【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽药物，具体涉及一种司美格鲁肽及其制备方法。
技术介绍
1、司美格鲁肽英文名称为semaglutide，司美格鲁肽为glp-1类似物，与人glp-1有94％同源性。由丹麦诺和诺德制药公司开发生产的一款长效胰高血糖素样-1(glp-1)类似物，用于治疗ii型糖尿病。2017年12月，司美格鲁肽注射液在美国批准上市。2019年9月，司美格鲁肽的口服制剂获fda批准，用于2型糖尿病血糖控制。2021年6月，注射制剂获fda批准用于超重成年人降重减肥管理。此外，研究发现，司美格鲁肽具有治疗癌症、阿尔茨海默症和帕金森病，降低心血管疾病风险等的潜力。
2、其结构式如图1所示，从结构上看，semaglutide是glp-1(7-37)链上8位aib取代了ala，34位arg取代了lys，26位上lys接上十八烷二酸脂肪链，谷氨酸和短链的peg修饰。peg修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖dpp-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长效的目的。
3、目前多肽药物最有效的化学合成方法是固相合成法，也就是从多肽的羧基端开始，将第一个氨基酸连接到树脂上后，脱去氨基酸氨基的保护基，按照肽序，偶联下一个氨基酸，脱去氨基保护基，再偶联，重复循环的操作直到完成氨基酸组装。将多肽从树脂上裂解下来同时去除所有的保护基就可以得到多肽粗品，再经过纯化、冻干得到多肽原料药(api)。
4、司美格鲁肽采用常规的固相合成方法具有很大的挑战性，主要体现在主链上有大量疏水性氨基酸使得肽链之间氢键稳固，可产生
5、cn116120427a公开了一种司美格鲁肽的合成方法，其所合成的司美格鲁肽粗品的总收率仅为57.07％，司美格鲁肽粗品的hplc的纯度仅为77.71％。
6、因此，迫切需要建立一种低成本、高品质、操作简单的产业化制备司美格鲁肽方法。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种高收率、高纯度的司美格鲁肽及其制备方法。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种司美格鲁肽的制备方法，包括基于固相合成法，根据司美格鲁肽的一级序列，从其c端至n端依次偶联氨基酸和二肽片段，获得司美格鲁肽全保护肽树脂的步骤；
3、其中，所述二肽片段包括肽段7-8、肽段9-10、肽段12-13、肽段17-18、肽段21-22、肽段24-25和肽段34-35中的至少两种；
4、所述肽段7-8为boc-his(trt)-aib-oh；
5、所述肽段9-10为fmoc-glu(0tbu)-gly-oh；
6、所述肽段12-13为fmoc-phe-thr(tbu)-oh；
7、所述肽段17-18为fmoc-ser(tbu)-ser(tbu)-oh；
8、所述肽段21-22为fmoc-glu(0tbu)-gly-oh；
9、所述肽段24-25为fmoc-ala-ala-oh；
10、所述肽段34-35为fmoc-arg(pbf)-gly-oh。
11、在一般情况下，由于固相合成不同于液相合成反应，固相合成反应的每一步均无法达到完全偶联，因此在固相合成中缩合次数越多，其收率下降越多。因此，在此实施方式中通过使用预合成的二肽片段进行偶联，可大大减少缩合反应的次数，显著提高反应的收率。
12、可以理解的，在此实施方式中，所述氨基酸具有必要的侧链保护基团，以避免发生所不期望的副反应，如fmoc，pbf、otbu、tbu和boc等。
13、在一种实施方式中，所述司美格鲁肽全保护肽树脂的固相合成载体为deg-wang树脂。
14、在一种实施方式中，所述deg-wang树脂的取代度为0.2～0.6mmol/g，优选为0.3～0.5mmol/g。
15、在一种实施方式中，所述制备方法包括依次偶联所述氨基酸和/或所述二肽片段获得第一树脂偶联物的步骤，所述第一树脂偶联物为dde-lys(fmoc)-gl u(0tbu)-phe-ile-ala-trp(boc)-leu-val-arg(pbf)-gly-arg(pbf)-gly-de g-wang resin。
16、在一种可选的实施方式中，所述第一树脂偶联物由fmoc-gly-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-arg(pbf)-gly-oh、fmoc-val-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-ala-oh·h2o、fmoc-ile-oh、fmoc-phe-oh和dde-lys(fmoc)-g1u(otbu)-oh依次偶联获得。
17、在一种实施方式中，在合成所述第一树脂偶联物的前体fmoc-gly-arg(pbf)-gly-wang resin的过程中，以含有hobt的脱保护剂脱除与残基arg(pbf)相连的侧链保护基团fmoc。
18、在一种实施方式中，所述制备方法还包括对所述第一树脂偶联物脱除侧链保护基团fmoc的步骤；
19、以及，依次偶联fmoc-aeea-oh、fmoc-aeea-oh、fmoc-glu-otbu和hooc-c16-cootbu，获得第二树脂偶联物；
20、所述第二树脂偶联物为dde-lys[aeea-aeea-y-g1u(α-otbu)octadecanedio icacid-18(tert-butoxy)]-glu(otbu)-phe-ile-ala-trp(boc)-leu-val-arg(p bf)-gly-arg(pbf)-gly-deg-wang resin。
21、在一种实施方式中，脱除所述侧链保护基团fmoc的脱保护剂为n，n-二甲基甲酰胺溶液，所述脱保护剂的浓度(v/v)为20％～50％，优选为20％。
22、在一种实施方式中，所述制备方法还包括对所述第二树脂偶联物脱除肽链保护基团dde的步骤；
23、依次偶联所述氨基酸和/或所述二肽片段，获得所述司美格鲁肽全保护肽树脂的步骤；
24、以及、对所述司美格鲁肽全保护肽树脂进行裂解、析晶、抽滤和干燥，获得司美格鲁肽粗品的步骤。
25、在一种可选的实施方式中，在第一树脂偶联物脱除肽链保护基团dde后，依次偶联fmoc-ala-ala-oh、fmoc-gln(trt)-oh、fmoc-glu(otbu)-gly-o h、fmoc-leu-oh、fmoc-tyr(tbu)-oh、fmoc-ser(tbu)-ser(tbu)-oh、f moc-val-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-ser(tbu)-oh、fmoc-phe-thr(tbu)-oh、fmo本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种司美格鲁肽的制备方法，其特征在于，包括基于固相合成法，根据司美格鲁肽的一级序列，从其C端至N端依次偶联氨基酸和二肽片段，获得司美格鲁肽全保护肽树脂的步骤；
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述司美格鲁肽全保护肽树脂的固相合成载体为DEG-Wang树脂。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述DEG-Wang树脂的取代度为0.2～0.6mmol/g。
4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，包括依次偶联所述氨基酸和/或所述二肽片段获得第一树脂偶联物的步骤，所述第一树脂偶联物为Dde-Lys(Fmoc)-Glu(0tBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-DEG-Wang Resin。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，在合成所述第一树脂偶联物的前体Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resin的过程中，以含有HOBt的脱保护剂脱除与残基Arg(Pbf)相连的侧链保护基团Fmoc。
6.
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，脱除所述侧链保护基团Fmoc的脱保护剂为N，N-二甲基甲酰胺溶液。
8.根据权利要求7所述制备方法，所述脱保护剂的浓度为20％～50％。
9.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，还包括对所述第二树脂偶联物脱除肽链保护基团Dde的步骤；
10.一种由权利要求1至9任一项所述制备方法制备得到的司美格鲁肽，其特征在于，所述司美格鲁肽的HPLC纯度≥80％。
...【技术特征摘要】
1.一种司美格鲁肽的制备方法，其特征在于，包括基于固相合成法，根据司美格鲁肽的一级序列，从其c端至n端依次偶联氨基酸和二肽片段，获得司美格鲁肽全保护肽树脂的步骤；
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述司美格鲁肽全保护肽树脂的固相合成载体为deg-wang树脂。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述deg-wang树脂的取代度为0.2～0.6mmol/g。
4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，包括依次偶联所述氨基酸和/或所述二肽片段获得第一树脂偶联物的步骤，所述第一树脂偶联物为dde-lys(fmoc)-glu(0tbu)-phe-ile-ala-trp(boc)-leu-val-arg(pbf)-gly-arg(pbf)-gly-deg-wang resin。
5.根据权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：田茂奎，何志泉，黄伟铭，叶智铭，傅东明，陈程云，许金行，王睿睿，范琳琳，张格维，何政霖，陈立涵，林煌雄，
申请(专利权)人：福建基诺厚普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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