【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽药物，具体涉及一种司美格鲁肽的制备方法。
技术介绍
1、司美格鲁肽英文名称为semaglutide，司美格鲁肽为glp-1类似物，与人 glp-1有94%同源性。其是由丹麦诺和诺德制药公司开发生产的一款长效胰高血糖素样-1（glp-1）类似物，用于治疗ii型糖尿病。2017年12月，司美格鲁肽注射液在美国批准上市，2021年4月，中国国家药品监督管理局（nmpa）批准上市，同年12月3日纳入国家医保乙类药品。2019年9月，司美格鲁肽的口服制剂获fda批准，用于ii型糖尿病血糖控制。2021年6月，注射制剂获fda批准用于超重成年人降重减肥管理。此外研究发现，司美格鲁肽有潜力治疗癌症、阿尔茨海默症和帕金森病，并能降低心血管疾病风险等。
2、从结构上看，semaglutide是glp-1（7-37）链上8位aib取代了ala，34位arg取代了lys，26位上lys接上了十八烷二酸脂肪链、谷氨酸和短链的peg修饰。peg修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖dpp-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长效的目的。司美格鲁肽的结构如下：
3、。
4、目前多肽药物最有效的化学合成方法是固相合成法。也就是从多肽的羧基端开始，将第一个氨基酸连接到树脂上后，脱去氨基酸氨基的保护基，按照肽序，偶联下一个氨基酸，脱去氨基保护基，再偶联，重复循环的操作直到完成氨基酸组装。将多肽从树脂上裂解下来同时去除所有的保护基就可以得到多肽粗品，再经过纯化、冻干得到多肽原料药（api）。>
5、司美格鲁肽采用常规的固相合成方法具有很大的挑战性，体现在主链上有大量疏水性氨基酸使得肽链之间氢键稳固，产生严重的折叠；肽链与肽链之间的作用力增强，引起树脂收缩，增加了氨基酸偶联的难度，降低了偶联的反应活性和效率，反应收率下降，成本上升。产业化化学制备司美格鲁肽难度不小。
6、因此，迫切需要建立一种低成本、高品质、操作简单的产业化制备司美格鲁肽方法。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种高收率、适用于工业化生产的司美格鲁肽合成方案，且合成的司美格鲁肽的纯度高。
2、本专利技术提供一种司美格鲁肽的合成方法，所述司美格鲁肽的氨基酸序列为h-his7-aib8-glu9-gly10-thr11-phe12-thr13-ser14-asp15-val16-ser17-ser18-tyr19-leu20-glu21-gly22-gln23-ala24-ala25-lys26（aeea-aeea-g1u（α-octadecanedioic））-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-oh，其特征在于，所述制备方法包括：
3、以树脂为固相载体，按照司美格鲁肽的一级序列，通过固相合成方法，从c端到n端依次偶联氨基酸和二肽片段，得到司美格鲁肽全保护树脂，经裂解、纯化得到司美格鲁肽；
4、其中，所述二肽片段包括7~8二肽片段、9~10二肽片段、12~13二肽片段、17~18二肽片段、21~22二肽片段、24~25二肽片段、34~35二肽片段；
5、所述7~8二肽片段为boc-his（trt）-aib-oh、所述9~10二肽片段为fmoc-glu（otbu）-g1y-oh、所述12~13二肽片段为fmoc-phe-thr（tbu）-oh、所述17~18二肽片段为fmoc-ser（tbu）-ser（tbu）-oh、所述21~22二肽片段为fmoc-glu（otbu）-g1y-oh、所述24~25二肽片段为fmoc-ala-ala-oh、所述34~35二肽片段为fmoc-arg（pbf）-gly-oh。
6、优选地，本专利技术提供的司美格鲁肽的合成方法包括：
7、（1）将fmoc-gly-oh与树脂进行偶联，得到fmoc-gly-树脂；
8、（2）脱除步骤（1）制得的所述fmoc-gly-树脂上的fmoc，再依次偶联fmoc-arg（pbf）-oh、fmoc-arg（pbf）-gly-oh、fmoc-val-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-trp（boc）-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-g1u（otbu）-oh和fmoc-lys（mmt）-oh，得到fmoc-lys（mmt）-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-树脂；
9、（3）脱除步骤（2）制得的所述fmoc-lys（mmt）-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-树脂上lys侧链的mmt保护基，在lys上偶联侧链dde-aeea-aeea-oh，脱去保护基dde后，在aeea上偶联侧链octa（otbu）-glu-otbu得到fmoc-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-树脂；
10、（4）在步骤（3）制得的所述fmoc-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-树脂上再偶联氨基酸fmoc-ala-ala-oh、fmoc-gln（trt）-oh、fmoc-glu（otbu）-gly-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-tyr（tbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-ser（tbu）-oh、fmoc-val-oh、fmoc-asp（otbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-oh、fmoc-phe-thr（tbu）-oh、fmoc-thr（tbu）-oh、fmoc-glu（otbu）-gly-oh、boc-his（trt）-aib-oh，得到司美格鲁肽全保护树脂boc-his（trt）-aib-glu（otbu）-gly-thr（tbu）-phe-thr（tbu）-ser（tbu）-asp（otbu）-val-ser（tbu）-ser（tbu）-tyr（tbu）-leu-glu（otbu）-gly-gln（trt）-ala-ala-lys[aeea-aeea-g1u（α-octa（otbu）]-glu（otbu）-phe-ile-ala-trp（boc）-leu-val-arg（pbf）-gly-arg（pbf）-gly-树脂；
11、（5）将步骤（4）制备的所述司美格鲁肽全保护树脂裂解、析晶、抽滤和干燥，得到司美格鲁肽粗品；
12、（6）将步骤（5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种司美格鲁肽的制备方法，所述司美格鲁肽的氨基酸序列为H-His7-Aib8-Glu9-Gly10-Thr11-Phe12-Thr13-Ser14-Asp15-Val16-Ser17-Ser18-Tyr19-Leu20-Glu21-Gly22-Gln23-Ala24-Ala25-Lys26(AEEA-AEEA-G1u(α-Octadecanedioic))-Glu27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp31-Leu32-Val33-Arg34-Gly35-Arg36-Gly37-OH，其特征在于，所述制备方法包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述裂解包括使用TFA/EDT/TIS/UPW/苯酚裂解液，所述裂解液通过如下方法制备：配制体积比例为TFA/EDT/TIS/UPW=90/5/2.5/2.5的第一溶液，然后向所述第一溶液加入苯酚，所述苯酚的重量为所述第一溶液重量的2.5%。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括采
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述树脂为DEG-Wang树脂，所述DEG-Wang树脂的取代度为0.2~0.6mmol/g。
6.根据权利要求5述的制备方法，其特征在于，所述DEG-Wang树脂的取代度为0.4~0.6mmol/g。
7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述偶联采用的缩合试剂选自DIC、DEPBT和DIEA、或OXYMA/DIC。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述Fmoc的脱保护剂为PIP/DMF溶液，PIP的体积浓度为20%~50%。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，脱除所述Fmoc-Arg（Pbf）-Gly-Wang树脂的Fmoc时，脱保护剂进一步含有HOBt。
10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，用于所述Mmt保护基的脱保护剂为DCM/TFA/TIS，所述DCM/TFA/TIS的体积浓度比为95/4/1。
...【技术特征摘要】
1.一种司美格鲁肽的制备方法，所述司美格鲁肽的氨基酸序列为h-his7-aib8-glu9-gly10-thr11-phe12-thr13-ser14-asp15-val16-ser17-ser18-tyr19-leu20-glu21-gly22-gln23-ala24-ala25-lys26(aeea-aeea-g1u(α-octadecanedioic))-glu27-phe28-ile29-ala30-trp31-leu32-val33-arg34-gly35-arg36-gly37-oh，其特征在于，所述制备方法包括：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述裂解包括使用tfa/edt/tis/upw/苯酚裂解液，所述裂解液通过如下方法制备：配制体积比例为tfa/edt/tis/upw=90/5/2.5/2.5的第一溶液，然后向所述第一溶液加入苯酚，所述苯酚的重量为所述第一溶液重量的2.5%。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括采用rp-hpl...
【专利技术属性】
技术研发人员：田茂奎，何志泉，黄伟铭，叶智铭，傅东明，陈程云，许金行，王睿睿，范琳琳，张格维，何政霖，陈立涵，林煌雄，
申请(专利权)人：福建基诺厚普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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