【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体制备，具体涉及一种抗人pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、跨膜受体pd-1(programmed cell death1，程序性细胞死亡因子1)是cd28基因家族成员之一，pd-1主要在巨噬细胞、nk细胞、b细胞、激活的t细胞和树突状细胞中表达，但其在耗竭的t细胞中表达上调最高。pd-1的配体pd-l1和pd-l2均属于b7超家族，pd-l1在炎性组织中和癌细胞中高表达，pd-l2则仅表达于b淋巴细胞和抗原呈递细胞如树突状细胞和巨噬细胞，这对t细胞清除病毒及细菌起着重要作用。pd-1和pd-l1结合主要是通过pi3k/akt和ras/mek/erk信号通路，这会在效应期损害t细胞的增殖、分化和活化。除肿瘤细胞外，pd-l1可在肿瘤浸润淋巴细胞(til)上表达，包括肿瘤相关巨噬细胞(tam)、树突状细胞(dc)、调节性t细胞(treg)、癌相关成纤维细胞(caf)、肥大细胞和肿瘤基质细胞(星形胶质细胞、血管内皮细胞、角质形成细胞)。因此，pd-l1在肿瘤细胞、til或肿瘤基质细胞上的过度表达不可避免地触发t细胞衰竭，从而产生免疫抑制微环境并促进肿瘤增长。pd-1仅表达在激活的t细胞上，pd-1免疫检查点在实体瘤中会起到更好的治疗效果，临床结果表明靶向pd-1/pd-l1可有效的增强抗肿瘤免疫反应，目前，尚需要开发新的具有更好治疗效果的抗pd-1抗体，以有效地阻断pd-1与pd-l1的结合，用于临床治疗。
技术实现思路
1、本专利技术制备出一种新型的
2、在本专利技术中，利用pd-1过表达的细胞系作为免疫原免疫小鼠，经小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞，经大量筛选得到一株杂交瘤细胞株，并命名为8a8，本杂交瘤可以产生特异性与pd-1结合的单克隆抗体，并可有效的阻断pd-1和pd-l1的结合，可应用于抗肿瘤，抗感染及自身免疫疾病中。
3、本专利技术提供一种编码抗pd-1的单克隆抗体可以是抗体的全长序列，也可以是抗pd-1抗体的片段，上述蛋白和抗体包括:重组蛋白、重组抗体、scfv抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体单域抗体、adcc偶联抗体和蛋白，所述抗体也可以进一步提供所述抗hpd-1抗体的衍生物，所述衍生物为hpd-1抗体的片段、抗体/抗体片段一因子融合蛋白、和抗体/抗体片段一化学偶联物。
4、本专利技术新发现了1种对hpd-1有显著高亲和力的单克隆抗体8a8，这种单克隆抗体不仅能够与hpd-1抗原特异性结合，ec50与参照品相近，并且能阻断hpd-1与其配体结合的能力。本专利技术从单克隆细胞株中获取目的抗体的基因序列，可用以构建真核表达载体，表达后即可重建抗体的活性，获得抗hpd-1单克隆抗体。
5、本专利技术所述的抗hpd-1单克隆抗体可用来制备抗肿瘤(包括高表达hpd-1的肺癌、肝癌、乳腺癌、鳞状细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、胃肠道间质瘤、膀胱癌、甲状腺癌、黑色素瘤、颈癌、前列腺癌)药物、抗感染(感染性疾病包括hiv、hbv、hcv等病毒感染引起的疾病)药物及用来制备自身免疫性疾病(包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、系统性脉管炎、银屑病、多发性硬化症、溃疡性结肠炎)治疗的药物，其制备方法是以抗pd-1单克隆抗体为主要成分，加上制药学上可接受的辅料或添加剂，经过冻干处理，制备成药学上可接受的药剂。
6、本专利技术的优点主要但是并不限于以下几个方面：
7、该抗体对hpd-1有很高的亲和力。在动物细胞中高效表达，可用于工业化生产。实验证明本专利技术的抗hpd-1单克隆抗体能阻断hpd-1受体与其配体pd-l1结合，所以本专利技术所述抗体对肿瘤、感染性疾病及自身免疫性疾病的治疗具有广泛的应用前景。
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1.一种分离的结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区的3个CDR和重链可变区的3个CDR，所述轻链可变区的3个CDR分别为：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，所述重链可变区的3个CDR分别为：SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的序列如SEQ ID NO.7所示。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO.8所示。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的编码序列如SEQ ID NO.9所示。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的编码序列如SEQ ID NO.10所示。
6.根据权利要求1-5任其一所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段包含但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、F
7.编码权利要求1-6任意一项的抗体或其抗原结合片段的核酸、包含该核酸的表达盒或宿主。
8.权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于以下方面的药物中的用途：
9.权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备诊断或检测试剂中的应用。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括：由ELISA、FACS、表面等离子体共振、GST pull down、表位标签、免疫沉淀、荧光共振能量转移、时间分辨荧光免疫测定(TR-FIA)、放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定、乳胶凝集、免疫组织化学或上述任意两者以上的组合，测定结合或阻断活性。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的结合人pd-1的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区的3个cdr和重链可变区的3个cdr，所述轻链可变区的3个cdr分别为：seq id no.1、seq id no.2和seq id no.3，所述重链可变区的3个cdr分别为：seq idno.4、seq id no.5和seq id no.6。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的序列如seq id no.7所示。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的序列如seq id no.8所示。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区的编码序列如seq id no.9所示。
5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的编码序列如seq id no.10所示。
6.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵同标，程晨曦，曹佳妮，李晓燕，张琳，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：
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