【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法及应用。
技术介绍
1、单胺氧化酶(monoamine oxidase，mao，ec1.4.3.4)是一种膜结合线粒体酶，它主要存在于脊椎动物几乎所有的生物组织中，在神经递质代谢中起着重要的作用，单胺氧化酶有两种亚型mao-a和mao-b，其中mao-b是一种降解单胺类神经递质的重要酶类，主要作用于苯乙胺，多巴胺和苄胺等单胺类。mao-b功能障碍可引起帕金森病(pd)等多种神经和精神疾病。因此寻找有效的mao-b的检测方法对于深入理解单胺氧化酶在生物系统中的功能及单胺氧化酶相关疾病的临床诊断和治疗都具有重要意义。
2、目前，针对单胺氧化酶b的检测方法在国内外已有许多报道，包括分光光度法、紫外法、酶联免疫分析法以及放射性标记法等。这些方法大多存在灵敏度不高、选择性低的问题，其中酶联免疫分析法虽然检测速度快、灵敏度高，但操作步骤较为繁琐、特异性较低；而放射性标记法操作时还存在着一定的危险性。
3、荧光探针是一种生物信号分子传感器，其与待测物质特异性结合后，选择性的将化学信号转化为光学信号，从而通过分析荧光强度的变化而达到检测目的。该方法与上述方法比较，具有操作简单方便，合成成本低，选择性高，特异性强，生物相容性好等优点，广泛应用于医学，环境科学，生命科学等方面。近些年来，大量的用于单胺氧化酶检测的荧光探针被开发。然而，许多荧光探针存在着水溶性差，灵敏度低，发射波长短等原因。因此，开发一种简单有效的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法及应用，该探针合成方便，特异性好，灵敏度高而且具有合适的发射波长。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术第一方面在于提供一种用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针，所述荧光探针的结构式为：
4、
5、本专利技术第二方面在于提供一种如上所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，具体步骤如下：
6、(1)将异佛尔酮溶于乙醇中，依次加入丙二腈和催化剂，在氮气保护下回流，冷却至室温，静置一夜，过滤，干燥，得化合物1；
7、(2)将化合物1、对羟基苯甲醛、哌啶溶于乙醇中，在氮气保护下回流，反应结束后，进行硅胶柱色谱纯化，得化合物2；
8、(3)将4-溴吡啶溶于二氯甲烷中，再滴加碘甲烷，室温下搅拌，洗涤，得化合物3；
9、(4)将化合物2、乙醇钠溶于二氯甲烷中，搅拌后逐滴加入化合物3，室温下搅拌，反应结束后，进行硅胶柱色谱纯化，得荧光探针粗品；
10、(5)将荧光探针粗品溶于二氯甲烷中，再加入硼氢化钠，室温下搅拌，反应结束后，进行硅胶柱色谱纯化，干燥得荧光探针。
11、优选地，所述步骤(1)中，所述催化剂为吡啶和冰醋酸的混合溶剂，以摩尔比计，吡啶：冰醋酸＝1：1；冰醋酸可催化反应效率，加快反应速度。
12、优选地，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：对羟基苯甲醛＝1：1。
13、优选地，所述步骤(3)中，以摩尔比计，4-溴吡啶：碘甲烷＝1：2。
14、优选地，所述步骤(4)中，以摩尔比计，化合物2：乙醇钠：化合物3＝5：6：6。
15、优选地，所述步骤(5)中，以体积比计，荧光探针粗品：硼氢化钠＝1：4。
16、优选地，所述步骤(2)、步骤(4)、步骤(5)中，均采用乙醇与二氯甲烷的混合溶剂为洗脱剂；其中，在步骤(2)、步骤(4)中，以体积比计，乙醇：二氯甲烷＝1：100；在步骤(5)中，以体积比计，乙醇：二氯甲烷＝1：50。
17、本专利技术第三方面在于提供如上所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针在筛选单胺氧化酶b抑制剂中的应用。
18、优选地，本专利技术第三方面在于提供如上所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针在筛选中药中单胺氧化酶b抑制剂中的应用。
19、与现有技术相比，本专利技术有益效果如下：
20、(1)本专利技术的荧光探针具有较好的特异性，良好的化学稳定性和光稳定性，高灵敏度，荧光探针具有较好的细胞和组织穿透性，对细胞副作用较小；
21、(2)本专利技术荧光探针荧光发射光谱波长大，可以有效规避中药化学成分中的荧光干扰，提高检测的灵敏度，在中药有效物质筛选方面具有独特优势；
22、(3)本专利技术提供的荧光探针原料易得，操作过程简便，具有实际应用意义。
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1.一种用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式为：
2.权利要求1所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
3.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述催化剂为吡啶和冰醋酸的混合溶剂，以摩尔比计，吡啶：冰醋酸＝1：1。
4.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：对羟基苯甲醛＝1：1。
5.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，以摩尔比计，4-溴吡啶：碘甲烷＝1：2。
6.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，以摩尔比计，化合物2：乙醇钠：化合物3＝5：6：6。
7.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中，以体积比计，荧光探
8.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)、步骤(4)、步骤(5)中，均采用乙醇与二氯甲烷的混合溶剂为洗脱剂；其中，在步骤(2)、步骤(4)中，以体积比计，乙醇：二氯甲烷＝1：100；在步骤(5)中，以体积比计，乙醇：二氯甲烷＝1：50。
9.权利要求1所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针在筛选单胺氧化酶B抑制剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的用于筛选单胺氧化酶B抑制剂的荧光探针在筛选中药中单胺氧化酶B抑制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式为：
2.权利要求1所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
3.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述催化剂为吡啶和冰醋酸的混合溶剂，以摩尔比计，吡啶：冰醋酸＝1：1。
4.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以摩尔比计，化合物1：对羟基苯甲醛＝1：1。
5.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，以摩尔比计，4-溴吡啶：碘甲烷＝1：2。
6.根据权利要求2所述的用于筛选单胺氧化酶b抑制剂的荧光探针的制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：王小明，唐志新，王旭妹，吴可，蒋海强，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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