【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，涉及mcpif1-x1和mcpif3在调控苦瓜map30基因表达中的应用。
技术介绍
1、map30(momordica anti-hiv protein of 30kda)蛋白是单链i型核糖体失活蛋白，分子量为30kda，在苦瓜种子和果实中含量最高。map30蛋白具有降血糖、消炎、抗癌和抗病毒等功效，而且这种功效只作用于病毒感染的细胞或肿瘤细胞。至2020年，世界艾滋病感染人数达到3600万，中国至少100万人已感染。据国际糖尿病联盟(idf)数据分析，中国糖尿病人口数量位居世界第一，超过1.1亿人。map30作为一个重要的功能蛋白，自上个世纪被发现以来其药理功能已有广泛研究，但map30基因转录水平的分子机制研究并不清晰。
2、bhlh(basic helix-loop-helix)转录因子，即碱性/螺旋环螺旋蛋白，广泛存在于植物、动物和真菌中的转录因子超家族，参与了植物的暗形态建成、种子萌发和避荫反应等过程，具有多种功能。拟南芥中4个bhlh转录因子pif1、pif3、pif4和pif5在暗中高表达，光下被磷酸化后在26s蛋白酶体的作用下降解。此外，pif转录因子还参与了类黄酮和花青素的生物合成等。
3、苦瓜中pif的同源基因有mcpif1-x1、mcpif3和mcpif4。本专利技术研究发现mcpif1-x1和mcpif3蛋白结合在map30的启动子序列，并抑制map30的基因表达。
技术实现思路
1、鉴于现有技术的不足，本
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术的目的之一是提供mcpif1-x1和/或mcpif3在调控苦瓜map30基因表达中的应用，所述mcpif1-x1的编码核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mcpif3的编码核苷酸序列如seq id no.4所示，所述map30基因的编码核苷酸序列如seq id no.2所示。map30内源启动子序列如seq id no.1所示。
4、进一步的，所述调控为负调控。
5、本专利技术的目的之二是一种获得低表达map30基因的转基因植物的方法，包括以下步骤：
6、(1)将map30内源启动子和编码区基因通过转基因技术转至野生型植物中，选出转基因纯合植株；
7、(2)将map30转基因植物与表达mcpif1-x1或表达mcpif3的转基因材料杂交，获得纯合植株。
8、优选的，所述植物包括拟南芥、苦瓜。
9、本专利技术的目的之三是提供一种获得高表达map30基因的转基因植物的方法，包括以下步骤：
10、在植物中将mcpif1-x1或mcpif3敲除，解除mcpif1-x1和mcpif3对map30的抑制，获得mcpif1-x1缺失突变体、mcpif3缺失突变体或双突变体，即得map30高表达植株。
11、进一步的，所述植物包括苦瓜。
12、进一步的，所述mcpif1-x1缺失突变体、mcpif3缺失突变体或双突变体应用crispr-cas9敲除系统获得。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术首次提出并证实了mcpif1-x1和mcpif3能够与map30的启动子序列结合，从而调控map30基因的表达。本专利技术的提出为培育高含map30蛋白的苦瓜品种提供思路，具有较好的应用前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.McPIF1-X1和/或McPIF3在调控苦瓜MAP30基因表达中的应用，其特征在于，所述McPIF1-X1的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述McPIF3的编码核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，所述MAP30基因的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控为负调控。
3.一种获得低表达MAP30基因的转基因植物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述植物包括拟南芥、苦瓜。
5.一种获得高表达MAP30基因的转基因植物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述植物包括苦瓜。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述McPIF1-X1缺失突变体、McPIF3缺失突变体或双突变体通过CRISPR-Cas9敲除系统获得。
【技术特征摘要】
1.mcpif1-x1和/或mcpif3在调控苦瓜map30基因表达中的应用，其特征在于，所述mcpif1-x1的编码核苷酸序列如seq id no.3所示，所述mcpif3的编码核苷酸序列如seq idno.4所示，所述map30基因的编码核苷酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控为负调控。
3.一种获得低表达map30基因的转基因植物的方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：于仁波，杨衍，牛玉，韩旭，刘昭华，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。