一种卡格列肽的合成方法技术

技术编号：41273244 阅读：3 留言：0更新日期：2024-05-11 09:26

本发明专利技术涉及多肽药物合成技术领域，尤其涉及一种卡格列肽的合成方法。本发明专利技术中提供的合成方法所制得的卡格列肽，其HPLC纯度达99％以上，单个杂质低于0.1％，不仅提高了产品质量和总收率，而且整个合成工艺操作简单，综合合成成本低，非常适合多肽原料药的工业化生产，具有广泛的实用价值和应用前景。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽药物合成，尤其涉及一种卡格列肽的合成方法。

技术介绍

1、卡格列肽(cagrilintide)是一种新型长效酰化胰淀素类似物，作为非选择性胰淀素受体(amyr)和降钙素g蛋白偶联受体(ctr)激动剂，是由38个氨基酸组成的环状多肽，序列中含有38个氨基酸，并且含有一对二硫键。卡格列肽可显著减轻体重，减少食物摄入，在肥胖研究中具有潜力。胰淀素(amylin)是glp-1信号通路以外，另一种与饥饿和饱腹感相关的激素。

2、cagrilintide能够减少能量摄入，调节食物选择和偏好，其与胰岛素共同分泌而发挥葡萄糖调节作用，抑制餐后胰高血糖素释放，并延迟胃排空。在治疗糖尿病，肥胖症，代谢综合症以及心血管疾病等方面具有明显的优势，需求应用前景广泛。

3、目前合成卡格列肽的主要方法为专利cn202111615700.8中所公开的方法，采用选取卡格列肽序列的第7-8位氨基酸作为伪脯二肽fmoc-ala-thr(pro-me-me)-oh，序列的第10-11位氨基酸作为伪脯二肽fmoc-ala-thr(pro-me-me)-oh，序列的第21-22位氨基酸作为伪脯二肽fmoc-ser-ser(pro-me-me)-oh；其余位点按照氨基酸序列进行偶联反应；肽树脂经裂解得到卡格列肽线性肽；再经过液相环化得到卡格列肽粗品，经纯化制备、转盐、浓缩、冻干得到卡格列肽精肽。该方法使用了三个伪辅二肽进行偶联，虽然解决了因树脂缩聚而导致的偶联难度增大的问题，但增加了生产成本，且该工艺制备所得精肽纯度较低，未达到原料药的质量要求。

技术实现思路

1、本专利技术基于现有技术中卡格列肽的生产成本较高，工艺复杂，纯度较低，不利于工业化生产等问题，提供了一种卡格列肽的合成方法，以克服上述的缺陷。

2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：

3、第一方面，本专利技术提供了一种卡格列肽的合成方法，包括以下步骤：

4、(1)以氨基树脂为起始树脂，通过fmoc/tbu固相法依次偶联各保护氨基酸、保护氨基酸片段和二十烷二酸单叔丁酯，序列中ala7、thr8位点和ala10、thr11位点的其中任意一组或两组使用fmoc-ala-thr(psi(me,me)pro)-oh进行偶联，其余位点依次偶联得到全保护卡格列肽肽树脂，其序列如下：

5、eicosanedioic acid(otbu)-γ-glu(otbu)-lys(boc)-cys(trt)-asn(trt)-thr(tbu)-ala-thr(r1)-cys(t

6、rt)-ala-thr(r2)-gln(trt)-arg(pbf)-leu-ala-glu(otbu)-phe-leu-arg(pbf)-his(trt)-ser(tbu)-ser(tb u)-asn(trt)-asn(trt)-phe-gly-pro-ile-leu-pro-pro-thr(tbu)-asn(trt)-val-gly-ser(tbu)-asn(trt)-thr(tbu)-pro-resin，其中，r1、r2选用tbu或psi(me,me)pro，但r1、r2不同时为tbu；

7、(2)采用三氟乙酸混合溶液作为裂解试剂对所述肽树脂进行切割得到卡格列肽线性肽粗肽；(3)使用空气、双氧水、二甲基亚砜、碘中的一种对所述线性肽粗肽进行环化得到环肽粗肽；(4)对所述环肽粗肽进行hplc纯化，转盐，浓缩，冻干，从而得到所述卡格列肽。

8、作为优选，所述步骤(1)为：通过fmoc/tbu固相法，以氨基树脂为起始树脂，依次偶联fmoc-pro-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-gly-oh，fmoc-val-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-ile-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-phe-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-his(trt)-oh，fmoc-arg(pbf)-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-glu(otbu)-oh，fmoc-ala-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-arg(pbf)-oh，fmoc-gln(trt)-oh，后续位点采用如下方式偶联：当r1选用tbu时，依次偶联fmoc-ala-thr(psi(me,me)pro)-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-ala-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-lys(boc)-oh，fmoc-glu-otbu，二十烷二酸单叔丁酯；

9、当r1选用psi(me,me)pro时，依次偶联fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-ala-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-ala-thr(psi(me,me)pro)-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-lys(boc)-oh，fmoc-glu-otbu，二十烷二酸单叔丁酯；

10、当r1选用psi(me,me)pro时，依次偶联fmoc-ala-thr(psi(me,me)pro)-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-ala-thr(psi(me,me)pro)-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-cys(trt)-oh，fmoc-lys(boc)-oh，fmoc-glu-otbu，二十烷二酸单叔丁酯。

11、作为优选，所述步骤(1)在偶联中采用的缩合试剂为dic/hobt、tbtu/diea、pybop/diea中的一种或多种。

12、作为优选，所述步骤(1)中的反应溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。

13、作为优选，所述步骤(1)中的反应温度为20～40℃。

14、作为优选，所述步骤(1)中保护氨基酸或保护氨基酸片段的用量为所投料起始树脂总摩尔数的2～6倍。

15、作为优选，所述步骤(2)中三氟乙酸混合溶液的组成为三氟乙酸与苯酚、水、乙二硫醇、三异丙基硅烷、苯甲硫醚、苯甲醚、二硫苏糖醇、3,6-二氧代-1、8-辛二硫醇中的几种的组合。

16、作为优选，所述三氟乙酸在所述三氟乙酸混合溶液中的体积比不低于85％。

17、作为优选，所述步骤(2)中的三氟乙酸混合溶液用量为肽树脂重量的6～10ml/g，裂解时间为2～4h，裂解温度本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种卡格列肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)为：通过Fmoc/tBu固相法，以氨基树脂为起始树脂，依次偶联Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，后续位点采用如下方式偶联：

3.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)在偶联中采用的缩合试剂为DIC/HOBT、TBTU/DIEA、PyBOP/DIEA中的一种或多种。

4.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中的反应溶剂为二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。

5.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中的反应温度为20～40℃。

6.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中保护氨基酸或保护氨基酸片段的用量为所投料起始树脂总摩尔数的2～6倍。

7.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中三氟乙酸混合溶液的组成为三氟乙酸与苯酚、水、乙二硫醇、三异丙基硅烷、苯甲硫醚、苯甲醚、二硫苏糖醇、3,6-二氧代-1、8-辛二硫醇中的几种的组合。

8.如权利要求7所述的合成方法，其特征在于，所述三氟乙酸在所述三氟乙酸混合溶液中的体积比不低于85％。

9.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中的三氟乙酸混合溶液用量为肽树脂重量的6～10mL/g，裂解时间为2～4h，裂解温度为20～30℃。

10.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)中的线性肽粗肽浓度为1～10.0mg/mL，双氧水浓度为1％～10％，DMSO用量为1～10％，碘为碘浓度为0.1～1.0mol/L的甲醇溶液，环化温度为20～30℃。

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【技术特征摘要】

1.一种卡格列肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)为：通过fmoc/tbu固相法，以氨基树脂为起始树脂，依次偶联fmoc-pro-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-gly-oh，fmoc-val-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-thr(tbu)-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-ile-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-phe-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-asn(trt)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-ser(tbu)-oh，fmoc-his(trt)-oh，fmoc-arg(pbf)-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-pro-oh，fmoc-glu(otbu)-oh，fmoc-ala-oh，fmoc-leu-oh，fmoc-arg(pbf)-oh，fmoc-gln(trt)-oh，后续位点采用如下方式偶联：

3.如权利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)在偶联中采用的缩合试剂为dic/hobt、tbtu/diea、pybop/diea中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂仕前，仝水田，王升武，
申请(专利权)人：杭州思诺达医药科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：

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