【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及克氏原螯虾疾病防控，具体为克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式。
技术介绍
1、克氏原螯虾(procambarus clarkii)俗称小龙虾，属甲壳纲、十足目、螯虾科水生动物，是我国四大淡水经济养殖虾类之一。小龙虾属杂食性、生长速度快、适应能力强、肉味鲜美，广受人们欢迎，已形成了独具特色的小龙虾饮食文化产业。近两年，我国小龙虾产业总产值一直达到4200多亿元，位列我国淡水养殖品种前十位。然而，随着养殖环境恶化和缺乏经验的养殖企业跟风式的涌入，小龙虾病原种类和数量也随之增加，对小龙虾健康造成极大影响，进而给小龙虾产业造成巨大的经济损失。其中，小龙虾弧菌病和病毒病造成的损失最大。病毒病原包括白斑综合征病毒(wssv)、桃拉病毒、黄桃病毒等可导致小龙虾病毒性疾病。如今，由wssv感染引起的小龙虾白斑综合征已成为养殖产业中的主要病害，可造成小龙虾在2—13天内100％死亡。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有技术的不足之处，提供克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，以解决
技术介绍
中所提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，包括如下步骤：
3、步骤一：完成克氏原螯虾抗病毒基因vago的克隆；
4、步骤二：利用原核表达载体pet28a构建重组质粒vago-pet28a，再利用iptg 16度诱导表达；
5、步骤三：上述步骤后，破碎后即可在上清中发现
6、步骤四：利用表达纯化的vago蛋白和白班综合征病毒wssv分别先后注射克氏原螯虾，随后在特定温度环境下养殖24h；
7、步骤五：抽取克氏原螯虾血液检测主要免疫基因的表达变化；
8、步骤六：为了进一步验证vago蛋白能有效抑制wssv在克氏原螯虾体内的复制，每组取30只虾，统计克氏原螯虾的成活情况。
9、作为本专利技术的优选技术方案，所述克氏原螯虾vago基因cdna全长393bp，编码130个氨基酸，1—23个氨基酸是信号肽。
10、作为本专利技术的优选技术方案，所述特定温度环境具体为25摄氏度。
11、作为本专利技术的优选技术方案，所述克氏原螯虾的成活情况结果表明仅注射白班综合征病毒的组在第10天时虾全部死亡，而注射了vago蛋白组死亡更慢，在第10天时还有40％的虾成活。
12、与现有技术相比，本专利技术提供了克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，具备以下有益效果：
13、该克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，通过完成克氏原螯虾抗病毒基因vago的克隆，并利用原核表达载体pet28a构建重组质粒vago-pet28a，再利用iptg 16度诱导表达，利用表达纯化的vago蛋白和白班综合征病毒wssv分别先后注射克氏原螯虾，且在25摄氏度的养殖环境下维持24h，抽取基因变化状态，注射wssv以及vago蛋白即可得出仅注射白班综合征病毒的组在第10天时虾全部死亡，而注射了vago蛋白组死亡更慢，在第10天时还有40％的虾成活，vago具有svwc结构域(单血友病分子c)，含有典型的vwc结构域的10个保守半胱氨酸残基中的8个。因此，研究克氏原螯虾vago抗病毒功能的研究，深入探讨克氏原螯虾抗病毒机制，运用vago抗病毒功能预防和治疗克氏原螯虾病毒性疾病。该项研究，不仅能够揭示甲壳动物vago抗病毒理论，也为甲壳动物病毒病的防治、疫苗和药物研制提供新的依据和科学思路。
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1.克氏原螯虾抗病毒基因Vago蛋白表达方式，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的克氏原螯虾抗病毒基因Vago蛋白表达方式，其特征在于：步骤一中所述克氏原螯虾Vago基因cDNA全长393bp，编码130个氨基酸，1—23个氨基酸是信号肽。
3.根据权利要求1所述的克氏原螯虾抗病毒基因Vago蛋白表达方式，其特征在于：步骤三中所述特定温度环境具体为25摄氏度。
4.根据权利要求1所述的克氏原螯虾抗病毒基因Vago蛋白表达方式，其特征在于：步骤六中所述克氏原螯虾的成活情况结果表明仅注射白班综合征病毒的组在第10天时虾全部死亡，而注射了Vago蛋白组死亡更慢，在第10天时还有40％的虾成活。
【技术特征摘要】
1.克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的克氏原螯虾抗病毒基因vago蛋白表达方式，其特征在于：步骤一中所述克氏原螯虾vago基因cdna全长393bp，编码130个氨基酸，1—23个氨基酸是信号肽。
3.根据权利要求1所述的克氏原螯虾抗病毒基...
【专利技术属性】
技术研发人员：许巧情，刘天海，蒋昕成，罗凯，郜卫华，郭慧芝，胡思美，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：
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