System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 纯化的蛋白组合物及生产方法技术_技高网

纯化的蛋白组合物及生产方法技术

技术编号:41253076 阅读:10 留言:0更新日期:2024-05-10 00:01
本公开内容提供了用于产生重组蛋白的方法,该重组蛋白大体上不含包括胞外多糖和异味组分的不期望的副产物。纯化方法涉及阴离子树脂、阳离子交换树脂、絮凝剂、吸附剂和/或用酶的处理。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍


技术实现思路

【技术保护点】

1.一种用于制备可食用组合物的方法,所述方法包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物是细胞培养基。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物是包含分泌所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的重组细胞的细胞培养基。

4.根据权利要求1所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物不含分泌所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的重组细胞。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物具有大于所述重组蛋白的等电点(pI)的pH。

6.根据权利要求5所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物的pH不被调整为实现大于所述重组蛋白的pI的pH。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是强阴离子交换树脂或弱阴离子交换树脂。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是以下中的一种或更多种:Capto Q树脂、DEAE型弱阴离子交换剂、具有三甲基氨基乙基基团的树脂、具有三乙基氨基乙基基团的树脂、具有季胺基团的树脂。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是色谱系统的组分。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述色谱系统以分批模式与轴向流柱或径向流柱或离心柱一起操作,或者通过使用膜色谱柱操作。

11.根据权利要求9所述的方法,其中所述色谱系统以包括多个平行柱的连续模式操作,所述柱的进料是可切换的,使得色谱方法中的多个步骤(例如,平衡、装载、洗脱和清洗)同时发生。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述连续模式包括模拟移动床(SMB)或离子分离器(例如,)系统。

13.根据权利要求4至12中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物被预先处理以去除包含重组细胞的废生物质和/或被预先处理以去除小的非蛋白分子。

14.根据权利要求13所述的方法,其中去除小的非蛋白分子的处理包括浓缩包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物的步骤。

15.根据权利要求13或权利要求14所述的方法,其中去除小的非蛋白分子的处理包括渗滤缓冲液。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,还包括所述分离的重组蛋白的浓缩步骤和/或渗滤处理,以产生具有优选的pH和/或离子条件的含蛋白组合物。

17.根据权利要求16所述的方法,其中具有优选的pH和/或离子条件的所述含蛋白组合物还被热处理和/或干燥。

18.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物和/或具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的所述蛋白产物还被热处理和/或干燥。

19.根据权利要求17或权利要求18所述的方法,其中所述热处理将所述重组蛋白和所述异味组分分离,其中在使得所述异味组分挥发且气态异味组分可去除的温度和持续时间施加热量。

20.根据权利要求19所述的方法,其中在施加热量的同时施加真空,并且所述真空有利于所述气态异味组分的去除。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法,其中所述异味组分是酸、醇、醛、芳族化合物、酯或酮。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法,其中所述异味组分是(E)-2-壬烯醛;1-十二烯;2-乙基-1-己醇;1-己烯-3-酮;1-辛烯-3-酮;2,3-丁二酮;2-丁酮;2-甲基丁醛;2-甲基丙醛;2-丙酮;2-十一酮;3-甲基丁醛;乙醛;苯乙醇;苯甲醇;3-甲基-丁醛;氯甲苯;壬酸;对甲酚;或2-甲基-丙酸3-羟基-2,4,4-三甲基戊酯。

23.根据权利要求17至22中任一项所述的方法,其中具有优选的pH和/或离子条件的所述含蛋白组合物、包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物和/或具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的所述蛋白产物的温度在所述热处理期间高达80℃,例如约50℃至约60℃。

24.根据权利要求17至23中任一项所述的方法,其中所述方法包括在所述热处理期间的搅拌。

25.根据权利要求17至24中任一项所述的方法,其中所述热处理和/或干燥步骤产生具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的干燥的蛋白产物。

26.根据权利要求1...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种用于制备可食用组合物的方法,所述方法包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物是细胞培养基。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物是包含分泌所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的重组细胞的细胞培养基。

4.根据权利要求1所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物不含分泌所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的重组细胞。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物具有大于所述重组蛋白的等电点(pi)的ph。

6.根据权利要求5所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物的ph不被调整为实现大于所述重组蛋白的pi的ph。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是强阴离子交换树脂或弱阴离子交换树脂。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是以下中的一种或更多种:capto q树脂、deae型弱阴离子交换剂、具有三甲基氨基乙基基团的树脂、具有三乙基氨基乙基基团的树脂、具有季胺基团的树脂。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中所述阴离子树脂是色谱系统的组分。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述色谱系统以分批模式与轴向流柱或径向流柱或离心柱一起操作,或者通过使用膜色谱柱操作。

11.根据权利要求9所述的方法,其中所述色谱系统以包括多个平行柱的连续模式操作,所述柱的进料是可切换的,使得色谱方法中的多个步骤(例如,平衡、装载、洗脱和清洗)同时发生。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述连续模式包括模拟移动床(smb)或离子分离器(例如,)系统。

13.根据权利要求4至12中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物被预先处理以去除包含重组细胞的废生物质和/或被预先处理以去除小的非蛋白分子。

14.根据权利要求13所述的方法,其中去除小的非蛋白分子的处理包括浓缩包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物的步骤。

15.根据权利要求13或权利要求14所述的方法,其中去除小的非蛋白分子的处理包括渗滤缓冲液。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,还包括所述分离的重组蛋白的浓缩步骤和/或渗滤处理,以产生具有优选的ph和/或离子条件的含蛋白组合物。

17.根据权利要求16所述的方法,其中具有优选的ph和/或离子条件的所述含蛋白组合物还被热处理和/或干燥。

18.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物和/或具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的所述蛋白产物还被热处理和/或干燥。

19.根据权利要求17或权利要求18所述的方法,其中所述热处理将所述重组蛋白和所述异味组分分离,其中在使得所述异味组分挥发且气态异味组分可去除的温度和持续时间施加热量。

20.根据权利要求19所述的方法,其中在施加热量的同时施加真空,并且所述真空有利于所述气态异味组分的去除。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法,其中所述异味组分是酸、醇、醛、芳族化合物、酯或酮。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法,其中所述异味组分是(e)-2-壬烯醛;1-十二烯;2-乙基-1-己醇;1-己烯-3-酮;1-辛烯-3-酮;2,3-丁二酮;2-丁酮;2-甲基丁醛;2-甲基丙醛;2-丙酮;2-十一酮;3-甲基丁醛;乙醛;苯乙醇;苯甲醇;3-甲基-丁醛;氯甲苯;壬酸;对甲酚;或2-甲基-丙酸3-羟基-2,4,4-三甲基戊酯。

23.根据权利要求17至22中任一项所述的方法,其中具有优选的ph和/或离子条件的所述含蛋白组合物、包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物和/或具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的所述蛋白产物的温度在所述热处理期间高达80℃,例如约50℃至约60℃。

24.根据权利要求17至23中任一项所述的方法,其中所述方法包括在所述热处理期间的搅拌。

25.根据权利要求17至24中任一项所述的方法,其中所述热处理和/或干燥步骤产生具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的干燥的蛋白产物。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法,其中包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物和/或具有减少的量的所述多于一种重组细胞副产物的所述蛋白产物还经历氧化步骤,例如,包括添加过氧化氢。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法,其中在包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物中,所述重组细胞副产物与重组蛋白的比例是约1:3至约3:1。

28.根据权利要求27所述的方法,其中相对于包含所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述组合物,所述蛋白产物具有eps的量和/或异味组分的量的至少25%的减少、至少30%的减少、至少35%的减少、至少40%的减少、至少45%的减少、至少50%的减少、至少55%的减少、至少60%的减少、至少65%的减少、至少70%的减少、至少75%的减少、至少75%的减少、至少80%的减少、至少90%的减少或至少95%的减少。

29.根据权利要求28所述的方法,其中所述蛋白产物的重量的少于约10%构成重组细胞副产物。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法,其中所述蛋白产物的重量的少于约5%构成重组细胞副产物。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法,其中所述蛋白产物的重量的少于约5%、少于约1%、少于约0.1%或少于约0.01%构成所述异味组分。

32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法,其中所述蛋白产物中的所述异味组分对于标准消费者实际上是检测不到的。

33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法,其中当使用尺寸排阻色谱法时,所述eps通常与所述重组蛋白不可分离。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法,其中所述eps天然是重组细胞的细胞壁的组分。

35.根据权利要求1至34中任一项所述的方法,其中根据尺寸排阻色谱柱表征,所述eps具有约13kda至约27kda的表观尺寸。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法,其中所述eps包含甘露糖。

37.根据权利要求1至36中任一项所述的方法,其中所述eps还包含n-乙酰葡糖胺和/或葡萄糖。

38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法,其中根据与质谱联用的气相色谱分析,所述eps包含约91mol%甘露糖、约5mol%n-乙酰葡糖胺和约3mol%葡萄糖。

39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法,其中所述eps包含具有α(1,2)-连接的支链和/或α(1,3)-连接的支链的α(1,6)-连接的主链。

40.根据权利要求1至39中任一项所述的方法,其中所述eps是甘露聚糖。

41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法,其中表达所述重组蛋白和所述多于一种重组细胞副产物的所述重组细胞选自真菌细胞、细菌细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞,所述真菌细胞诸如丝状真菌或酵母。

42.根据权利要求1至41中任一项所述的方法,其中所述重组细胞类型选自阿氏酵母属物种(arxula spp.)、解腺嘌呤阿氏酵母(arxula adeninivorans)、克鲁维酵母属物种(kluyveromyces spp.)、乳酸克鲁维酵母(kluyveromyces lactis)、法夫驹形氏酵母(komagataella phaffii)、毕赤酵母属物种(pichia spp.)、安格斯毕赤酵母(pichiaangusta)、巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)、酵母属物种(saccharomyces spp.)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母属物种(schizosaccharomyces spp.)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomyces pombe)、耶氏酵母属物种(yarrowia spp.)、解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)、蘑菇属物种(agaricus spp.)、双孢蘑菇(agaricusbisporus)、曲霉属物种(aspergillus spp.)、泡盛曲霉(aspergillus awamori)、烟曲霉(aspergillus fumigatus)、构巢曲霉(aspergillus nidulans)、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillus oryzae)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、炭疽菌属物种(colletotrichum spp.)、胶孢炭疽菌(colletotrichum gloeosporiodes)、内座壳属物种(endothia spp.)、寄生内座壳(endothia parasitica)、大肠杆菌(escherichia coli)、镰孢属物种(fusarium spp.)、禾谷镰孢(fusarium graminearum)、腐皮镰孢(fusariumsolani)、毛霉属物种(mucor spp.)、米黑毛霉(mucor miehei)、微小毛霉(mucorpusillus)、毁丝霉属物种(myceliophthora spp.)、嗜热毁丝霉(myceliophthorathermophila)、脉孢菌属物种(neurospora spp.)、粗糙脉孢菌(neurospora crassa)、青霉属物种(penicillium spp.)、沙门柏干酪青霉(penicillium camemberti)、变灰青霉(penicillium canescens)、产黄青霉(penicillium chrysogenum)、埃默森青霉(踝节菌)(penicillium(talaromyces)emersonii)、绳状青霉(penicillium funiculosum)、产紫青霉(penicillium purpurogenum)、娄地青霉(penicillium roqueforti)、侧耳属物种(pleurotus spp.)、糙皮侧耳(pleurotus ostreatus)、假单胞菌属物种(pseudomonasspp.)、根毛霉属物种(rhizomucor spp.)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)、微小根毛霉(rhizomucor pusillus)、根霉属物种(rhizopus spp.)、少根根霉(rhizopus arrhizus)、少孢根霉(rhizopus oligosporus)、米根霉(rhizopus oryzae)、木霉属物种(trichodermaspp.)、深绿木霉(trichoderma altroviride)、里氏木霉(trichoderma reesei)和绿色木霉(trichoderma vireus)。

43.根据权利要求41或权利要求42所述的方法,其中所述真菌是毕赤酵母属物种。

44.根据权利要求43所述的方法,其中所述毕赤酵母属物种是法夫驹形氏酵母或巴斯德驹形氏酵母(komagataella pastoris)。

45.根据权利要求1至44中任一项所述的方法,其中所述重组蛋白是酶、营养蛋白、食物成分或食物添加剂。

46.根据权利要求45所述的方法,其中所述酶是胃蛋白酶原或胃蛋白酶。

47.根据权利要求45所述的方法,其中所述蛋白是蛋清蛋白。

48.根据权利要求47所述的方法,其中所述蛋清蛋白是卵清蛋白(ova)、卵类黏蛋白(ovd)、卵转铁蛋白(ovt)、溶菌酶(ovl)、卵黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵清蛋白相关蛋白x或卵清蛋白相关蛋白y及其任何组合。

49.根据权利要求47或权利要求48所述的方法,其中所述蛋清蛋白具有与鸟类例如鸡、鹌鹑、火鸡、土耳其秃鹫、蜂鸟、鸭、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡或鸸鹋中天然产生的蛋清蛋白至少80%相同(例如,约85%、90%或95%相同)的序列。

50.根据权利要求1至49中任一项所述的方法,其中包含所述蛋白产物的所述可食用组合物包括食物产品、饮料产品或膳食补充剂。

51.根据权利要求50所述的方法,其中所述食物产品包括烘焙食品(例如,蛋糕、松饼、曲奇、面包、百吉圈、糕点、甜甜圈)、炒蛋、煎蛋卷、乳蛋饼、意大利面、面条、可丽饼、华夫饼、面团、面糊、曲奇面团、肉卷、肉丸、汉堡、动物饲料、水果、蔬菜、豆腐(tofu)、豆腐(beancurd)、奶酪、海鲜、肉、冰淇淋、蛋黄酱、蛋奶沙司、布丁、蛋奶酥、乳液、泡沫、蛋白酥、糖霜、甜食、棉花糖、杏仁糖、汤、调味品、酱、香料、乳制品和调味料。

52.根据权利要求50所述的方法,其中所述饮料产品包括软饮料、调味水、果汁、运动饮料、能量饮料、思慕雪、奶昔、酒精饮料(例如,葡萄酒、清酒、啤酒、烈酒)、鸡尾酒、利口酒、碳酸饮料、含咖啡因的饮料、咖啡、可可、茶、蛋奶酒和乳制品饮料。

53.根据权利要求50所述的方法,其中所述膳食补充剂包括多种维生...

【专利技术属性】
技术研发人员:阿尼凯特·凯乐兰詹·帕特奈克
申请(专利权)人:克莱拉食品公司
类型:发明
国别省市:

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