【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗过敏生物，具体涉及一种花生过敏原多肽及其筛选方法和应用。
技术介绍
1、过敏反应是指已产生免疫的机体在再次接受相同抗原刺激时所发生的组织损伤或功能紊乱的反应。近年来，过敏性疾病的发病率呈持续上升趋势，有报道指出过敏在全球的患病率高达22％，但目前大众对疾病的认知程度仍相对滞后。过敏性疾病可引起呼吸道阻塞、中枢神经系统紊乱、皮肤红肿瘙痒等症状，严重影响了患者工作和生活。
2、花生作为九大类过敏原之一，花生过敏是一种由ige介导的对特定花生蛋白的超敏反应，因为其结果可能是致命的，而且其患病率正在增加，花生过敏成为日益严重的社会问题。花生具有热稳定性高、耐酸和耐酶解的特性，一般的加工方式无法去除花生食品的致敏；而且与牛奶、鸡蛋等引起的过敏反应不同的是，花生过敏的发生往往具有终身性，仅有10％的患者随着年龄增长对花生产生免疫耐受。虽然花生的过敏原仅属于少数几类蛋白家族，但这些过敏原蛋白的结构和含量千差万别，目前仍不能解释花生引发严重过敏的原因。
3、近年来关于过敏原表位的研究主要聚焦于过敏原的线性表位上，大量研究鉴定出不同过敏原的线性表位，而关于构象表位的鉴定及作用研究仍较少。而且构象型表位只见于b细胞表位，为抗原的核心部分。构象表位通常占与抗原结合的总抗体的90％。大多数食物过敏原具有热稳定性和耐蛋白酶水解的特性，在进入人体内之后仍然可以保持其原有结构，或者在进入机体经吸收运输到全身各处后仍具有致敏活性。因此，构象表位在致敏性中起着关键作用。前期研究结果发现花生蛋白ara h 5和ara h 8
4、目前表征构象表位的方法包括大规模突变、噬菌体展示技术、氢/氘交换、x射线晶体学和核磁共振(nmr)。理论上确定构象表位的最佳方法是抗原-抗体复合物的x射线共晶结构。目前由于技术限制，无法获得纯度极高的单克隆抗体以及蛋白，进而进行结晶。氢/氘交换以及核磁共振光谱的应用的难点在于实验难度大。氢/氘交换测量要求纯度极高的蛋白-配体和蛋白样品。而核磁共振光谱需要确定抗原中每个氨基酸残基的核磁共振信号，这对于大分子抗原来说是一个很大的挑战。比较广泛使用的研究方法是通过定点突变来确定蛋白质相互作用中的关键位点。定点突变可以改变或减少蛋白质之间的相互作用，以暴露出其中的关键位点。但是这种方法昂贵且耗时的。当亲和力的丧失是由于表位外的结构发生变化时，有时会观察到假阳性结果。在抗原表位的研究中，噬菌体展示肽库作为重要技术已经被成功应用。
5、为解决上述技术问题，本专利技术通过噬菌体展示肽库筛选靶向ara h 5蛋白和ara h8蛋白的多克隆抗体，利用噬菌体展示技术筛选与多克隆抗体结合的序列，定位ara h 5蛋白和ara h 8蛋白作为过敏原的空间表位。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对上述花生蛋白致敏性研究不足以及过敏原空间表位的研究缺失的缺点，提供噬菌体展示技术在花生产品过敏机制研究中的应用。基于噬菌体展示技术，筛选花生食物过敏原的构想表位。
2、花生过敏表现出较强的呼吸道过敏反应性。花生中与呼吸道过敏原有交叉反应的重要蛋白ara h 5和ara h 8也可以引起呼吸道过敏反应性，并且构象表位在致敏性中起着关键作用。
3、本专利技术通过噬菌体展示技术得到ara h 5和ara h 8蛋白的构象表位，并筛选出有利于抗体结合的优势表位，完善了花生的致敏机制，为食物过敏的免疫治疗提供了重要理论基础，可拓展花生过敏的新治疗途径，为过敏患者提供新的应对方案。
4、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
5、本专利技术提供一种花生过敏原多肽，多肽来源于ara h 5蛋白，其序列为wetiysr(seq id no:1)、fhwwylk(seq id no:2)。还提供一种花生过敏原多肽，其特征在于，多肽来源于ara h 8蛋白，其序列为fpymkfr(seq id no:3)、sfhwwlf(seq id no:4)、fpymkfv(seqid no:5)或smfarid(seq id no:6)。
6、本专利技术提供一种编码上述过敏原多肽的核酸。
7、本专利技术提供一种表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌，其可以表达上述花生过敏原多肽。同时，本专利技术还提供一种表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌，其具有上述编码过敏原多肽的核酸。
8、本专利技术还提供一种上述过敏原多肽作为有效成分的预防或治疗剂。
9、本专利技术还提供一种上述过敏原多肽作为有效成分的预防或治疗剂的应用。进一步的，过敏原蛋白可作为具有免疫调控性的t-细胞反应性多肽片段、b-细胞反应性多肽片段、多肽片段与载体蛋白融合构建的蛋白或多核苷酸的至少一种作为有效成分的预防或治疗剂；
10、本专利技术提供一种上述过敏原多肽作为抗原、半抗原、免疫原或免疫调节剂的应用。
11、本专利技术还提供一种抗体，该抗体可结合ara h 5蛋白和/或ara h 8蛋白。优选的，该抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体或嵌合抗体或人源化改性抗体中的一种。
12、本专利技术还提供一种用于预防或治疗过敏性疾病的药物，所述药物为单方或复方制剂，其包括上述过敏原多肽或上述编码过敏原多肽的核酸或基因。
13、优选的，药物为过敏原疫苗。
14、本专利技术还提供一种用于过敏原诊断的试剂盒，包括上述过敏原多肽或编码过敏原多肽的核酸或基因。
15、本专利技术还提供过敏原多肽、核酸或基因、表达盒、重组载体、重组蛋白、重组细胞或重组菌在用于制备诊断花生蛋白过敏的试剂盒或预防或治疗花生过敏的药物或其药物组合物的生产过程中、成品中进行含量标定、质量控制的用途。
16、另一方面，本专利技术还提供上述花生过敏原多肽作为抗原制备的抗体的应用。
17、本专利技术还提供上述花生过敏原多肽制备的抗花生过敏产品。优选的，抗花生过敏产品为疫苗和/或药物。优选的，抗花生过敏产品为皮肤微针。优选的，上述产品中包含脂质体形式的佐剂。
18、另一方面，本专利技术还提供上述花生过敏原多肽作为抗花生过敏产品的应用，包括提高机体对特定过敏原的耐受程度。优选的，特定过敏原为花生或花生类制品，优选的花生类制品为食品。
19、本专利技术还提供包含上述花生过敏原多肽的抗花生过敏产品在制备降低机体对过敏原的敏感性药物的应用，过敏原为花生蛋白。
20、本方法制得的抗体可以发挥降低花生蛋白致敏性的功能，可以应用于低致敏花生蛋白产品的开发、基于表位进行的预防和/或治疗过敏的药品制备，且效价高，可以降低生产成本，适用于工业化生产。
21、进一步地，本方法制得的抗ara h 5和抗ara h 8蛋白的抗体可用于抗过敏药品，所述抗过敏食品包括但不限于氯雷他定、西替利嗪、阿司咪唑本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种花生过敏原多肽，其特征在于，多肽来源于Ara h 5蛋白，其序列为WETIYSR和/或FHWWYLK。
2.一种花生过敏原多肽，其特征在于，多肽来源于Ara h 8蛋白，其序列为FPYMKFR、SFHWWLF、FPYMKFV和/或SMFARID。
3.如权利要求1或2所述的花生过敏原多肽作为抗原、半抗原、免疫原或免疫调节剂的应用。
4.如权利要求1或2所述的花生过敏原多肽制备的抗花生过敏产品。
5.如权利要求4所述的抗花生过敏产品，其特征在于，抗花生过敏产品为疫苗和/或药物。
6.如权利要求4所述的抗花生过敏产品，其特征在于，产品中包含脂质体形式的佐剂。
7.一种抗体，其特征在于，由权利要求1或2所述的花生过敏原多肽作为靶标筛选获得的。
8.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，抗体为多克隆抗体、单克隆抗体或嵌合抗体或人源化改性抗体中的一种。
9.如权利要求4-6任一所述的抗花生过敏产品的应用，其特征在于，提高机体对特定过敏原的耐受程度，优选的，特定过敏原为花生或花生类制品，优选
10.如权利要求4-6任一所述的抗花生过敏产品在制备降低机体对过敏原的敏感性药物的应用，其特征在于，过敏原为花生蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种花生过敏原多肽，其特征在于，多肽来源于ara h 5蛋白，其序列为wetiysr和/或fhwwylk。
2.一种花生过敏原多肽，其特征在于，多肽来源于ara h 8蛋白，其序列为fpymkfr、sfhwwlf、fpymkfv和/或smfarid。
3.如权利要求1或2所述的花生过敏原多肽作为抗原、半抗原、免疫原或免疫调节剂的应用。
4.如权利要求1或2所述的花生过敏原多肽制备的抗花生过敏产品。
5.如权利要求4所述的抗花生过敏产品，其特征在于，抗花生过敏产品为疫苗和/或药物。
6.如权利要求4所述的抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：车会莲，宋若琳，王俊娟，刘曼曼，江月，肖昊蚺，郭晓晖，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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