一种响应致炎细胞因子的CAR序列和CAR-Treg细胞的构建方法及应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，本发明专利技术提供了一种响应致炎细胞因子的CAR序列和CAR‑Treg细胞的构建方法及应用。本发明专利技术还提供了所述CAR‑Treg细胞的构建方法及应用。所述CAR序列为Ada‑CD28‑CD3ζ、Ada‑4‑1BB‑CD3ζ、Ada‑TNFR2‑CD3ζ和Ada‑CD28‑IL2Rβ‑CD3ζ等中的任意一种。本发明专利技术中的CAR‑Treg能响应致炎环境，将致炎性细胞因子捕获降低其浓度，并将致炎细胞因子的促炎信号转换为促进Treg细胞生长和功能的信号，从而发挥Treg的抑制功能，在TNF和/或IL‑17A介导的炎症性疾病中发挥疗效。

【技术实现步骤摘要】

本发属于生物医药，涉及一种响应致炎细胞因子的car序列和car-treg细胞的构建方法及应用。

技术介绍

1、调节性t细胞(regulatory t cells，tregs)是一类在维持免疫耐受性和抑制过度免疫反应中起关键作用的细胞，是机体内发挥免疫抑制功能的关键细胞亚群。近年来，通过引入嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)技术，研究者开始将car引导的treg细胞疗法应用于自身免疫疾病的治疗。

2、自身免疫病是一类发病机制复杂、疾病异质性高的疾病，涉及免疫系统对自身组织和细胞产生错误的攻击。目前传统的免疫抑制剂仍为临床首选疗法，治疗效果有限、副作用强，病人个体差异大是临床治疗的主要难点。

3、treg细胞在免疫系统中起到重要的调节作用，能够抑制过度免疫反应，使得炎症环境恢复稳态。tregs作为具有免疫抑制功能的重要细胞亚群之一，通过多种机制发挥其抑制作用，包括减弱效应t细胞的激活；与效应t细胞竞争结合il-2；抑制抗原呈递；分泌il-10、tgf-β、il-35等抗炎细胞因子；通过颗粒酶和穿孔本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种识别炎症因子并可激活Treg细胞的CAR序列，其特征在于，所述CAR序列为Ada-CD28-CD3ζ、Ada-4-1BB-CD3ζ、Ada-TNFR2-CD3ζ、Ada-CD28-IL2Rβ-CD3ζ、TNFR2-CD28-CD3ζ、TNFR2-4-1BB-CD3ζ、TNFR2-TNFR2-CD3ζ、Ada-TNFR2-IL2Rβ-CD3ζ、Ixe-TNFR2-CD3ζ、Ada-Ixe-TNFR2-CD3ζ、Ixe-Ada-TNFR2-CD3ζ、Ada-Ixe2-TNFR2-CD3ζ、TNFR2-Ixe-TNFR2-CD3ζ和Ixe-TNFR2-TNFR2-CD3ζ中的任意一种；...

【技术特征摘要】

1.一种识别炎症因子并可激活treg细胞的car序列，其特征在于，所述car序列为ada-cd28-cd3ζ、ada-4-1bb-cd3ζ、ada-tnfr2-cd3ζ、ada-cd28-il2rβ-cd3ζ、tnfr2-cd28-cd3ζ、tnfr2-4-1bb-cd3ζ、tnfr2-tnfr2-cd3ζ、ada-tnfr2-il2rβ-cd3ζ、ixe-tnfr2-cd3ζ、ada-ixe-tnfr2-cd3ζ、ixe-ada-tnfr2-cd3ζ、ada-ixe2-tnfr2-cd3ζ、tnfr2-ixe-tnfr2-cd3ζ和ixe-tnfr2-tnfr2-cd3ζ中的任意一种；

2.一种编码权利要求1中car序列的核苷酸序列，其特征在于，所述编码ada-cd28-cd3ζ的核酸序列如seq id no.15所示；

3.权利要求1或2所述car序列在构建car-treg细胞中的应用。

4.一种car-treg细胞，其特征在于，所述car-treg细胞由car序列构建而成，所述car序列为权利要求1car序列中的任意一种。

5.权利要求4所述car-treg细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述同源重组的方法为：

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中细胞接种的个数为5～6×106个，所述完全培养基为dmem高糖培养基+9～11％fbs+双抗；所述过夜培养和...

【专利技术属性】
技术研发人员：张博，张烜，周德敏，孙也婷，王忞，纪德重，袁叶双，
申请(专利权)人：北京医院，
类型：发明
国别省市：