【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体是指一种层粘连蛋白的分离提取方法。
技术介绍
1、层粘连蛋白又称板层素，它是构成细胞间质的一种非胶原糖，在肝内主要由内皮细胞及贮脂细胞合成，与胶原一起构成基底膜的成分。层粘连蛋白(laminin，ln)存在于各种动物的胚胎及成体组织的各种基膜中，其生物功能是细胞黏着于基质的介质，并与多种基底膜成分结合，调节细胞生长和分化。许多研究都表明ln是机体中一种重要的糖蛋白组分。因此，分离提纯ln将为我们深入地研究细胞外环境与细胞运动、增殖、分化之间的关系，研究肿瘤转移的机制提供方便。
2、目前，基于ln主要存在于基膜中，实验人员通常选择小鼠肉瘤为原材料进行层粘连蛋白的分离提取，小鼠肉瘤原材料的获取量较小且获取途径不易，虽然可进行少量的层粘连蛋白的分离提取，但对于大量层粘连蛋白的获取需求不便满足，而且一般层粘连蛋白的分离提取工艺还存在着提取纯度不够高的问题，容易在层粘连蛋白后续使用时产生实验误差，因此，我们提出一种层粘连蛋白的分离提取方法来解决上述问题。
技术实现思路
1、针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种层粘连蛋白的分离提取方法，用于解决传统的层粘连蛋白分离提取用原材料获取量较小而且不易获取、传统的分离提取工艺提取纯度不够高的问题。
2、本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术一种层粘连蛋白的分离提取方法，包括如下步骤：
3、步骤一：取猪胎盘组织；
4、步骤二：将取用的猪胎盘组织剪碎成颗粒状；
5、步骤三：将猪胎盘组织装入无菌袋，在无菌环境下将装有猪胎盘组织的无菌袋挤压使猪胎盘血排出；
6、步骤四：使用采血袋将猪胎盘血采集即可得到层粘连蛋白分离提取的血浆原料；
7、步骤五：将猪胎盘血浆置于分离器中并调节分离器的温度，向猪胎盘血浆中加入乙醇溶液a并开启分离器将其两者充分搅拌混合，静置15-30min后可得到沉淀液与上清液；
8、步骤六：将沉淀液与上清液分离，并向沉淀液中加入乙醇溶液b并开启分离器使其两者充分搅拌混合，静置10-20min后可得到沉淀液a与上清液a；
9、步骤七：将沉淀液a与上清液a分离并弃用上清液a可得到沉淀液a；
10、步骤八：向沉淀液a中慢慢加入固体nacl至终浓度1.7mol/l，其间不断混合得到溶解液；
11、步骤九：使用超薄滤膜过滤溶解液得到溶解滤液；
12、步骤十：将溶解滤液通过sephacryl s-300分子筛层析柱过滤，收集留出的第一峰，即可制得纯化的层粘连蛋白；
13、步骤十一：将层粘连蛋白分装并存储于-65℃～-70℃环境下。
14、进一步地，所述步骤一中取用的猪胎盘组织为100g～150g。
15、进一步地，所述步骤四中采集的猪胎盘血浆为30g～50g。
16、优选地，所述步骤五中加入的乙醇溶液a浓度为6～10％，ph值的范围为7～7.5。
17、优选地，所述步骤六中加入的乙醇溶液b浓度为13～18％，ph值的范围为5-7。
18、优选地，所述步骤五到步骤八中的分离器温度均为-10℃～-2℃，且搅拌速度为3000～5000r/min，搅拌时间为1～2min。
19、采用上述结构本专利技术取得的有益效果如下：本方案一种层粘连蛋白的分离提取方法，通过使用常见并且易得到的猪胎盘组织为原料，可实现对于大量层粘连蛋白的获取需求方便满足的目的，另外，通过超滤薄膜与sephacryl s-300分子筛层析柱过滤可提高得到的层粘连蛋白的纯度，同时使用分离器、无菌环境与低温环境可降低杂质污染的可能性，对于研究人员来说是一种便利有效的创新。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤一中取用的猪胎盘组织为100g～150g。
3.根据权利要求2所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤四中采集的猪胎盘血浆为30g～50g。
4.根据权利要求3所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤五中加入的乙醇溶液A浓度为6～10％，PH值的范围为7～7.5。
5.根据权利要求4所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤六中加入的乙醇溶液B浓度为13～18％，PH值的范围为5-7。
6.根据权利要求5所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤五到步骤八中的分离器温度均为-10℃～-2℃，且搅拌速度为3000～5000r/min，搅拌时间为1～2min。
【技术特征摘要】
1.一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤一中取用的猪胎盘组织为100g～150g。
3.根据权利要求2所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤四中采集的猪胎盘血浆为30g～50g。
4.根据权利要求3所述的一种层粘连蛋白的分离提取方法，其特征在于：所述步骤五中加...
【专利技术属性】
技术研发人员：许义辉，王爽，许帅辉，常明利，赵水，
申请(专利权)人：莱美恩苏州生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。