一种凝血酶时间测定试剂制备方法技术

技术编号：41215282 阅读：2 留言：0更新日期：2024-05-09 23:37

本发明专利技术公开了一种凝血酶时间测定试剂制备方法，所述制备方法包括以下步骤：S1：提取兔脑粉中复合磷脂和组织因子脱辅基蛋白，获得组织凝血活酶；S2：制备提取组织凝血活酶的提取液和缓冲液，所述缓冲液和提取液的量100mM；S3：在抗凝血酶III中加入甘氨酸、PEG2000，牛血清蛋白，黄原胶作为原料,五者的含量依次为5‑15U/mL、5‑15％、5‑12％和0.05‑0.5％3.5‑5.5％,制备稳定剂；S4：将上述混合液用0.20‑0.30微米滤网过滤，在滤液中加入凝血酶冻干制剂，使滤液中凝血酶的浓度为25‑35U/ml，得到凝血酶时间测定试剂。本发明专利技术能够使制备所得的凝血酶冻干测定试剂易溶于水，无吸湿性，干燥速度快，凝血因素更具活性，提高凝血因子的敏感性，使得测定试剂检测结果更为真实、准确。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及临床诊断，尤其涉及一种凝血酶时间测定试剂制备方法。

技术介绍

1、凝血功能是指血浆中的可溶性纤维蛋白原转变不溶性的纤维蛋白的过程，是在凝血酶的参与下完成的。凝血酶是凝血酶原经激活后产生的蛋白水解酶，其中，人体内酶原的激活是在凝血因子xa的催化下，在血小板表面进行的，需要因子va、ca2+的参与。在激活过程中，凝血酶原在arg273与thr274之间，arg322与ile323之间的肽键水解后，转变成有活性的α型凝血酶。

2、凝血酶时间tt测定试剂，目前基本上为冻干试剂，冻干实际便于运输，保质期也比较长，目前市面上存在的冻干的凝血酶时间测定试剂其在实际使用时存在着一定的缺陷，冻干外形不均匀，复溶后不均质，严重时还有沉淀，影响试剂品质，影响结果检测的准确性。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。

2、鉴于上述现有一种凝血酶时间测定试剂制备方法存在的问题，提出了本专利技术。

3、因此，本专利技术目的是提供一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其适用于解决复溶后不均质，严重时还有沉淀，影响试剂品质的问题。

4、为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种凝血酶时间测定试剂制备方法，所述制备方法包括以下步骤：</p>

5、s1：提取兔脑粉中复合磷脂和组织因子脱辅基蛋白，获得组织凝血活酶；

6、s2：制备提取组织凝血活酶的提取液和缓冲液，所述缓冲液和提取液的量100mm；

7、s3：在抗凝血酶iii中加入甘氨酸、peg2000，牛血清蛋白，黄原胶作为原料,五者的含量依次为5-15u/ml、5-15％、5-12％和0.05-0.5％3.5-5.5％,制备稳定剂；

8、s4：将上述混合液用0.20-0.30微米滤网过滤，在滤液中加入凝血酶冻干制剂，使滤液中凝血酶的浓度为25-35u/ml，得到凝血酶时间测定试剂。

9、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：所述提取兔脑粉中复合磷脂和组织因子脱辅基蛋白，包括以下步骤：

10、①：将兔脑粉除去软脑膜和血管网，用生理盐水洗净，置于乳钵中研碎；

11、②：将新鲜的兔脑剥去血管和脑膜，用生理盐水清洗后绞碎；

12、③：使用清洗液洗涤5-6次，然后水洗2-3次，最后进行冻干；

13、④：将洗涤后的兔脑放入预冷的冻干机中，控制温度-30℃，预冷5h；控制温度-20℃，冻干18-24h；升温至-10℃，冻干2-4h；升温至0℃，冻干1-2h；升温至10℃，冻干2-4h；冻干完成后分装并放入干燥剂然后充氮气-20℃保存。

14、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：所述清洗液的成分为氯化钠0.01-2％、乙二胺四乙酸0.001-0.1％和防腐剂0.01-0.1％，余为水。

15、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：所述防腐剂的主要成分为pc-300。

16、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：在步骤所述s2中，所述提取液的配方为柠檬酸三钠、氯化钠、pc-300，三者的百分比含量为40％、30％和30％，所述缓冲液的配方为hepes、pc300、氯化钙和吐温，五者的百分比含量为40％、15％、15％和30％。

17、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：所述缓冲液中还加入少量的甘露醇，所述甘露醇的百分比含量为5％-15％。

18、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：在步骤所述s1中，制备所得的测定试剂以100mm、ph7.2-7.5和缓冲液配置而成。

19、作为本专利技术所述一种凝血酶时间测定试剂制备方法的一种优选方案，其中：所述缓冲液的ph为7.5-7.9。

20、本专利技术的有益效果：相比于传统的凝血酶时间测定试剂，通过甘露醇、特殊提取液和特殊缓冲液的加入，能够使制备所得的凝血酶冻干测定试剂易溶于水，无吸湿性，干燥速度快，凝血因素更具活性，化学稳定性好，提高凝血酶测定试剂品质，稳定剂的加入，提高了凝血酶时间测定试剂稳定性以及复溶稳定性均较好，hepes和甘氨酸为缓冲液作为缓冲液的组成成分，能够提高凝血因子的敏感性，使得测定试剂检测结果更为真实、准确。

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【技术保护点】

1.一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述提取兔脑粉中复合磷脂和组织因子脱辅基蛋白，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述清洗液的成分为氯化钠0.01-2％、乙二胺四乙酸0.001-0.1％和防腐剂0.01-0.1％，余为水。

4.根据权利要求3所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述防腐剂的主要成分为PC-300。

5.根据权利要求1所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：在步骤所述S2中，所述提取液的配方为柠檬酸三钠、氯化钠、PC-300，三者的百分比含量为40％、30％和30％，所述缓冲液的配方为HEPES、PC300、氯化钙和吐温，五者的百分比含量为40％、15％、15％和30％。

6.根据权利要求5所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述缓冲液中还加入少量的甘露醇，所述甘露醇的百分比含量为5％-15％。

8.根据权利要求5所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述缓冲液的PH为7.5-7.9。

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【技术特征摘要】

1.一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述提取兔脑粉中复合磷脂和组织因子脱辅基蛋白，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：所述防腐剂的主要成分为pc-300。

5.根据权利要求1所述的一种凝血酶时间测定试剂制备方法，其特征在于：在步骤所述s2中，所述提...

【专利技术属性】
技术研发人员：左方婷，
申请(专利权)人：江苏鸿禧生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：

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