有样品垫、结合垫、nc膜、吸水垫，其特征在于，所述的结合垫上喷涂有胶体金标记抗体；所述的nc膜上划上包被抗原作为检测线，划上羊抗鼠二抗作为质控线；
2.根据权利要求1所述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的s9.6单克隆抗体是通过培养atcc#hb-8730的s9.6杂交瘤细胞株，致敏小鼠制备腹水所得到的抗dna-rna杂合体的特异性抗体。
3.根据权利要求1所述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的hpv16 dna-rna杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物通过下述方法制备的：取浓度为20nm生物素标记的hpv16 dna-rna杂合体和浓度为2mg/ml的链霉亲和素等体积混合，在室温下搅拌反应1小时，即得到hpv16 dna-rna杂合体-生物素-链霉亲和素偶联物。
4.根据权利要求3所述的快速检测hpv16 dna-rna杂合体的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的生物素标记的hpv16 dna-rna杂合体中的...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，肖焕欣，林明霞，蒋诗林，陈伟光，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：
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