【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种利用基因工程技术、发酵技术及纯化技术生产的具有抑菌消炎、促细胞粘附及增殖作用的人vi型胶原蛋白。
技术介绍
1、麦粒肿又称针眼，睑腺炎。是人们眼科一种常见病，多发病。轻度的在早期可以用热毛巾热敷缓解疼痛并消肿，疖肿较大时就需要口服抗生素及外滴消炎眼药水等来治疗。如发现疖肿已非常严重甚至出现化脓症状则需要借助外科手段予以切除排脓。经研究发现麦粒肿是由金黄色葡萄球菌感染导致的眼科疾病。
2、胶原蛋白的免疫原性低，具有促进组织修复及止血等功效，现已被广泛地应用于食品、化妆品，生物医学材料、医疗器械及药品中。是一种公认的同人体相容性较好的蛋白。
3、vi型胶原蛋白是普遍存在的胞外基质组分，其存在于所有结缔组织中，并且经常与基底膜结合。vi型胶原蛋白在大部分结缔组织中形成复杂且广泛的珠状微纤丝网络。
4、关于vi型胶原蛋白的抑菌抗炎作用鲜有报导。综合现有的研究成果，一般认为来自vi型胶原蛋白n端或c端区域的多肽可能对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌有抗菌活性。
技术实现思路
1、专利技术人在研究中意外发现，来自vi型胶原蛋白的胶原结构域(非n端或c端区域)的一段多肽对医疗系统的常见致病菌如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及大肠杆菌均有明显抑制效果，特别是其对作为“麦粒肿”的致病因素的金黄色葡萄球菌的抑制效果甚至超过了治疗麦粒肿的一线临床用药红霉素。而且，该多肽还具有促细胞粘附及促细胞增殖效果，其有潜力被开发成既能治疗细菌性感染又能促
2、即，本专利技术包括：
3、1.一种具有抑菌作用的重组人vi型胶原蛋白，其氨基酸序列为(gyqgmkgekgsrgekgsrgpkgykgekgkrgidgvdgvkgemgypglpgckgspg)n，其中，n为大于1的自然数。所述自然数n可以小于20，优选小于10，更优选小于6，例如可以为2、3、4、5。
4、2.根据项1所述的重组人vi型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
5、seq id no：1
6、1gyqgmkgekg srgekgsrgp kgykgekgkr gidgvdgvkg emgypglpgc kgspg
7、56gyqgmkgekg srgekgsrgp kgykgekgkr gidgvdgvkg emgypglpgc kgspg
8、3.编码项1所述的重组人vi型胶原蛋白的核酸。
9、4.编码项2所述的重组人vi型胶原蛋白的核酸，优选其核苷酸序列如seq id no：2所示。
10、seq id no：2
11、1ggttaccagg gcatgaaagg tgaaaaaggc tcccgcggcg aaaaaggctc tcgtggcccgaagggctaca
12、71aaggtgaaaa aggcaaacgt ggcatcgatg gtgttgacgg cgtgaaaggc gaaatgggttacccgggtct
13、141gcctggttgc aaaggcagcc ctggtggcta tcagggtatg aaaggtgaga agggttctcgtggtgaaaaa
14、211ggttcccgtg gcccgaaggg ttacaagggc gaaaagggta aacgcggtat cgatggcgttgacggcgtta
15、281aaggtgaaat gggctacccaggtctgccgg gttgtaaagg ctctccgggc
16、5.包含项3所述的核酸的表达载体。优选地，所述表达载体为pet28a。
17、6.导入了项5所述的表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以为大肠杆菌、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母或枯草杆菌，优选大肠杆菌(例如可以为bl21(de3))。
18、7.一种生产项1所述的重组人vi型胶原蛋白的方法，其包括：培养项6所述的宿主细胞并收集细胞培养物的步骤。
19、8.根据项7所述的方法，其还包括对所述细胞培养物进行分离纯化的步骤，所述分离纯化采用等电点沉淀、盐析、醇沉、分子筛、超滤、离子交换色谱、亲和色谱及疏水色谱中的一种或几种的组合。
20、9.一种眼科外用药，其包含项1所述的重组人vi型胶原蛋白及药学可接受的载体。
21、10.根据项9所述的眼科外用药，其为眼药膏或滴眼液。
22、11.项1所述的重组人vi型胶原蛋白在制备眼科外用药中的用途。所述眼科外用药可以为例如眼药膏或滴眼液。
23、12.根据项11所述的用途，其中，所述眼科外用药用于治疗细菌引起的眼部感染，特别是金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和/或大肠杆菌引起的眼部感染。
24、根据本专利技术，所述重组人vi型胶原蛋白为全人源，生物安全性好；且生产工艺简单、产量高、可通过大肠杆菌表达系统快速大量制备，生产性能好；其具有良好的抑菌活性且具有良好的促细胞粘附及促细胞增殖活性，有潜力被开发成眼科外用药(例如滴眼液)。
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1.一种具有抑菌作用的重组人VI型胶原蛋白，其氨基酸序列为(GYQGMKGEKGSRGEKGSRGPKGYKGEKGKRGIDGVDGVKGEMGYPGLPGC KGSPG)n，其中，n为大于1的自然数，所述自然数n可以小于20，优选小于10，更优选小于6，例如可以为2、3、4、5。
2.根据权利要求1所述的重组人VI型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.编码权利要求1所述的重组人VI型胶原蛋白的核酸。
4.编码权利要求2所述的重组人VI型胶原蛋白的核酸。该核酸的核苷酸序列可以如SEQID NO：2所示。
5.包含权利要求3所述的核酸的表达载体。优选地，所述表达载体为pET28a。
6.导入了权利要求5所述的表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以为大肠杆菌、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母或枯草杆菌，优选大肠杆菌(例如可以为BL21(DE3))。
7.一种生产权利要求1所述的重组人VI型胶原蛋白的方法，其包括：培养权利要求6所述的宿主细胞并收集细胞培养物的步骤。
8.根据权利要求7所述
9.一种眼科外用药，其包含权利要求1所述的重组人VI型胶原蛋白及药学可接受的载体。优选地，所述眼科外用药可以为例如眼药膏或滴眼液。
10.权利要求1所述的重组人VI型胶原蛋白在制备眼科外用药中的用途。优选地，所述眼科外用药可以为例如眼药膏或滴眼液。优选地，所述眼科外用药用于治疗细菌引起的眼部感染，特别是金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和/或大肠杆菌引起的眼部感染。
...【技术特征摘要】
1.一种具有抑菌作用的重组人vi型胶原蛋白，其氨基酸序列为(gyqgmkgekgsrgekgsrgpkgykgekgkrgidgvdgvkgemgypglpgc kgspg)n，其中，n为大于1的自然数，所述自然数n可以小于20，优选小于10，更优选小于6，例如可以为2、3、4、5。
2.根据权利要求1所述的重组人vi型胶原蛋白，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
3.编码权利要求1所述的重组人vi型胶原蛋白的核酸。
4.编码权利要求2所述的重组人vi型胶原蛋白的核酸。该核酸的核苷酸序列可以如seqid no：2所示。
5.包含权利要求3所述的核酸的表达载体。优选地，所述表达载体为pet28a。
6.导入了权利要求5所述的表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以为大肠杆菌、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母或...
【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，唐育岐，宇文伟刚，李蕾，贾利平，严钰博，张疆睿，
申请(专利权)人：西安巨子生物基因技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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